記事ID ： 33361

ファージディスプレイ｜パニング効率を改善するためのヘルパーファージ Hyperphage M13 K07ΔpIII (ハイパーファージ）

カテゴリから探す > 分子生物 > タンパク質発現 > タンパク質発現システム > 大腸菌

メーカー名：Progen Biotechnik GmbH

Hyperphageは、ファージディスプレイにおけるパニング効率を改善するためのヘルパーファージです。ファージライブラリからリコンビナント抗体、リコンビナントタンパク質やペプチドを単離するための効果的なツールです。

背景

Rondotらによって開発された（Nature Biotechnology 19:75-81, 2001）ヘルパーファージ技術は、ファージ粒子あたりに提示される抗体の数を増加させる事で、ファージディスプレイにおける抗体の提示を改善し、遺伝子解析やプロテオミクスの分野において利点となります。ファージのパニングは少量の抗原で、かつ高い効率で行う事ができます。

Hyperphageは、pIII遺伝子に欠損を持ち、pIII（pIII欠損のファージゲノムをパッケージングするのに用いられる）を補完できるE.coli株（パッケージング株）を用いる事で作製されています。作製したHyperphageは、ゲノムのpIII遺伝子は欠損していますが、その表面にはpIIIを持っており、細菌への感染は可能です。このHyperphageとファージミドライブラリをパッケージング大腸菌に導入する事で作製したファージは、複数の抗体やペプチドをその表面に提示する事ができ、パニング効率を劇的に向上できます。

図1. Hyperphageシステム

特長

パニング効率の向上（結果としてパニングに使用する抗原量が少なくても利用可能）
親和性の高い結合剤（抗体）と親和性の低い結合剤の同定
抗体ライブラリの場合、pIIIとscFv断片の間にプロテアーゼ切断部位を持つため、プロテアーゼ処理によりファージの溶出が可能

参考文献

Rondot S, Koch J, Breitling F and Dübel S: A helper phage to improve single-chain antibody presentation in phage display. Nature Biotechnology 19, 75-78, 2001
Koch J and Dübel S: Generation of antibody libraries from human donors. In: Antibody engineering, (eds Kontermann R and Dübel S), Springer Verlag, Heidelberg/New York, 2001.
Broders O, Breitling F, Dübel S: Hyperphage - Improving antibody presentation in phage display. Methods Mol Biol 205, 295-302 (2003)
Soltes G, Hust M, Ng KKY, Bansal A, Field J, Stewart DIH, Dübel S, Cha S, Wiersma EJ: On the influence of vector design on antibody phage display. J Biotechnol 127, 626-637 (2007)

Protocols

Hust M., Frenzel, A., Tomszak, F, Kügler, J & Dübel, S. (2014) Antibody Phage Display. In: Dübel, S. & Reichert, J.M. (eds.) Handbook of Therapeutic Antibodies, 2nd ed. Wiley-VCH, Weinheim, ISBN 978-3-527-32937-3 p. 43-76
Hust, M., Frenzel, A., Schirmann, T. and Dübel, S. (2014) Selection of recombinant antibodies from antibody gene libraries. Methods Mol Biol. 1101, 305-320.2
Hust, M., Frenzel, A., Meyer, T., Schirmann, T. and Dübel, S. (2012). Construction of human naive antibody gene libraries. In: Antibody Engineering: Methods and Protocols, Ed: Chames, P., Meth Mol Biol 907, 85-107
Breitling, F., Broders, O., Helmsing, S., Hust, M & Dübel, S (2010) Improving phage display throughput by using Hyperphage, miniaturised titration and pVIII (g8p) ELISA. In: Antibody Engineering (2nd ed) Springer Protocols. Vol. 1, ISBN 978-3-642-01143-6, p. 197-206
Broders, O., Breitling, F., and Dübel, S. (2003). Hyperphage - Improving Antibody Presentation in Phage Display. Methods Mol Biol 205, 295-302.