MDR1、MRP1/2、BCRP をフローサイトメトリー解析 eFluxx-ID® 多剤耐性アッセイキット

eFluxx-ID® 多剤耐性アッセイキットは、MDR1、MRP1/2、BCRP をフローサイトメトリーで解析します。

eFluxx-ID® 多剤耐性アッセイキットは、生細胞における多剤耐性フェノタイプの機能検索とプロファイリングのために設計されています。eFluxx-ID® 検出試薬は3つの主なABCトランスポータータンパク質全ての基質なので、細胞内のトランスポータータンパク質活性の指示薬として働きます。eFluxx-ID® 検出試薬独自のAM エステルは、速やかに細胞膜を透過したのち細胞内エステラーゼによって加水分解される疎水性の非蛍光性化合物です。結果として得られるプローブはABCトランスポーターによって能動的に排出されない限り、細胞の中に閉じ込められます。活性の高いトランスポーターを持つ細胞は、細胞からの試薬の能動拡散のために、より低い蛍光を示します。

本キットに含まれる、ABCトランスポータータンパク質特異的インヒビターを使用することにより、3つの一般的なポンプを識別することが可能になります。特定のMDR トランスポーターの活性は、インヒビター存在下・非存在下それぞれの場合で蓄積された色素の量の違いによって解析されます。

• 多剤耐性タンパク質（MDR1、MRP1/2、BCRP) を迅速・高感度・定量的にモニター
• 簡単プロトコール！混合してフローサイトメトリー解析するだけ
• 薬剤／毒性探索研究に最適
• 一般的なフローサイトメーター（480 nm フィルター）で測定可能

eFluxx-ID® Green 多剤耐性アッセイキット（品番：ENZ-51029-K100）

• eFluxx-ID® Green 検出試薬
• MDR1 インヒビター (Verapamil)
• MRP インヒビター (MK-571)
• BCRP インヒビター (Novobiocin)
• Propidium Iodide

eFluxx-ID® Gold 多剤耐性アッセイキット（品番：ENZ-51030-K100）

• eFluxx-ID® Gold 検出試薬
• MDR1 インヒビター (Verapamil)
• MRP インヒビター (MK-571)
• BCRP インヒビター (Novobiocin)
• Propidium Iodide

eFluxx-ID 蛍光検出試薬

eFluxx-ID Green (490/514 nm ex/em) および Gold (530/570 nm ex/em)のスペクトル特性

図：多剤耐性アッセイの一例
キットの使用手順に従って、CHO K1 細胞を、特定のインヒビター存在下・非存在下でeFluxx-ID® Green（ 上段のパネル） もしくはeFluxx-ID® Gold（ 中段のパネル） の検出試薬とインキュベートした。現れた蛍光は、フローサイトメトリーを用いて測定した。暗く色づけしたヒストグラムはインヒビターで処理したサンプルの蛍光を示し、薄く色づけしたヒストグラムは未処理の細胞の蛍光を示す。蛍光の違いは、対応するタンパク質の活性（左上角の数字はMAF の値（多剤耐性活量因子）すなわち多剤耐性の定量的特性）の指標となる。カルセインAM（MDRアッセイの一般的なプローブ、下段のパネル）は、BCRP 活性を検出することができない。

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