scAAV ヘルパーフリー発現システム

セルバイオラボ社のAAVヘルパーフリー発現システムは、リコンビナントヒトAAVウイルス粒子をヘルパーウイルスなしで作製するシステムです。本システムでは、感染性AAV 粒子の生産に必要なアデノウイルス遺伝子はpHelperプラスミド（E2A、E4、VA RNA遺伝子等）上にあり、ヒトAAVベクターDNAと共トランスフェクションされます。E1遺伝子は、239 宿主細胞で恒常的に発現しています。生きたヘルパーウイルスを使用しない本システムは、安全かつ便利なデリバリーシステムです。本システムで用いるAAV-2 ITRを含むウイルスベクターからRep 遺伝子及びCap 遺伝子を取り除き、これらの遺伝子をpAAV-RCプラスミド上に組み込みました。ウイルスベクターからRep 遺伝子及びCap 遺伝子を取り除くことで、目的遺伝子をウイルスゲノムに挿入することができます。

今回新たに紹介するscAAV（自己相補的なAAV）は、一方のITR（Inverted Terminal repeats）でDシーケンス（パッケージングシグナル）が欠損し、terminal resolution siteのミューテーション（Δtrs）が含まれます（図1）。これらがRepを介したニッキングを防ぎ、ダイマーまたはゲノムの自己パッケージングを招きます。

scAAVベクターからdsAAVを作製することで、in vivo、in vitro の実験の両方において、形質導入の効率が大幅に改善されます。

図1　これまでのssAAVとscAAVとの比較

• pHelper プラスミドはE2A、E4、VA RNAアデノウイルス遺伝子をコードしています。ヘルパーアデノウイルスが必要な遺伝子は取り除いています。
• AAV-DJシステムは、幅広い組織において高効率で感染するように、8種類の異なるAAVのセロタイプからハイブリッドカプシドを作製しています。
• AAV-DJ/8 は心臓及び脳組織によく取り込まれるようにデザインされたAAV-DJの変異体で、AAV-8とAAV-9によく似ています。
• 本発現システムはパッケージングプラスミド、発現ベクター、GFPコントロールベクターを含みます。
• すでにAAV 発現コンストラクトをお持ちのお客様には、発現ベクターの含まれないパッケージングシステムもあります。詳細はお問い合わせください。

• pscAAV-MCS発現ベクター
• pAAV-RCベクター
• pHelperベクター
• pAAV-GFPコントロールベクター

※ 本商品には293細胞は含まれていません。高タイターのリコンビナントAAVをご要望の際は、セルバイオラボ社の293AAV Cell Line（品番：AAV-100）をおすすめします。

図2　scAAV ヘルパーフリーシステム

品番VPK-430-DJ、品番VPK-430-DJ-8は、アカデミック・非営利団体のお客様のみご購入いただけます。企業のお客様でご購入希望の方におかれましては、恐れ入りますがライセンス契約の必要がございます。詳細はお問い合わせください。

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