細胞内のNADH / NADPHレベルを蛍光検出 Cell Meter™ 細胞内NADH / NADPH蛍光イメージングアッセイ

Cell Meter™細胞内NADH / NADPH蛍光イメージングアッセイは、生細胞の細胞内NADP+ / NADPH→NADH / NADPHレベルを効率的にモニターするキットです。

ジヒドロニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NADH)およびそのリン酸エステル(NADPH)の細胞内濃度を測定することは、様々な疾患の研究において有用であることが知られています。生物では、NAD+ / NADHとNADP+ / NADPHの酸化還元対はエネルギー代謝、解糖、トリカルボン酸回路、ミトコンドリア呼吸に重要な役割を果たしています。細胞内のNADP+またはNADPHレベルが上昇すると、細胞は活性酸素種（ROS）の異常生成に起因するDNA損傷を受けやすくなります。

原理

本アッセイは、ABD社の細胞透過性JZL1707 NAD(P)Hセンサーを利用しており、NADH / NADPHに高い感度と特異性で結合します。NADH / NADPHと結合すると、JZL1707 NAD（P）Hセンサーは強い蛍光シグナルを生成します。このシグナルは、蛍光マイクロプレートリーダーを用いてEx/Em = 540/590 nmでモニターするか、またはCy3®またはTRITCフィルターセットを備えた蛍光顕微鏡を用いて可視化することができます。

• 高い感度と特異性をもつ独自のNAD(P)Hセンサー
• 検出装置：
  Analysisキット/ フローサイトメトリー（Ex/Em = 540/590 nmまたはPEチャンネル）
  イメージングキット/ 蛍光顕微鏡（Ex/Em = 540/590 nmまたはCy3®またはTRITCフィルターセット）

Analysisキット

• Component A: JZL1707 NAD(P)H sensor, 100 µL
• Component B: Assay Buffer, 50 mL

イメージングキット

• Component A: JZL1707 NAD(P)H Sensor, 40 µL
• Component B: Assay Buffer, 1 bottle (20 mL)

Analysisキット

1. 細胞(0.5 - 1×10⁶ cells/mL)の調整
2. 細胞を試験化合物とJZL1707 NAD(P)H Sensorとともに37℃で30-60分インキュベート
3. アッセイバッファーで細胞を洗浄
4. フローサイトメーター（PEチャネル）を用いて解析

イメージングキット

1. 細胞を成長培地で調整
2. 細胞を試験化合物とJZL1707 NAD(P)H Sensorとともに37℃で30-60分インキュベート
3. アッセイバッファーで細胞を洗浄Wash and keep cells in Assay Buffer
4. 蛍光強度Ex/Em = 540/590 nm (Cutoff = 570 nm) で測定または蛍光顕微鏡（TRITCフィルター）で観察

図.1 Cell Meter™細胞内NADH / NADPH蛍光イメージングキット（品番15290）を使用したHeLa細胞中のNADH / NADPHの蛍光画像
無血清培地中のHela細胞を100 µMのNADHまたは100 µMのNAPDHと30分間インキュベートし、次いでJZL1707 NAD(P)Hセンサーworking solutionとさらに30分間共インキュベートした。蛍光シグナルは、Cy3®フィルターを備えた蛍光顕微鏡を用いて測定した。

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