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ioGlutamatergic Neurons はヒト iPS細胞由来グルタミン酸作動性皮質ニューロンです。細胞には、ドキシサイクリンで転写因子の発現を誘導可能な「opti-ox」カセット1 が組み込まれており、細胞融解後、ドキシサイクリンを添加し培養することでグルタミン酸作動性皮質ニューロンへ分化、成熟させます。

  Wild type ioGlutamatergic Neurons に加え、疾患モデル ioGlutamatergic Neuronsが新登場!
                        ・ハンチントン病モデル
                        ・筋萎縮性側索硬化症 (ALS) / 前頭側頭型認知症 (FTD) モデル
                        ・前頭側頭型認知症 (FTD) モデル
                        ・パーキンソン病モデル
                        ・アルツハイマー病モデル

特長

  • ばらつきが少ない:ロット間のばらつきが少なく、創薬や毒性評価のモデルとして利用可能。
  • 短時間で使用可能:最短で、細胞融解後2日目で実験に使用可能。11日目で構造的なニューロンネットワークを形成。
  • スケールアップ可能:基礎的な研究からスクリーニングスケールまで対応。
  • 簡便:1種類の培地、2ステップのプロトコールで分化・成熟させることが可能。

仕様

細胞由来 ヒト iPS 細胞
ドナー情報 白人男性、55~60歳、皮膚線維芽細胞
核型 Normal (46, XY)
包装 Small: >1 x 106 cells
Large: >5 x 106 cells
品質確認方法 ・ 免疫染色 (MAP2 / TUBB3 / VGLUT1 / VGLUT2)
・ RT-PCR (OCT4 / TUBB3 / GRIA4 / NANOG / SYP / vGLUT2)
推奨播種密度 30,000 cells/cm2
推奨培地 Neurobasal (ThermoFisher)をベースに調製が必要
使用可能なプレート 6、12、24、48、96、384ウエルプレート

短期間で分化・成熟させることが可能

ヒトiPS細胞由来グルタミン酸作動性皮質ニューロンの分化・成熟のプロセス図

ioGlutamatergic Neuronsは凍結保存された状態で提供され、推奨培地で培養すると急速に成熟するようにプログラムされています。これらの細胞の分化プロトコルは2段階のプロセスで構成されており、4日間の安定化期間を経た後、ニューロンの成熟期間に入ります。

他社製品と比較し低い細胞密度で播種可能

他社製品と比較し低い細胞密度で播種可能

製品データ

細胞融解から数日以内で試験に使用可能

ioGlutamatergic Neuronsは細胞融解後に急速かつ均一にニューロン表現型を獲得します。

ioGlutamatergic Neurons細胞融解後の成熟の様子(1日目)

Day 1

ioGlutamatergic Neurons細胞融解後の成熟の様子(4日目)

Day 4

ioGlutamatergic Neurons細胞融解後の成熟の様子(7日目)

Day 7

ioGlutamatergic Neurons細胞融解後の成熟の様子(11日目)

Day 11

ioGlutamatergic Neuronsは急速に成熟してグルタミン酸作動性ニューロンの形態を示し、細胞融解後11日間で構造的なニューロンネットワークが形成された。

動画:ioGlutamatergic Neurons(分化・成熟の様子)

細胞融解後11日目のioGlutamatergic Neuronsの免疫蛍光染色画像(MAP2)

MAP2

細胞融解後11日目のioGlutamatergic Neuronsの免疫蛍光染色画像(VGLUT2)

VGLUT2

細胞融解後11日目のioGlutamatergic Neuronsの免疫蛍光染色画像(DAPI)

DAPI

細胞融解後11日目のioGlutamatergic Neuronsの免疫蛍光染色画像(MERGE)

MERGE

細胞融解後11日目のioGlutamatergic Neuronを用いて免疫蛍光染色を実施した結果、汎ニューロンタンパク質であるMAP2とグルタミン酸作動性ニューロン特異的なトランスポーターであるVGLUT2が均一に発現していた。

培養日数の経過とともにioGlutamatergic Neuronsの神経活動が成熟することを示した図

ioGlutamatergic Neuronsは、ヒト iPSC 由来のアストロサイトとの共培養におけるMaxTwo HD-MEA システムによる軸索トラッキングアッセイ(左)では、ニューロン活動電位が細胞体から遠位の軸索枝まで空間的に伝播する様子を明らかにした。軸索の全長(中央)と発火率(右)は時間の経過とともに増加していたことから、細胞の成熟が進んでいることが示された。

