HIF-1α 測定サンドイッチ ELISA

HIF-1α 測定サンドイッチ ELISA キットは、細胞ライセート、組織ホモジネート、核抽出物のタンパク質中のHIF-1α を迅速に測定するキットです。

HIF-1α タンパク質を、ウェルに結合しているマウスモノクローナル抗体でキャプチャーします。次に、HIF-1α をヤギポリクローナル抗HIF-1α 抗体、続いてHRP標識二次抗体で検出します（測定波長：450nm）。各キットには合計96アッセイを行うのに十分な試薬が含まれており、ヒト、マウス、ラットからHIF-1α を検出することができます。

HIF-1α とは

哺乳動物細胞は、低酸素状態の感知することができ、低酸素応答性の一連の遺伝子をオンにします。

低酸素誘導因子 HIF-1（hypoxia-inducible factor 1）は、VEGFやエリスロポエチン（erythropoietin）を含むいくつかの低酸素応答性遺伝子の活性化に関与します。HIF-1複合体は、HIF-1b/ARNT とHIF-1 Alpha（HIF-1α）の2つのタンパク質サブユニットから構成されます。HIF-1α は、正常な酸素条件下では継続的にユビキチンプロテアソーム系（UPS）によって分解されるため、検出されません。一方、低酸素条件下では、HIF-1α は安定化・蓄積し、細胞質から核へ移行後にHIF-1b/ARNTと二量体化して転写活性を示します。HIF-1複合体は、低酸素応答性領域（HREs：hypoxic response elements）に作用し、遺伝子発現を誘導する転写コアクチベーターを結合します。HIF-1 の安定性と機能の厳格な制御は、翻訳後修飾（ヒドロキシル化、ユビキチン化、アセチル化、およびリン酸化など）によって調整されます。

通常の酸素条件下においてHIF-1αの翻訳後修飾は、N末端トランス活性化領域、C末端トランス活性化領域、酸素依存的分解領域（ODDD：oxygen dependent degradation domain）で発生します。2つのプロリン残基のヒドロキシル化およびODDD中リジン残基のアセチル化は、HIF-1と von Hippel-Lindau (pVHL) ubiquitin E3 ligase complexの結合を促進します。pVHL complexはHIF-1をユビキチン化修飾し、26Sプロテアソームによって分解します。また、C末端トランス活性化領域中のC末端のアスパラギン残基のヒドロキシル化は、HIF-1とCBP/p300 との相互作用をブロックするため、HIF-1 転写活性が阻害されます。HIF-1αが合成されると、2-オキソグルタル酸ジオキシゲナーゼによって402番目と564番目のプロリン残基が急速にヒドロキシル化されます。これらのジオキシゲナーゼ（proline hydroxylase domains　(PHDs)）が低酸素または化学的に不活性化されると、HIF-1αの半減期が増加し、続く複合体の活性化をもたらします。

• 組織ホモジネート、全細胞ライセート、核抽出物タンパク質中のHIF-1 αを検出
• ヒト、マウス、ラットで使用可能

• 抗HIF-1α 抗体コートプレート
• 抗HIF-1α 抗体
• HRP標識二次抗体
• 核抽出物希釈バッファー（NEDB）
• アッセイ希釈液
• 10X 洗浄バッファー
• 基質溶液
• 停止溶液
• HIF-1α スタンダード

図1．HIF-1α スタンダードカーブ

図2．核 HIF-1α の検出

青：未処理HeLa細胞の核抽出物
赤：DFO処理したHeLa細胞の核抽出物

ほぼコンフルエントなHeLa細胞を、0.2 mM デフェロキサミンメシレート（DFO）存在／非存在下で、37℃・4時間培養した。細胞をトリプシン処理し、セルバイオラボ社の核／細胞質分画キット（品番：AKR-171）を使用して核抽出物を調製した。アッセイプロトコールに従ってHIF-1α レベルを測定した。

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