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記事ID : 35370
研究用

NADPおよびNADPHの全体量を比色/蛍光検出Amplite™ トータルNADP / NADPHアッセイ(比色/ 蛍光)

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Amplite™ トータルNADPおよびNADPHアッセイは、溶液および細胞抽出液中のNADP+ / NADPHを簡便かつ高感度に測定するキットです。

背景

原理

本アッセイは、独自のNADP+ / NADPHプローブ(酵素サイクリング反応を介してNADP+ / NADPHを特異的に認識する酵素システム)を利用して、サンプル中のNADP+ / NADPH総量を高感度に検出します。比色アッセイで使用されるNADP+ / NADPHプローブは、NADP+ / NADPHの減少時に575 nmでその最大吸光度を有する発色センサーであり、NADP+ / NADPHプローブの吸収は、溶液中のNADP+ / NADPHの濃度に比例します。また蛍光アッセイで用いるNADP+ / NADPHセンサーがNADP+ / NADPHと結合すると赤色の蛍光を生じます。蛍光強度の増加は、溶液中のNADP+ / NADPHの濃度に比例します。

特長

  • 96ウェルまたは384ウェルのマイクロタイタープレートに対応
  • 溶液除去や分離操作不要
  • 高感度:比色(100nMのNADP+ / NADPHを検出) / 蛍光(10 nM〜のNADP+ / NADPHを検出)
  • 検出波長:比色( 575 ± 5 nm または吸光度比:A570 nm/A605 nm) / 蛍光(Ex/Em =540/590 nm)

構成内容

比色

  • Component A: NADP/NADPH Recycling Enzyme Mix, 2 bottle (lyophilized Powder)
  • Component B: NADPH Sensor Assay Buffer, 1 bottle (20 mL)
  • Component C: NADPH Standard, 1 vial (167 µg, lyophilized )

蛍光

  • Component A: NADP/NADPH Recycling Enzyme Mix, 2 bottles (lyophilized powder)
  • Component B: NADPH Sensor Assay Buffer, 1 bottle (20 mL)
  • Component C: NADPH Standard, 1 vial (167 µg)

プロトコール概要

  1. NADPHワーキング試薬の調整
  2. NADPHスタンダード及びテストサンプルの添加
  3. 室温で15分-2時間インキュベートIncubate at room temperature for 15 minutes to 2 hours
  4. 比色:吸光度を 575 ± 5 nmで測定
    蛍光:蛍光強度 Ex/Em = 540/590 nmで測定

製品データ

Amplite™ 比色トータルNADP/NADPHアッセイキット(品番15260)

NADPHの用量反応測定
図.1 Amplite™ 比色トータルNADP/NADPHアッセイキットを用いたNADPHの用量反応測定
96ウェル白色クリアボトムプレート使用/ インキュベーション時間:1時間
NOVOStarマイクロプレートリーダー(BMG Labtech)
NADHには反応を示さず、100 nM (10 pmol/well)のNADPHを検出した(n=3)。

NADPHの用量反応測定
図.2 Amplite™ 蛍光トータルNADP/NADPHアッセイキットを用いたNADPHの用量反応測定
96ウェルブラックプレート使用/ インキュベーション時間:30分
分析機器:NOVOStarマイクロプレートリーダー(BMG Labtech)
NADHには反応を示さず、10 nM(1 pmol/well)のNADPHを検出した(n=3)。

Amplite™ トータルNADP / NADPHアッセイ(比色)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
AmpliteTM Colorimetric Total NADP and NADPH Assay Kit詳細データ ABD 15260 1 KIT
[400 Tests]
¥62,000

Amplite™ トータルNADP / NADPHアッセイ(蛍光)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
AmpliteTM Fluorimetric Total NADP and NADPH Assay Kit *Red Fluorescence*詳細データ ABD 15259 1 KIT
[400 Tests]
¥62,000

【関連商品】Amplite™ トータルNADP/NADPHアッセイ 比色 *Enhanced Sensitivity*

測定波長:460 nm

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
AmpliteTM Colorimetric Total NADP and NADPH Assay Kit *Enhanced Sensitivity*詳細データ ABD 15276 400 TEST
¥62,000

【関連情報】

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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