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記事ID : 35379
研究用

細胞内のNADH / NADPHレベルを蛍光検出Cell Meter™ 細胞内NADH / NADPH蛍光イメージングアッセイ

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Cell Meter™細胞内NADH / NADPH蛍光イメージングアッセイは、生細胞の細胞内NADP+ / NADPH→NADH / NADPHレベルを効率的にモニターするキットです。

背景

ジヒドロニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NADH)およびそのリン酸エステル(NADPH)の細胞内濃度を測定することは、様々な疾患の研究において有用であることが知られています。生物では、NAD+ / NADHとNADP+ / NADPHの酸化還元対はエネルギー代謝、解糖、トリカルボン酸回路、ミトコンドリア呼吸に重要な役割を果たしています。細胞内のNADP+またはNADPHレベルが上昇すると、細胞は活性酸素種(ROS)の異常生成に起因するDNA損傷を受けやすくなります。

原理

本アッセイは、ABD社の細胞透過性JZL1707 NAD(P)Hセンサーを利用しており、NADH / NADPHに高い感度と特異性で結合します。NADH / NADPHと結合すると、JZL1707 NAD(P)Hセンサーは強い蛍光シグナルを生成します。このシグナルは、蛍光マイクロプレートリーダーを用いてEx/Em = 540/590 nmでモニターするか、またはCy3®またはTRITCフィルターセットを備えた蛍光顕微鏡を用いて可視化することができます。

特長

  • 高い感度と特異性をもつ独自のNAD(P)Hセンサー
  • 検出装置:
    Analysisキット/ フローサイトメトリー(Ex/Em = 540/590 nmまたはPEチャンネル)
    イメージングキット/ 蛍光顕微鏡(Ex/Em = 540/590 nmまたはCy3®またはTRITCフィルターセット)

構成内容

Analysisキット

  • Component A: JZL1707 NAD(P)H sensor, 100 µL
  • Component B: Assay Buffer, 50 mL

イメージングキット

  • Component A: JZL1707 NAD(P)H Sensor, 40 µL
  • Component B: Assay Buffer, 1 bottle (20 mL)

プロトコール概要

Analysisキット

  1. 細胞(0.5 - 1×106 cells/mL)の調整
  2. 細胞を試験化合物とJZL1707 NAD(P)H Sensorとともに37℃で30-60分インキュベート
  3. アッセイバッファーで細胞を洗浄
  4. フローサイトメーター(PEチャネル)を用いて解析

イメージングキット

  1. 細胞を成長培地で調整
  2. 細胞を試験化合物とJZL1707 NAD(P)H Sensorとともに37℃で30-60分インキュベート
  3. アッセイバッファーで細胞を洗浄Wash and keep cells in Assay Buffer
  4. 蛍光強度Ex/Em = 540/590 nm (Cutoff = 570 nm) で測定または蛍光顕微鏡(TRITCフィルター)で観察

製品データ

NADH / NADPHの蛍光画像
図.1 Cell Meter™細胞内NADH / NADPH蛍光イメージングキット(品番15290)を使用したHeLa細胞中のNADH / NADPHの蛍光画像
無血清培地中のHela細胞を100 µMのNADHまたは100 µMのNAPDHと30分間インキュベートし、次いでJZL1707 NAD(P)Hセンサーworking solutionとさらに30分間共インキュベートした。蛍光シグナルは、Cy3®フィルターを備えた蛍光顕微鏡を用いて測定した。

Cell Meter™ 細胞内NADH / NADPH蛍光イメージングアッセイ

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Cell MeterTM Intracellular NADH/NADPH Flow Cytometric Analysis Kit詳細データ ABD 15291 100 TEST
¥104,000
Cell MeterTM Intracellular NADH/NADPH Fluorescence Imaging Kit詳細データ ABD 15290 100 TEST
¥104,000

【関連情報】

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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