データ提供:Charles River Laboratories・MaxWell Biosystems

ロット間の高い一貫性

ioGlutamatergic Neurons の異なる3ロットを用いて、細胞融解後0日目、11日目、18日目に実施したバルクRNAシーケンス解析の結果

ioGlutamatergic Neurons の異なる3ロットにおいて、細胞融解後0日目、11日目、18日目にバルクRNAシーケンス解析を実施した結果、ロット間の高い一貫性が示された。
(A) 3つの異なる製造ロット間の遺伝子発現の変動を評価する主成分分析 (PCA) の結果。
(B)親株の非誘導hiPSCサンプルを除外したPCA解析の結果。
(C) 11日目時点での3つの異なるロット間における差次的発現試験において、統計的に有意な差次的発現 (DE) 遺伝子は検出されなかった (|logFC| > 0.5 および FDR < 0.01)。

スクリーニング用途に適した、堅牢かつスケーラブルな細胞

細胞融解後9日目の384ウェルプレート上のioGlutamatergic Neuronsに対し、ツール化合物を処置し、細胞毒性測定用のCellTiter-Glo<sup>®</sup>(CTG)アッセイ、ならびにAKTセリン/スレオニンキナーゼ1(AKT)およびハンチンチン(HTT)タンパク質を標的としたTR-FRET(HTRF<sup>®</sup>)アッセイを実施した結果

細胞融解後9日目の384ウェルプレート上のioGlutamatergic Neuronsに対し、ツール化合物を処置し、細胞毒性測定用のCellTiter-Glo®(CTG)アッセイ、ならびにAKTセリン/スレオニンキナーゼ1(AKT)およびハンチンチン(HTT)タンパク質を標的としたTR-FRET(HTRF®)アッセイを実施した。3つのアッセイ全てにおいて濃度反応曲線が得られた。

mRNAトランスフェクションにも対応

ioGlutamatergic Neuronsにおいて、トランスフェクション効率の評価、およびトランスフェクションプロトコルによる潜在的な細胞毒性の影響を評価した結果

ioGlutamatergic Neuronsにおいて、トランスフェクション効率の評価、およびトランスフェクションプロトコルによる潜在的な細胞毒性の影響を評価した結果、GFPをコードするmRNAが効率的にトランスフェクションされ、持続的な長期発現を示すことが確認された。

各種io Cells細胞との共培養に対応

ioMicrogliaとの共培養

ioMicrogliaはioGlutamatergic Neuronsとの共培養においてネットワーク活動を強化します。

Incucyte? Neuroburst Orange Lentivirus を発現する ioGlutamatergic Nuronsを、単独培養、またはioMicroglia Male (品番:io1021)と共培養し、Incucyte? Neuronal Activity Analysis ソフトウェアを使用してモニタリングおよび定量化した結果

Incucyte® Neuroburst Orange Lentivirus を発現する ioGlutamatergic Nuronsを、単独培養、またはioMicroglia Male (品番:io1021)と共培養し、Incucyte® Neuronal Activity Analysis ソフトウェアを使用してモニタリングおよび定量化した。
(A) ミクログリア添加後15 日目に各培養条件で示された代表的なカルシウムトレース。
(B) ミクログリア添加後15日目のネットワーク相関と平均バースト持続時間を示す棒グラフ
(データは平均±SEM、n = 3〜12の反復実験)。

GFP ioMicrogliaとの共培養

ioGlutamatergic NeuronsとGFP ioMicrogliaを共培養し、生細胞イメージングを実施すると、GFP ioMicrogliaの分布を明瞭に可視化することが可能です。

細胞融解後11日間培養したioGlutamatergic Neurons に、細胞融解後10日間培養したGFP ioMicroglia (品番:io1096)を直接添加し、3日間共培養を実施した後、Leica DMi8 を用いて生細胞イメージングを行った結果

