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記事ID : 12402
研究用

HIF-1α 測定サンドイッチ ELISA

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HIF-1α 測定サンドイッチ ELISA キットは、細胞ライセート、組織ホモジネート、核抽出物のタンパク質中のHIF-1α を迅速に測定するキットです。

HIF-1α タンパク質を、ウェルに結合しているマウスモノクローナル抗体でキャプチャーします。次に、HIF-1α をヤギポリクローナル抗HIF-1α 抗体、続いてHRP標識二次抗体で検出します(測定波長:450nm)。各キットには合計96アッセイを行うのに十分な試薬が含まれており、ヒト、マウス、ラットからHIF-1α を検出することができます。

背景

HIF-1α とは

哺乳動物細胞は、低酸素状態の感知することができ、低酸素応答性の一連の遺伝子をオンにします。

低酸素誘導因子 HIF-1(hypoxia-inducible factor 1)は、VEGFやエリスロポエチン(erythropoietin)を含むいくつかの低酸素応答性遺伝子の活性化に関与します。HIF-1複合体は、HIF-1b/ARNT とHIF-1 Alpha(HIF-1α)の2つのタンパク質サブユニットから構成されます。HIF-1α は、正常な酸素条件下では継続的にユビキチンプロテアソーム系(UPS)によって分解されるため、検出されません。一方、低酸素条件下では、HIF-1α は安定化・蓄積し、細胞質から核へ移行後にHIF-1b/ARNTと二量体化して転写活性を示します。HIF-1複合体は、低酸素応答性領域(HREs:hypoxic response elements)に作用し、遺伝子発現を誘導する転写コアクチベーターを結合します。HIF-1 の安定性と機能の厳格な制御は、翻訳後修飾(ヒドロキシル化、ユビキチン化、アセチル化、およびリン酸化など)によって調整されます。

通常の酸素条件下においてHIF-1αの翻訳後修飾は、N末端トランス活性化領域、C末端トランス活性化領域、酸素依存的分解領域(ODDD:oxygen dependent degradation domain)で発生します。2つのプロリン残基のヒドロキシル化およびODDD中リジン残基のアセチル化は、HIF-1と von Hippel-Lindau (pVHL) ubiquitin E3 ligase complexの結合を促進します。pVHL complexはHIF-1をユビキチン化修飾し、26Sプロテアソームによって分解します。また、C末端トランス活性化領域中のC末端のアスパラギン残基のヒドロキシル化は、HIF-1とCBP/p300 との相互作用をブロックするため、HIF-1 転写活性が阻害されます。HIF-1αが合成されると、2-オキソグルタル酸ジオキシゲナーゼによって402番目と564番目のプロリン残基が急速にヒドロキシル化されます。これらのジオキシゲナーゼ(proline hydroxylase domains (PHDs))が低酸素または化学的に不活性化されると、HIF-1αの半減期が増加し、続く複合体の活性化をもたらします。

特長

  • 組織ホモジネート、全細胞ライセート、核抽出物タンパク質中のHIF-1 αを検出
  • ヒト、マウス、ラットで使用可能

構成内容

  • 抗HIF-1α 抗体コートプレート
  • 抗HIF-1α 抗体
  • HRP標識二次抗体
  • 核抽出物希釈バッファー(NEDB)
  • アッセイ希釈液
  • 10X 洗浄バッファー
  • 基質溶液
  • 停止溶液
  • HIF-1α スタンダード

使用例

HIF-1 α スタンダードカーブ
図1.HIF-1α スタンダードカーブ

核 HIF-1 α の検出
図2.核 HIF-1α の検出

青:未処理HeLa細胞の核抽出物
赤:DFO処理したHeLa細胞の核抽出物

ほぼコンフルエントなHeLa細胞を、0.2 mM デフェロキサミンメシレート(DFO)存在/非存在下で、37℃・4時間培養した。細胞をトリプシン処理し、セルバイオラボ社の核/細胞質分画キット(品番:AKR-171)を使用して核抽出物を調製した。アッセイプロトコールに従ってHIF-1α レベルを測定した。

HIF-1 α サンドイッチ ELISA

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
HIF-1α Sandwich ELISA Kit詳細データ CBL CBA-280 96 ASSAY
¥90,000

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