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記事ID ： 11077
研究用

高い特異性でTCRに結合し、抗原特異的T細胞集団を単離・検出 MHCマルチマー（デキストラマー）
Immudex社：高い特異性でTCRに結合し、抗原特異的T細胞集団を単離・検出

Immudex社：高い特異性でTCRに結合し、抗原特異的T細胞集団を単離・検出" data-hatena-bookmark-layout="standard-balloon" data-hatena-bookmark-lang="ja" title="このエントリーをはてなブックマークに追加">このエントリーをはてなブックマークに追加

メーカー名：Immudex ApS（略号：IMX）

MHC Dextramer® 試薬は、液体中の細胞サンプルや組織サンプル中の抗原特異的T細胞を検出するために使用される蛍光標識したMHCマルチマーです。

 

背景

MHC Dextramer®試薬は、すべての抗原特異的 CD4+ またはCD8+ T細胞をフローサイトメトリーにより効率的に検出できる優れたMHCマルチマーです。MHC Dextramerテクノロジーにより、他のテクノロジーでは識別できない非常に親和性の低い抗原特異的T細胞も検出できます。

MHC Dextramer®試薬は、最適化された数のMHC分子と蛍光色素を運ぶデキストランバックボーンで構成されています。 デキストランバックボーンは、付着したタンパク質のコンフォメーションを安定化させ、MHC Dextramer試薬自体も非常に安定化させます。

MHC マルチマーで抗原特異的T細胞を検出

T細胞は、抗原提示細胞の表面上に提示される特異的MHC-ペプチド複合体を認識するT細胞受容体　(TCR) を保持しています。T細胞と MHC-ペプチド複合体との特異的相互作用は、MHC-ペプチド複合体に特異性を示すT細胞集団を検出・単離するために利用されてきました。しかし、個々のTCRは、MHC-ペプチド複合体に対して親和性が低く、モノマーMHC-ペプチド複合体を使った特異的T細胞を検出・単離することは困難でした。現在では、MHCマルチマーの導入により、この問題は解決されています。

MHCマルチマーは、複数のMHC-ペプチド複合体を保持する試薬で、1個のT細胞上に存在する複数の TCR に同時に結合する能力を持ち、試薬とT細胞間に非常に安定した相互作用をもたらします。多量体MHC試薬は、結合活性が増加した結果、さらに高い親和性で結合します。蛍光標識されたMHCマルチマーは、フローサイトメトリーにより液体試料（例えば、血液、培養細胞系、CSF、リンパ液、滑液）中の抗原特異的T細胞の検出・定量に使用され、免疫染色を利用した in situ 検出（例えば、固形がん）、抗原特異的T細胞集団の単離に使用されています。

T細胞の抗原ペプチド認識
図1　T細胞の抗原ペプチド認識
T細胞レセプター (TCR) は、特定のMHC分子で提示される抗原特異的なペプチドを認識する。

 

MHC Dextramer® 試薬

MHC Dextramer® は、最適化された数の MHC と蛍光色素分子を持つデキストランポリマー骨格から成り、従来の MHCマルチマーよりも多くの MHC分子、より多くの蛍光色素を保持しています。これにより、特異的T細胞に対する結合活性が増加され、染色強度も増強、また分解能やシグナル・ノイズ比も増加しています。この最適化されたDextramer 製品は、最小のバックグラウンド染色を保証いたします。そしてデキストランポリマー骨格は、結合タンパク質、MHC-ペプチド複合体、蛍光色素の立体構造を安定化させます。

MHCデキストラマーとその構成分子
図2．MHCデキストラマーとその構成分子

使用目的

MHC デキストラマーは、以下のアプリケーションに有用です。

  • 抗原特異的T細胞応答のモニタリング
    • 癌ワクチン開発
    • 癌の免疫療法研究
    • 臨床試験
  • 抗原特異的免疫状況の決定
    • 移植患者
    • 免疫不全患者（例えばHIV患者）
    • 免疫抑制剤を投与されている患者
  • 感染症、癌、自己免疫疾患や悪性腫瘍のT細胞応答のプロファイリング
  • 免疫研究における抗原特異的T細胞応答の検出
  • T細胞クローン特異性の確認
  • T細胞免疫療法のバリデーション

特長

  • 複数のMHC分子と蛍光分子
  • T細胞に対する結合力の増加
  • 染色強度の向上
  • 最小限のバックグラウンド染色
  • 低親和性T細胞受容体の検出

