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研究用

免疫反応を高活性化!MEGACD40L® : 改良型CD40L(CD154)

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MEGACD40L®は、高活性、高純度のCD40L(CD40 ligand:CD40リガンド)で、免疫反応を活性化します。

背景

CD40L(CD40リガンド)とは?

CD40L(CD40 ligand:CD40リガンド)とは、活性化T細胞に主に発現する約33kDaのII型膜貫通のTNFスーバーファミリータンパク質です。CD40と結合することでB細胞の増殖や接着性、分化を刺激するため、T細胞依存的な抗原へのB細胞のさまざまな段階の応答に関与します。このことから、移植拒絶反応や関節リウマチ、甲状腺疾患、多発性硬化症、アテローム硬化症、ぜんそく関連起動炎症、自己免疫疾患、がんに対する免疫応答として重要です。

CD40LとMEGACD40L® の違い

CD40L は生体内で1つの三量体を形成していますが、MEGACD40L®は人工的にアディポネクチンのコラーゲンドメインを介して三量体を2セット形成させたキメラタンパク質です。この構成がin vivoにおけるCD40Lの膜介在集合体を模倣しており(下図)、【CD40L + エンハンサー】 の組み合わせに代わって簡易かつ同等以上の免疫反応の活性効果をもたらします。

CD40LとMEGACD40L

使用目的

三量体のCD40L(CD40 ligand)2つをアディポネクチン(ACRP30/AdipoQ)のコラーゲンドメインを介して結合させた、高活性構成体です。in vivoにおけるCD40L の膜介在集合体を効果的に模倣することができます。

特長

  • 高純度:競合品と比べて10-100倍低いエンドトキシン(≦0.1EU/μg)
  • 高活性:CD40Lの膜介在集合体を模倣し、エンハンサー不要で刺激可能
  • 一貫性:ロット間差のない経験豊富な製造工程
  • 安定性:安定性の向上と活性強化のために改良された最適構造

その他

  • 由来:CHO細胞
  • CD40L(CD154)の細胞外ドメイン(aa 116-261)を、N末端でマウスACRP30headless(aa 18-111)およびFLAG®-tagで融合したタンパク質(図1)
  • 生理活性: ヒトCD40との結合、B細胞の活性化

MegaCD40L(TM)の図形表示
図1 本品の図形表示

使用例

左:競合他社品とのエンドトキシン含量の比較 右:SDS-PAGEのクマシーブルー染色
図2
左:競合他社品とのエンドトキシン含量の比較
右:SDS-PAGEのクマシーブルー染色
レーン1:分子量マーカー
レーン2:本品

MegaCD40L(TM)によるB細胞リンパ球の活性化
図3 本品によるB細胞リンパ球の活性化
末梢血単核球(PBMC)を、48ウェルプレートに1×106cells/wellで播種し、5%CO2、37℃で48時間インキュベートした。各ウェルには、段階希釈した本品を添加した血清フリーの試験培地200μLを含む。処理後、細胞を洗浄し、マウス抗ヒトCD19-PE抗体及びマウス抗ヒトCD86-APC抗体で二重染色し、フローサイトメトリーで分析した。各濃度におけるCD86陽性で二重染色されたCD19陽性B細胞のパーセントを表示した。

MEGACD40L®とCD40L(品番:ALX-850-064)とのB細胞の活性化比
図4 MEGACD40L®とCD40L(品番:ALX-850-064)とのB細胞の活性化比

信頼性の高い製造工程による一貫した試験結果
図5 信頼性の高い製造工程による一貫した試験結果
本品の連続する7つの製造ロットについて、B細胞活性化アッセイを用いてロット間差を試験した(1000ng/mL)。

安定なタンパク質
図6 安定なタンパク質
本品を37℃、25℃、4℃、-20℃に2ヶ月間保存し、B細胞活性化アッセイにより、タンパク質活性をテストした。過酷な保存条件でもタンパク質の活性が保たれていることが示唆された。

MEGACD40L®

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
MEGACD40L(R) Protein (soluble), Human詳細データ ENZ ALX-522-110-C010 10 UG
¥94,000
MEGACD40L (soluble), Mouse詳細データ ENZ ALX-522-120-C010 10 UG
¥101,000

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