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記事ID : 35371
研究用

NADP/NADPHの比率を比色/蛍光検出Amplite™ NADP / NADPH Ratio アッセイ(比色/蛍光)

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Amplite™比色NADP / NADPH比アッセイは、細胞内のNADP+ / NADPH総量、および培養細胞中のNADP+ / NADPH比を決定するための高感度な検出キットです。

Amplite™蛍光NADP / NADPH Ratioアッセイは、独自のNADP+ / NADPHセンサー(酵素サイクリング反応を介してNADP+ / NADPHを特異的に認識する酵素システム)を利用して、サンプル中のNADP+ / NADPH総量、およびNADP+ / NADPH比を決定するための高感度な検出キットです。

特長

  • 96ウェルまたは384ウェルのマイクロタイタープレートに対応
  • 比色:高感度
  • 蛍光:高感度 低干渉
  • 分析機器:吸光マイクロプレートリーダー( 460 nm )
    または蛍光マイクロプレートリーダー(Ex/Em =540/590 nm)

構成内容

比色

  • Component A: NADP/NADPH Recycling Enzyme Mix, 2 bottles (lyophilized powder)
  • Component B-I: NADPH Probe, 1 bottle (4 mL)
  • Component B-II: NADPH Probe Buffer, 1 bottle (16 mL)
  • Component C: NADPH Standard, 1 vial (167 µg)
  • Component D: NADPH Extraction Solution, 1 bottle (10 mL)
  • Component E: Neutralization Solution, 1 bottle (10 mL)
  • Component F: Extraction Control Solution, 1 bottle (10 mL)
  • Component G: Lysis Buffer, 1 bottle (10 mL)

蛍光

  • Component A: NADP/NADPH Recycling Enzyme Mix, 2 bottles (lyophilized powder)
  • Component B: NADPH Sensor Buffer, 1 bottle (20 mL)
  • Component C: NADPH Standard, 1 vial (167 µg)
  • Component D: NADPH Extraction Solution, 1 bottle (10 mL)
  • Component E: NADP Extraction Solution, 1 bottle (10 mL)
  • Component F: NADP/NADPH Control Solution, 1 bottle (10 mL)
  • Component G: NADP/NADPH Lysis Buffer, 1 bottle (10 mL)

測定原理

測定原理

プロトコール概要

比色

  1. NADPHスタンダード及びテストサンプルの調整
  2. NADPH抽出試薬の添加
  3. 室温で15分インキュベート
  4. 中和試薬を添加
  5. NADP/NADPHワーキング試薬を添加
  6. 室温で15分-2時間インキュベート
  7. 吸光度を460 nmで測定

蛍光

  1. NADPHスタンダード及びテストサンプルの調整
  2. NADPHまたはNADP抽出試薬の添加
  3. 室温で15分インキュベート
  4. NADPまたはNADPH抽出試薬を添加
  5. NADP/NADPHワーキング試薬を添加
  6. 室温で15分-2時間インキュベート
  7. 蛍光強度をEx/Em = 540/590 nm (Cutoff = 570 nm)で測定

製品データ

Amplite™ 比色NADP/NADPH Ratioアッセイキット(品番15274)

アッセイキットを用いたNADP / NADPH比の測定
図.1 Amplite™比色NADP/NADPH比 アッセイキットを用いたNADP / NADPH比の測定
96ウェル白色クリアボトムプレート使用
分析機器:SpectraMax(R)マイクロプレートリーダー(Molecular Devices)測定波長:460 nm
等量のNADPおよびNADPH混合物に、NADPH抽出溶液を15分間処理したサンプルと未処理のサンプルを比較した。(その後抽出液は、室温で中和した。)
NADP/NADPH比は、図に示される吸光度に基づいて計算された。

Amplite™ 蛍光NADP/NADPH Ratio アッセイキット(品番15264)

トータルNADP/NADPHとその抽出物の用量反応測定
図.2 Amplite™蛍光NADP/NADPH Ratioアッセイキットを用いたトータルNADP/NADPHとその抽出物の用量反応測定
96ウェルブラックプレート使用/ 分析機器:Geminiマイクロプレートリーダー(BMG Labtech)
25 µL等量のNADPおよびNADPH混合物に、NADPHまたはNADP抽出溶液を15分間処理したサンプルと未処理のサンプルを比較した。その後抽出液は室温で中和し、75 µLのNADPH反応混合物を添加し、30分後にシグナルをEx/Em = 540/590 nm(570 nm cutoff)で得た。
(注:蛍光バックグラウンドは時間と共に増加するので、各データポイントについてブランクウェルの蛍光強度値を差し引くことが重要である)。

参考文献

  1. Peralta D et al., A proton relay enhances H2O2 sensitivity of GAPDH to facilitate metabolic adaptation. Nat Chem Biol. 2015 (品番:15264)
  2. Gaschler MM et al., FINO2 Initiates Ferroptosis Through GPX4 Inactivation and Iron Oxidation. Nat Chem Biol. 2018 (品番:15264)

Amplite™ NADP / NADPH比アッセイ(比色)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
AmpliteTM Colorimetric NADP/NADPH Ratio Assay Kit詳細データ ABD 15274 1 KIT
[250 Tests]
¥72,000

Amplite™ NADP / NADPH比アッセイ(蛍光)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
AmpliteTM Fluorimetric NADP/NADPH Ratio Assay Kit *Red Fluorescence*詳細データ ABD 15264 1 KIT
[250 Tests]
¥72,000

【関連情報】

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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