MHC デキストラマーのパフォーマンス

MHC I Dextramer 試薬パフォーマンステスト

●テトラマーでは不可能だった低アフィニティ抗原-特異的T細胞を認識！

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フローサイトメトリー解析
ABC：マルチマー試薬に特異的な 細胞系1%を加え、他99%の ”ネガティブ” HPBMC細胞からなる細胞サンプルのフローサイトメトリー解析
細胞は、A) TCRに低アフィニティ、B) TCRに中程度のアフィニティ、C) TNRにアフィニティなし（ネガティブコントロール）のpMHC を持つテトラマーもしくはデキストラマで染色。
ゲート細胞：live singlets, CD3+, CD14- and CD19-
D) それぞれのMHC マルチマーで染色した際のT細胞系のシグナル強度
細胞カウントやマルチマーシグナルが各特異性を表している。記載されている KD値はSPRにより測定された単量体 pMHC-TCRの値。

●低バックグランド、強シグナルを実現！

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フィコール精製したヒトHPBMC を各マルチマーで製造メーカー推奨プロトコールに従い染色
フィコール精製したヒトHPBMC を各マルチマーで製造メーカー推奨プロトコールに従い染色した。
Gating strategy: CD4-, CD14- and CD3+.
MHCデキストラマー試薬が最も高解像度、低バックグランド染色であることが分かる。

●10 倍以上のデキストラマー染色！

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10 倍以上のデキストラマー染色！
HLA-A2 （restricted HY）由来のエピトープ（FIDSYICQV）特異的ヒトT 細胞クローンでは、THLA-A2(FIDSYICQV)/PE テトラマーより、HLA-A2(FIDSYICQV)/PE デキストラマーの方が明るい染色を示した。
（データ提供：David Lissauer, Karen Piper, Professor Mark Kilby and Professor Paul Moss, Birmingham University, Birmingham, UK）

●抗原特異的T 細胞を in situ で検出！

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高結合力と明るさにより、MHC デキストラマーは免疫組織染色を用いた固形組織中の抗原特異的T細胞のin situ 検出にも適しています。

メラノーマにおけるSurvivin 特異的細胞傷害性T 細胞の免疫組織染色
メラノーマにおけるSurvivin 特異的細胞傷害性T 細胞の免疫組織染色
凍結切片は、乾燥/アセトン固定し、TRITC 標識anti-CD8 抗体とインキュベート後、FITC 標識HLA-A2(survivin) デキストラマーとインキュベートした。その後、DAPI で核染色した。A：核、B：CD8 ポジティブ細胞、C：抗原特異的T細胞をそれぞれ染色。 D：A〜C をマージ。
（データ提供：Professor J）

●癌特異的T 細胞のモニタリング

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腫瘍特異的T 細胞はMHC ペプチド複合体に対して頻繁に低いアフィニティのT細胞レセプターを提示します。MHCデキストラマーは低アフィニティT細胞でも検出できる優れた試薬です、下記はMart-1特異的T細胞のデキストラマー染色例です。

特異的T細胞の検出
テトラマーおよびデキストラマーによるMart-1 (A*0201 ELAGIGILTV) –特異的T細胞の検出
腫瘍-浸潤性リンパ球をMart-1マルチマー、抗CD3、抗CD4(dump)、抗CD8により染色したところ、デキストラマーのほうがテトラマーよりも中央値および解像度が3倍以上高い値を示した。

●同一サンプルでの多数の特異的解析

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同一チューブ内で複数のMHCデキストラマーによる染色が可能です。多数のアレルおよび各アレルの多数のエピトープをカバーするデキストラマープールは一つのチューブで染色することができます。プールした8種類のデキストラマーの例が下記になります。プールあたりのデキストラマー数が増える可能性もあります。デキストラマー試薬15種類まで単一カラープールで特徴づけることができるでしょう。

同一サンプルでの多数の特異的解析
ポジティブドナー由来HPBMCを、同種デキストラマー（単一デキストラマー）もしくは8種類のデキストラマー（同種デキストラマーと7種類のネガティブを示すデキストラマーから成る）で染色した。シングルそしてプールの染色結果より、両方とも0.4％のCD3+細胞を示すポジティブ集団が検出された。
プールあたりのデキストラマー数は標識が異なるデキストラマーの組み合わせにより増加する可能性があります。単一カラーでのデキストラマーのバックグランド染色は他の色で染色するデキストラマーには干渉しません。

MHC II Dextramer 試薬パフォーマンステスト

●疾患特異的CD4+T細胞のモニター

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IMX_MHC_II_dextramer_01.jpg
フローサイトメトリーを用いた血液サンプル中のDRB1 * 0101 / EBV 特異的T細胞の検出。 DRB1 * 0101 / CLIP Dextramer を陰性対照として用いた。

