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NADPおよびNADPHの全体量を比色/蛍光検出 Amplite™ トータルNADP / NADPHアッセイ（比色/ 蛍光）

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メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

Amplite™ トータルNADPおよびNADPHアッセイは、溶液および細胞抽出液中のNADP+ / NADPHを簡便かつ高感度に測定するキットです。

背景

原理

本アッセイは、独自のNADP+ / NADPHプローブ（酵素サイクリング反応を介してNADP+ / NADPHを特異的に認識する酵素システム）を利用して、サンプル中のNADP+ / NADPH総量を高感度に検出します。比色アッセイで使用されるNADP+ / NADPHプローブは、NADP+ / NADPHの減少時に575 nmでその最大吸光度を有する発色センサーであり、NADP+ / NADPHプローブの吸収は、溶液中のNADP+ / NADPHの濃度に比例します。また蛍光アッセイで用いるNADP+ / NADPHセンサーがNADP+ / NADPHと結合すると赤色の蛍光を生じます。蛍光強度の増加は、溶液中のNADP+ / NADPHの濃度に比例します。

特長

96ウェルまたは384ウェルのマイクロタイタープレートに対応
溶液除去や分離操作不要
高感度：比色(100nMのNADP+ / NADPHを検出) / 蛍光(10 nM～のNADP+ / NADPHを検出)
検出波長：比色( 575 ± 5 nm または吸光度比：A570 nm/A605 nm) / 蛍光（Ex/Em =540/590 nm）

構成内容

比色

Component A: NADP/NADPH Recycling Enzyme Mix, 2 bottle (lyophilized Powder)
Component B: NADPH Sensor Assay Buffer, 1 bottle (20 mL)
Component C: NADPH Standard, 1 vial (167 µg, lyophilized )

蛍光

Component A: NADP/NADPH Recycling Enzyme Mix, 2 bottles (lyophilized powder)
Component B: NADPH Sensor Assay Buffer, 1 bottle (20 mL)
Component C: NADPH Standard, 1 vial (167 µg)

プロトコール概要

NADPHワーキング試薬の調整
NADPHスタンダード及びテストサンプルの添加
室温で15分-2時間インキュベートIncubate at room temperature for 15 minutes to 2 hours
比色：吸光度を 575 ± 5 nmで測定
蛍光：蛍光強度 Ex/Em = 540/590 nmで測定

製品データ

Amplite™ 比色トータルNADP/NADPHアッセイキット（品番15260）

図.1 Amplite™ 比色トータルNADP/NADPHアッセイキットを用いたNADPHの用量反応測定
96ウェル白色クリアボトムプレート使用/ インキュベーション時間：1時間
NOVOStarマイクロプレートリーダー（BMG Labtech）
NADHには反応を示さず、100 nM (10 pmol/well)のNADPHを検出した(n=3)。

図.2 Amplite™ 蛍光トータルNADP/NADPHアッセイキットを用いたNADPHの用量反応測定
96ウェルブラックプレート使用/ インキュベーション時間：30分
分析機器：NOVOStarマイクロプレートリーダー（BMG Labtech）
NADHには反応を示さず、10 nM（1 pmol/well）のNADPHを検出した(n=3)。