細胞内 ONOO^- を高輝度プローブで検出 Cell Meter™ 蛍光細胞内ペルオキシナイトライトアッセイキット（緑色蛍光）

Cell Meter™ 蛍光細胞内ペルオキシナイトライトアッセイキットは、蛍光プローブを用いて、生細胞中のペルオキシナイトライト（ONOO^-／パーオキシナイトライト／過酸化亜硝酸）を測定するキットです。

ペルオキシナイトライト（ONOO^-、Peroxynitrite）

ペルオキシナイトライト（ONOO^-）は、強力な酸化剤で高活性なニトロ化剤です。ペルオキシナイトライトは、細胞中でスーパーオキシドラジカルと窒素酸化物が反応して生じます。これはタンパク質、酵素、脂質、核酸といった生体分子を損傷させ、最後には細胞死をもたらします。非常に短い半減期のため、定常状態の濃度は低く、これまで溶液中のペルオキシナイトライトを検出・定量することは、かなり難しいものでした。

本キットは、生細胞内の ONOO^- を測定する高感度ツールです。DAX-J2™ PON Green は、選択的に ONOO^- に反応し、鮮やかな緑色蛍光産物を生成します。蛍光マイクロプレートリーダーや蛍光顕微鏡用（品番：16315）、フローサイトメトリー用（品番：16317）をご用意しています。

DHR123 (他社製品) との比較データ 〜ONOO^-への特異性〜

図1.　ABD社DAX-J2™ PON GreenはNOO-に高い特異性を有する
AAT Bioquest (ABD) 社のDAX-J2™ PON Green (A) もしくは DHR123 （B) で標識した RAW 264.7 細胞をマイクロプレートリーダーで測定した。RAW264.7 細胞はそれぞれの濃度の SIN-1 で処理し、20 µM ebselen はONOO^- のスカベンジャーとして使用した。SIN-1処理で増加したDAX-J2 PON™ Green の蛍光はebselenで完全に抑制されたが、DHR123の蛍光は部分的にしか抑制されなかった。DHR123 はONOO^- だけではなく他の RNA/RNS にも反応しているのに対し、DAX-J2 PON™ GreenはONOO^- に高い特異性を有することが示された。

品番：16315　蛍光マイクロプレートリーダー・蛍光顕微鏡用

• Component A: DAX-J2™ PON Green
• Component B: アッセイバッファー
• Component C: DMSO

品番：16317　フローサイトメトリー用

• Component A: DAX-J2™ PON Green
• Component B: DMSO

1. 成長培地に細胞を用意
2. テスト化合物と DAX-J2™ PON Green ワーキング溶液を添加してインキュベート
3. 蛍光強度を測定（Ex/Em = 490/530 nm）

図2.　品番：16315 を使った RAW264.7 マクロファージ細胞の細胞内ペルオキシナイトライトの蛍光画像

図3.　品番：16317 を使った SIN-1 処理した Jurkat 細胞のペルオキシナイトライトのフローサイトメトリー結果

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