記事ID ： 36211

生細胞、アポトーシス、ネクローシスの同時検出に Cell Meter™マルチプレックス細胞検出キット（生細胞、アポトーシス、ネクローシス検出）

メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

本キットは、3種のプローブシステムを利用し、蛍光顕微鏡を用いてアポトーシス性、壊死性、および生細胞を同時にモニターします。

特長

生細胞、アポトーシス、ネクローシスを同時に検出
一般的なフィルターセットに対応した蛍光波長

構成内容

Component A: 100X Annexin V-iFluor™ 488 conjugate, 1 Vial (200 μL)
Component B: Assay Buffer , 1 Bottle (50 mL)
Component C: 200X Nuclear Blue™ DCS1, 1 Vial (100 μL)
Component D: 200X Cellbrite™ Red, 1 Vial (100 μL)

原理

生細胞は細胞透過性色素Cellbrite™ Red (Ex/Em = 613/631 nm) を用いて検出し標識します。アポトーシスの初期と中期段階はホスファチジルセリン (PS) が細胞表面膜条に出現することで特徴付けられます。アポトーシスを経ている細胞はPSセンサーAnnexin V-iFluor™ 488 (Ex/Em = 494/520 nm) を用いて検出し標識します。Annexin V-iFluor™ 488は、膜に出現したPSに付随すると緑色蛍光を発します。死細胞や壊死細胞は細胞不透過性の核酸染色であるNuclear Blue™ DCS1 (Ex/Em = 350/461 nm) を用いて検出し標識します。核プローブにより産生された蛍光シグナルは、それぞれアポトーシス性 (緑色) 、壊死性 (青色) 、または生 (赤色) 細胞数と比例します。

プロトコール概要

テスト化合物と細胞の調製
Triple fluorescenceワーキング試薬 (100 μL/sample) を添加
室温または37℃で30-60分間インキュベート
蛍光顕微鏡で解析[FITC channel (アポトーシス) , DAPI channel (ネクローシス) ,Texas Red/Cy5 channel (正常細胞)]

製品データ

図1. Cell Meter™ Multiplexing Live, Apoptotic and Necrotic Detection Kit *Triple Fluorescence* (品番：22846) を用いて標識したHeLa細胞の蛍光画像。HeLa細胞を 100,000 cells/well/100 μLで黒色/クリアボトム96穴プレートに播種して一晩培養した。細胞を0-500 nM のスタウロスポリン (SS) で37℃において4時間処理 (A-C) するか、エタノールで固定 (D) した後、3色蛍光アッセイ溶液で1時間培養した。蛍光シグナルは蛍光顕微鏡のCy5フィルター (健常細胞：赤色) 、FITCフィルター (アポトーシス性細胞：緑色) 、またはDAPIフィルター (壊死性細胞：青色) で測定した。