プロトコール

ご注文方法

MHC クラスI型 (カタログ商品）

IMX社では以下のヒト・マウス・サルのアレルを使用し、多種類のペプチド、蛍光標識 (FITC、APC、PE) を組み合わせてMHC Dextramer® 試薬を製造しています。

ヒトアレル
HLA-A*0101 HLA-A*0201 HLA-A*0211 HLA-A*0301 HLA-A*1101
HLA-A*2301 HLA-A*2402 HLA-A*2902 HLA-A*6801 HLA-B*0702
HLA-B*0801 HLA-B*2705 HLA-B*3501 HLA-B*4201 HLA-B*4403
HLA-B*5101 HLA-B*5701 HLA-B*5703 HLA-B*8101 HLA-C*0304
HLA-C*0602 HLA-G*0101
マウスアレル
H-2 Dd H-2 Dk H-2 Kb H-2 Kd H-2 Kk
H-2 Ld H-2 Db 　 　 　
サルアレル
Mamu-A*01 Mamu-A*08 Mamu-B*17
＜希望販売価格＞
  • 50/150/500/1,000 テスト　いずれもご照会

アレル・ペプチド・蛍光物質の組み合わせは非常に多いため、下記メーカーシステムより検索いただくか、当社までお問い合わせください。

MHCクラスI型 (カスタム商品）

カタログ商品にはなかった場合、お客様ご指定の MHCデキストラマーを受託合成いたします。

  • 包装：50テスト、150テスト、500テスト、1,000テスト
  • 標準納期：受注確認後6〜8週間
  • 研究用試薬：診断および治療目的には使用できませんので、ご注意ください。

カスタムオーダーのお見積りの際には「動物種」「アレル」「ペプチド」「標識」「包装サイズ」「ご利用代理店名・支店名」 の情報が必要になります。

お見積はページ下部のお問い合わせフォームよりご連絡ください。

MHCクラスII型 (カタログ商品）

現在ヒト アレルについて下記商品を販売しています。いずれの商品も蛍光標識 (BV421、APC、FITC、PE)、未標識のものを販売しています。

ヒトアレル
HLA-DRB1*0101 HLA-DRB1*0401 HLA-DRB1*1101 HLA-DRB1*0301 HLA-DRB1*0701 HLA-DPB1*0401
＜希望販売価格＞
  • 50/150/500/1,000 テスト　いずれもご照会
品番 アレル ペプチド 抗原 疾病/細菌
FA10001※ DRB1*0101 PKYVKQNTLKLAT HA Influenza
FA10002※ DRB1*0101 PVSKMRMATPLLMQA CLIP Endogenous Ag
FA10003※ DRB1*0101 TSLYNLRRGTALA EBNA1 EBV
FA10004※ DRB1*0101 PEQWMFQGAPPSQGT EBNA3A EBV
FA10005※ DRB1*0101 QEIYMQHTYPISA Tetanus Toxin Tetanus
FA10006※ DRB1*0101 LPLKMLNIPSINVH pp65 CMV
FB10001※ DRB1*0401 PKYVKQNTLKLAT HA Influenza
FB10002※ DRB1*0401 PVSKMRMATPLLMQA CLIP Endogenous Ag
FB10012※ DRB1*0401 GAGSLQPLALEGSLQKRG Proinsulin Diabetes
FB10013※ DRB1*0401 IAFTSEHSHFSLK GAD65 Diabetes
FB10014※ DRB1*0401 NFIRMVISNPAAT GAD65 Diabetes
FD10001※ DRB1*1101 PKYVKQNTLKLAT HA Influenza
FD10002※ DRB1*1101 PVSKMRMATPLLMQA CLIP Endogenous Ag
FD10020※ DRB1*1101 EHPTFTSQYRIQGKL pp65 CMV
FH10002※ DPB1*0401 PVSKMRMATPLLMQA CLIP Endogenous Ag
FH10035※ DPB1*0401 SLLMWITQCFLPVF NY-ESO Cancer
FH10036※ DPB1*0401 TQHFVQENYLEY MAGE-A3 Cancer
FH10037※ DPB1*0401 KKYFAATQFEPLA Oxytocinase Cancer

※　蛍光標識の場合は、品番後ろに-BV421、-APC、-FITC、-PE のいずれかが付きます。

参考文献

商品リスト（関連商品リスト）

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

※  表示価格について

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