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α-Synuclein の凝集体形成を細胞内で再現 α-シヌクレイン凝集アッセイキット

α-シヌクレイン凝集アッセイキットは、α-シヌクレインの凝集体形成を細胞内で再現するモデルであり、in vitro における有効成分のスクリーニングが可能です。

※本製品は東京都医学総合研究所脳・神経科学研究分野長谷川成人先生、野中隆先生からのライセンス品です。

コスモ・バイオ自社ラボ製品・受託サービスカタログ

［関連情報］

総説：αシヌクレインのシード依存的な細胞内蓄積モデル
　- 東京都医学総合研究所認知症プロジェクト野中隆先生
α-シヌクレイン抗体［CAC］
　- 主にパーキンソン病(PD)、レビー小体型認知症(DLB)、多系統萎縮症(MSA) 研究に

背景

認知症とは記憶や判断力に障害が起こる病気で、高齢者人口が急速に増加している我が国では認知症予備軍を含めおよそ 800 万人の方々が苦しめられています。しかしながら、いまだに根本的な治療法は見つかっていません。長年の研究により、認知症を含む多くの神経変性疾患では、脳などの変性部位にある種のタンパク質から成る固まり（凝集体）が認められ、凝集体の出現が病気の発症や進行と密接に関係していることが分かってきました。

凝集体とは、正常なタンパク質が何かのきっかけで異常な構造になり細胞内で蓄積したものです。また病気毎に蓄積するタンパク質も異なります。パーキンソン病、レビー小体型認知症および多系統萎縮症の患者脳では、α-シヌクレインというタンパク質が細胞内で構造変化を起こし、凝集体を形成することが知られています。

構成内容

本製品はデータシート記載の調製方法で実施した場合、24 ウェルプレートで 300 ウェル分の試薬量となります。
本製品のプラスミドベクターは ATUM社で合成した商品を使用しています。

内容	容量	数量
pCMV-SNCA （α-シヌクレイン発現プラスミドベクター、赤キャップ）	32 μL （濃度: 1.25 μg/μL）	1 本
pCMV-NC （ネガティブコントロールベクター、緑キャップ）	5 μL （濃度: 1.25 μg/μL）	1 本
pCMV-dGFP （dGFP 発現プラスミドベクター、青キャップ）	5 μL （濃度: 1.25 μg/μL）	1 本
20 mM Tris-HCl Buffer （pH7.4）	10 mL	1 本
F-αSyn （α-シヌクレイン線維化タンパク質、黄キャップ）	32 μL （濃度: 1 μg/μL）	1 本
MultiFectam （遺伝子導入試薬）	0.33 mg	1 本

ご準備いただくもの（その他必要なもの）

アッセイ用細胞株（推奨： SH-SY5Y）
培養用培地（推奨： DE/F-12、10％ FBS、1％ NEAA）
Opti-MEM® または無血清培地（ThermoFisher Scientific： 31985062 等をご用意ください）
滅菌済み精製水（DNase, RNase フリー）

シヌクレイン凝集体の検出実験例

1. ウェスタンブロット法による評価

各種シヌクレイン抗体を用いて、ウェスタンブロットによる検出が可能です。

実験条件（例）

培養液除去
1 mL PBS をウェルに加えて，ピペッティングにて細胞を回収
4,500 rpm，5 分間遠心，細胞ペレットを回収
0.1 mL Lysis Buffer（10 mM Tris-HCl, pH 7.5 containing 0.8 M NaCl, 1 mM ethyleneglycol bis(2-aminoethyl ether)-N,N,N,N-tetraacetic acid (EGTA), 1 mM DTT and 1% N-Lauroylsarcosine sodium salt）を加えて，ソニケーション
50,000 rpm（100,000 x g）x 20 分間遠心，室温
沈殿に20 μL 2 x SDS Buffer（0.125 M Tris-HCl pH6.8, 200 mM 1,4 dithiothreitol (DTT), 4% sodium dodecyl sulfate(SDS), 10% Sucrose, 0.01% BPB）を加えてソニケーション，100 度，5 分間加熱，5 μL アプライ

（画像はクリックで拡大されます）

図1　ウェスタンブロット法によるシヌクレイン凝集体の検出実験例
A. pCMV-NC（ネガティブコントロールベクター）
B. pCMV-SNCA（α-シヌクレイン発現プラスミドベクター）
C. pCMV-SNCA + F-αSyn（α-シヌクレイン導入）

2. アミロイド構造蛍光染色キットを用いた検出

アミロイド構造蛍光染色キット（品番SYN02）を用いて、凝集沈着したα-シヌクレインおよび核の2重染色が可能

（画像はクリックで拡大されます）

α-シヌクレイン凝集アッセイキット

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
α-シヌクレイン凝集アッセイキット / α-Synuclein Aggregation Assay Kit	CSR	SYN01	1 KIT [300 test]	￥92,000

【関連商品】アミロイド構造蛍光染色キット

［構成内容］

アミロイド構造蛍光染色液　100 μL × 1本
核染色液　100 μL × 1本
蛍光増強剤　5 g × 1本

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
アミロイド構造蛍光染色キット / Amyloid Fluorescent Staining Kit	CSR	SYN02	1 KIT [100 test]	￥66,000

【関連商品】α-シヌクレイン線維化タンパク質　ヒト・マウス

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品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
α-シヌクレイン線維化タンパク質(ヒト型) / α-Synuclein Fibrils , Human, Human	CSR	SYN03	0.1 MG	￥100,000
α-シヌクレイン線維化タンパク質(マウス型) / α-Synuclein Fibrils, Mouse	CSR	SYN05	0.1 MG	￥100,000

品番：SYN03およびSYN05はNaN3を含みません。

【関連商品】α-シヌクレインリコンビナントタンパク質　ヒト・マウス

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品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
α-シヌクレインリコンビナントタンパク質（ヒト型） / α-Synuclein, recombinant, Human	CSR	SYN04	0.1 MG	￥30,000
α-シヌクレインリコンビナントタンパク質（ヒト型） / α-Synuclein, recombinant, Human	CSR	SYN04	1 MG	￥90,000
α-シヌクレインリコンビナントタンパク質（マウス型） / α-Synuclein, recombinant , Mouse	CSR	SYN06	0.1 MG	￥30,000
α-シヌクレインリコンビナントタンパク質（マウス型） / α-Synuclein, recombinant , Mouse	CSR	SYN06	1 MG	￥90,000