記事ID ： 17671

生細胞内のオートファジーを検出・モニターオートファジーアッセイキット（赤色蛍光）

メーカー名：Immunochemistry Technologies, LLC

オートファジーアッセイキット（赤色蛍光）は、生細胞内でのオートファジーを in vitro で検出・モニターできるキットです。

本キットで用いるオートファジープローブは細胞膜透過性で、オートファゴソームおよびオートリソソームの脂質膜に挿入されると、赤色の蛍光を発します。結果はフローサイトメトリーを使用して検出します。

背景

オートファジー

オートファジーは、細胞がタンパク質、脂質、炭水化物などの自己成分を分解することによる、保存されたリソソームのリサイクルプロセスです。このプロセスは、恒常性の維持や細胞内の病原体の分解に、重要な役割を果たしています。また、オートファジーは、飢餓やストレスに応じて強く誘導され、細胞に栄養素を提供します。オートファジーの調節不全は、癌、感染症、変性疾患などの多くの疾患に関連しています。

オートファジーは、3段階のプロセスです。まず、分解の標的となる細胞質成分が隔離され、オートファゴソームを形成します。次に、オートファゴソームはリソソームと融合し、オートファゴリソソームまたはオートリソソームを形成します。最後に、オートファゴソームの内容物の分解が起こります。

図1　オートファジーの細胞プロセス

仕様

励起／蛍光： 590 nm / 620 nm
分析方法：フローサイトメーター
サンプルの種類：培養細胞

製品データ

製品データ
図2
Jurkat 細胞を 0.5 µM ラパマイシンおよび 10 µM クロロキン（赤のヒストグラム）、または mock（黒のヒストグラム）で18時間処理し、オートファジーを誘導した。細胞をオートファジープローブで染色し（37℃、1時間）、洗浄後、BD Biosciences社の BD Fortessa Special Order Flow Cytometer（緑色／黄色レーザー（561 nm 励起）および 610/20 蛍光フィルター）を用いて解析した。オートファジーを誘導した細胞（10,530）では、Mock 処理した細胞（3, 497）と比較して、蛍光強度の中央値が３倍高い。
データ提供： Dr. Strandberg, ICT, 228:16-20