AnteoBind™シリーズのLuminex®用試薬であるAnteoBind™ Activation Kit Multiplex Microspheresは、共有結合を原理とする既存の架橋剤とは異なり、Ready-to-use(調製済み溶液タイプ)の金属錯体ベース分子接着剤です。Luminex® ビーズ（MagPlex® や MicroPlex® など）と多様な生体分子（抗原、抗体、ウイルス粒子など）との間で配位結合を形成し、両者を強固に結合させます。作製した生体分子固定化ビーズは、Luminex® システムを用いたアッセイにご利用いただけます。
生体分子固定化Luminex用ビーズの最終応用例：
Luminex xMAP® テクノロジーを用いたシングルプレックス（単一検出）またはマルチプレックス（多項目同時検出）アッセイ
| 【従来の共有結合法(EDC/NHS、マレイミド、トシル等)や その他固定化方法にお悩みの方】 |
【AnteoBind™ならこう変わる！】 | |
| 性能 | ![[チェックマーク]](/product/uploads/detail_images/icon_checkmark_02.gif){kind=icon} 配向性の制御困難・非特異的反応原理上固定化できない生体分子がある |
→配向性改善！感度向上と生体分子量削減を両立し、コスト削減に貢献！ →既存法では扱えなかった生体分子の成功事例多数！マルチでの固定化も可能！ |
| 仕様 | 保存安定性が悪い(-80℃防湿保存、数ヶ月)、使用直前に調製担体活性〜生体分子固定までを一気に処理する必要がある余剰分は基本廃棄 |
→長期安定、調製済の溶液タイプ、室温※で2年保存可！ →担体活性化後1年以上保存可！ →廃棄物削減(必要量だけご使用可)！ |
| 取扱 | 製造工程の管理困難ワークフローの労力と時間を削減したい |
→工程管理を数値化可能・ロット間の再現性改善！ISO9001取得済！ →シンプルなワークフロー、処理時間削減！ |
※AnteoBinid™そのものは室温保存可能ですが、
キットに含まれるバッファーは冷蔵保存となります。
※従来の架橋剤では固定化が難しかった生体分子の実績多数
※上記は実績の一例ですが、ご利用いただける担体と生体分子に相性がある場合がございます。ご自身で反応条件などを最適化していただき、お試しください。
Luminex® MagPlex®またはMicroPlex® Microspheres
AnteoBind™は「担体表面の活性化」と「生体分子の固定化」の2ステップから構成されます。「担体表面の活性化」では、担体表面の官能基（カルボキシル基など）に対して、多価金属錯体であるAnteoBind™が複数の配位結合を形成します。続く「生体分子の固定化」では、生体分子側の配位性官能基(ヒスチジン残基のイミダゾール環など)がAnteoBind™と配位結合を形成することで、担体と生体分子の複合体が構築されます(Hisタグタンパク質の精製原理と同様)。
抗体を担体に固定化する際、代表的な架橋法：EDC/NHS法（共有結合）では抗体の各所に存在するリジン残基を標的とします。その結果、抗体が適切に機能する向き（配向性）がランダムになり、十分なシグナルを得るために大量の抗体を固定化する必要が生じる上、抗原結合部位が失活しやすい点が課題でした。一方AnteoBind™は、抗体のFc部位に多く含まれるヒスチジン残基などを主なターゲットとします。これにより、抗原結合部位の機能を保持した配向制御が可能となり、使用する抗体量を削減しながらも検出感度を大幅に向上させることができます。さらに従来の架橋剤に比べて取り扱いが容易な点も大きな特長です。
図1: AnteoBind™の固定化原理イメージ
図2: AnteoBind™で活性化させた金ナノ粒子表面のTEM画像
金ナノ粒子表面には約2nmのAnteoBind™が被覆され、次のステップである生体分子固定化の足掛かりとなります。
図3：AnteoBind™のプロトコール
【キット構成品】
| 構成品 | 品番 | 対象ステップ |
|---|---|---|
| AnteoBind™ Activation Reagent | A-CMPARA1 | ステップ 1 (活性化) |
| Conjugation Buffer (pH 5.2) | A-CMPCBB1 | ステップ 2 & 3 (固定化・ブロッキング) |
| Storage Buffer | A-CMPSBB1 | ステップ 4 (保存) |
【キットに含まれないもの】
【必要な機器】
精神疾患やがん分野で注目されるポリシアル酸は、負電荷を持つシアル酸が直鎖状に連なった糖鎖です。従来は、ポリ-L-リジンなどを担体に前処理（下地修飾）した上で、受動吸着によりポリシアル酸を固定化していましたが、工程のコストや手間、非特異結合によるバックグラウンドノイズの発生が課題となっていました。 AnteoBind™（Activation Kit Multiplex Microspheres）を使用すれば、こうした前処理工程を経ることなく、ポリシアル酸を担体へダイレクトに配位結合で固定化できます。さらに、非特異結合を抑えつつ高いシグナルが得られることが証明されました。このようにAnteoBind™は、従来の固定化法では難しかった多糖類・糖鎖などの生体分子に対しても非常に有効なツールとなります。
図4: Luminexローディングアッセイにおけるポリシアル酸-MagPlex間の固定化方法比較
(青)受動結合 (赤)AnteoBind™(Activation Kit Multiplex Microspheres)
反応物が一つでも欠けるとシグナルに有意な差が見られることから、非特異反応が低いことが示された。また反応物が全て揃っている場合、受動結合よりもAnteoBind™の反応の方が高かった。
MagPlex® 推奨の固定化法（EDC/sNHS法）と AnteoBind™（Activation Kit Multiplex Microspheres）を用い、3種類の生体分子（150 kDa IgG、50 kDa タンパク質、細菌性LPS）を MagPlex® ビーズへ固定化し、Luminex® アッセイに必要な生体分子の要求量を比較しました。その結果、推奨法と同等のアッセイ性能を得るために必要な生体分子量を 50%〜95% 削減可能であった。さらに、ビーズ活性化後70日間にわたり、一貫した安定性と優れたシグナル品質を維持した。
図5: タンパク質導入量に応じたLuminexアッセイにおける蛍光強度比較
(上)150kDa IgGタンパク質：200→10pmolに削減。粒子活性化70日後も非特異反応未確認
(中)50kDaタンパク質：200→100pmolに削減。粒子活性化70日後も非特異反応未確認
(下)細菌性LPS：5→1.25 μgに削減。最小導入量において非特異反応未確認
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 | 在庫 |
|---|---|---|---|---|---|
Activation Kit Multiplex Microspheres (10 reactions)   |
ATT | A-LMPAKMM-10 | 1 ML [10 reactions] |
￥69,000 | なし |
| Activation Kit Multiplex Microspheres (40 reactions) |
ATT | A-LMPAKMM-40 | 4 ML [40 reactions] |
￥207,000 | なし |
※10reactionsあるいは40reactionsの2サイズのご用意がございます 。標準的な1reactionは「125万個のマイクロ粒子の処理」と定義されていますが 、1reactionあたり 62.5万個〜1,250万個のスケール範囲で柔軟にご使用いただけます。
商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。
※ 表示価格について
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