細胞融解後11日間培養したioGlutamatergic Neurons に、細胞融解後10日間培養したGFP ioMicroglia (品番:io1096)を直接添加し、3日間共培養を実施した後、Leica DMi8 を用いて生細胞イメージングを行った。明視野画像と蛍光画像を合成したところ、共培養物中の GFP ioMicrogliaの分布を容易に確認できた。

ioGABAergic Neurons、ヒトiPS由来アストロサイトとの共培養

ioGABA作動性ニューロンは、共養物中の興奮性のioGlutamatergic Neuronsに対して抑制効果を発揮し、ネットワークバースト率を高めます。

ioGlutamatergic Neurons、ioGABAergic Neurons(品番:io1003)、ヒトiPS由来アストロサイトの3つの細胞を共培養し、MEA分析した結果

ioGlutamatergic Neurons、ioGABAergic Neurons(品番:io1003)、ヒトiPS由来アストロサイトの3つの細胞を共培養し、MEA分析を実施した。三培養物におけるioGABAergic Neuronsの追加数の増加は、ネットワークバーストあたりのスパイク数を減らし、ネットワークバースト率の増加にしたことから、ioGABAergic Neuronsが興奮性のioGlutamatergic Neuronsに対する抑制効果を発揮していた。

ioOligodendrocyte-like cellsとの共培養

ioGlutamatergic NeuronsとioOligodendrocyte-like cellsを1または100 ?M db-cAMPを含む培地で共培養し、14日目および21日目にMBP(緑)およびTUBB3(赤)、核をDAPI(青)で対比染色した結果

ioGlutamatergic NeuronsとioOligodendrocyte-like cellsを1または100 ?M db-cAMPを含む培地で共培養し、14日目および21日目にMBP(緑)およびTUBB3(赤)、核をDAPI(青)で対比染色した。

参考文献
  • Pawlowski et al. Stem Cell Reports 2017

Wild type ioGlutamatergic Neurons

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品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
ioGlutamatergic Neurons for commercial users, Human詳細データ BIT IO1001S 1 SET
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ioGlutamatergic Neurons for academic users BIT IO1001S-A 1 SET
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ハンチントン病モデル ioGlutamatergic Neurons

ioGlutamatergic Neurons (品番:IO1001) のHTT遺伝子に50CAGリピートを導入しています。

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ioGlutamatergic Neurons HTT 50CAG/WT for commercial users BIT IOEA1004S 1 SET
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筋萎縮性側索硬化症 (ALS) / 前頭側頭型認知症 (FTD) モデル ioGlutamatergic Neurons

ioGlutamatergic Neurons (品番:IO1001) のTARDBP遺伝子にM337V変異を導入しています。

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ioGlutamatergic Neurons TDP-43 M337V/M337V for commercial users BIT IOEA1005S 1 SET
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ioGlutamatergic Neurons TDP-43 M337V/M337V for academic users BIT IOEA1005S-A 1 SET
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ゴーシェ病モデル ioGlutamatergic Neurons

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ioGlutamatergic Neurons GBA Null/R159W for commercial users BIT IO1007S 1 SET
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パーキンソン病モデル ioGlutamatergic Neurons

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ioGlutamatergic Neurons PRKN R275W/R275W for commercial users詳細データ BIT IO1020S 1 SET
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ioGlutamatergic Neurons PINK1 Q456X/Q456X (CL77) for commercial users BIT IO1076S 1 SET
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ioGlutamatergic Neurons SNCA A53T/A53T (clone H5) for commercial users BIT IO1088S 1 SET
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ioGlutamatergic Neurons PINK1 Q456X/Q456X (CL77) for academic users BIT IO1076S-A 1 SET
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ioGlutamatergic Neurons PINK1 Q456X/WT (CL187) for academic users BIT IO1079S-A 1 SET
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ioGlutamatergic Neurons SNCA A53T/A53T (clone H5) for academic users BIT IO1088S-A 1 SET
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アルツハイマー病モデル ioGlutamatergic Neurons

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ioGlutamatergic Neurons APP KM670/671NL/KM670/671NL (CLH12) for commercial users BIT IO1059S 1 SET
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ioGlutamatergic Neurons APP KM670/671NL/WT (CLE4) for commercial users BIT IO1061S 1 SET
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ioGlutamatergic Neurons APP V717I/V717I (CL27) for commercial users BIT IO1063S 1 SET
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ioGlutamatergic Neurons APP V717I/WT (CL35) for commercial users BIT IO1067S 1 SET
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ioGlutamatergic Neurons PSEN1 M146L/WT (CL8) for commercial users BIT IO1072S 1 SET
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ioGlutamatergic Neurons APP KM670/671NL/KM670/671NL (CLH12) for academic users BIT IO1059S-A 1 SET
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ioGlutamatergic Neurons APP KM670/671NL/WT (CLE4) for academic users BIT IO1061S-A 1 SET
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商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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