記事ID ： 35748

血液サンプルのRNA-seqライブラリ調製において、グロビン由来の断片生成を防ぎます Globin Block Module for QuantSeq

カテゴリから探す > 分子生物 > RNAシーケンシング > 次世代シーケンシングキット

メーカー名：Lexogen GmbH

Globin Block Module for QuantSeq
Globin Block（RS-Globin Block）Moduleは、グロビンmRNAの第二次鎖合成が行われる際にその伸展を遮断し、グロビンmRNA由来のライブラリ断片生成を防ぎます。本製品は、QuantSeq 3’ mRNA-Seq Library Prep Kits for Illumina（品番：015 と、品番： 016）にのみ対応しており、血液RNAサンプルを対象としたRNA-seqライブラリ調製を目的としています。

本製品には、生物種特異的グロビンブロッキングオリゴを含む Modified RNA Removal Solution (RS-Globin Block) が含まれ、QuantSeq 3’ mRNA-Seq Library Prep Kitsの構成品である RNA Removal Solution (RS) と置き換えて使用します。ヒト（Homo sapiens）用とブタ（Sus scrofa）用をご用意しています。

RS-Globin Block, Homo sapiens module（RS-GBHs,品番：070.96）
ヒト血液RNA用であり、ヒトα-, β-ヘモグロビン鎖mRNAsであるHBA1、HBA2、およびHBBに対してデザインされたブロッキングオリゴが添付されています。
RS-Globin Block, Sus scrofa module（RS-GBSs, 品番：071.96）
ブタ血液RNA用であり、ブタα-, β-ヘモグロビン鎖mRNAsであるHBAとHBBに対してデザインされたブロッキングオリゴが添付されています。

※Globin Block Modulesは、2017年2月7日のアップグレード前に発売されたQuantSeq Kitsとも互換性があります。

ワークフロー

図：Globin Blockを使用した、QuantSeqライブラリ調製のワークフロー

全血のTotal RNAにはグロビンと非グロビンのmRNAが含まれており、両者は第一鎖合成の際にOligo (dT) プライミングによって逆転写される。次いで、QuantSeq 3’ mRNA-Seq Library Prep Kits に添付されているRNA除去試薬（RNA Removal Solution; RS）の代わりに、RS-グロビンブロック（RS-GB）溶液を添加する。RNA除去後、グロビンブロッカーオリゴは、ランダムプライマーの下流のグロビン第一鎖cDNAに特異的に結合し、グロビン第二鎖合成をブロックする。第二鎖合成後、サンプルには、グロビン由来cDNA断片および非グロビン由来二本鎖cDNA断片の両方が含まれるが、PCRでは、非グロビン由来cDNA断片のみを増幅し、インデックスアダプターを付加する。