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記事ID : 17131
研究用

免疫反応の活性化を促進KillerTRAIL™ / SuperKillerTRAIL™ : 改良型TRAIL

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KillerTRAIL™ / SuperKillerTRAIL™ は、Enzo社独自の Killer™ リンカーペプチドを利用した改良型リガンドで、三量体化を促進し、安定したオリゴマーを形成します。
オリゴマーの形成により、リガンドの安定性が向上し、免疫反応の活性化が促進されます。

また、SuperKillerTRAIL™ は、ジスルフィド結合の形成が増加するように変異させた Killer™ リンカーペプチドを利用しており、より安定したオリゴマーを形成します。

 

背景

TRAIL とは

TRAIL(TNF-related apoptosis-inducing ligand、TNF関連アポトーシス誘導リガンド)は、アポトーシスと呼ばれる細胞死のプロセスを誘導するタンパク質リガンドです。

TNFリガンドおよび受容体を介したシグナル伝達は、炎症、癌、免疫の仲介に重要な役割を担うことがわかっており、受容体応答の減少または促進を目的とする医薬品開発につながります。このプロセスでは、リコンビナントリガンドの不安定性や、免疫反応の活性化に必要な細胞表面のTNF受容体のクラスタリングを効果的に模倣できないことが問題となる場合があります。

KillerTRAIL™、SuperKillerTRAIL™ などのTNFリガンドがオリゴマーを形成すると、リコンビナントリガンド単独と比較して安定性が向上し、免疫反応の活性化が有意に促進されます。

ヒト TRAIL(peptide aa 95-281)の構造

図1 ヒト TRAIL(peptide aa 95-281)の構造

特長

品名 KillerTRAIL™ (ヒト) SuperKillerTRAIL™ (ヒト)
品番 ALX-201-073-3020
ALX-201-073-C020
ALX-201-115-3010
ALX-201-115-C010
ALX-201-123-C500
別名 Apo-2L, TNFSF 10, CD253
分子量 〜 24kDa (SDS-PAGE) 〜 26kDa
由来

E. coli

ヒト TRAIL(aa 95-281)の細胞外ドメインのN末端に His-tag とリンカーペプチドを融合

E. coli

ヒト TRAIL(aa 95-281)の細胞外ドメインのN末端に His-tag とリンカーペプチドを融合
活性型の多量体構造は挿入変異により安定化されており、cc結合の形成が可能

特異性 ヒト/マウスの TRAIL 受容体、オステオプロテゲリン(OPG)に結合 ヒト TRAIL 受容体に結合
生理活性

10-100ng/mL の濃度でアポトーシスを誘導

注: 活性が強力なため架橋剤は不要。細胞死に TRAIL-R の広範囲な架橋が必要な細胞株(例: Jurkat)には、SuperKillerTRAIL™をご使用ください。

>5ng/mL の濃度でアポトーシスを誘導

注: 活性が強力なため架橋剤は不要。細胞死に TRAIL-R の広範囲な架橋が必要な細胞株(例: Jurkat)に優れた活性を示す。

 

製品データ

KillerTRAIL™

TRAIL感受性細胞のアポトーシス

図2 TRAIL感受性細胞のアポトーシス
KillerTRAIL™ を用いた、Jurkat 細胞 および BJAB 細胞での濃度依存的なアポトーシスの誘導。濃度 10-100ng/mL であっても高い活性を示す。

KillerTRAIL™ により誘導されるアポトーシスの特異性

図3 KillerTRAIL™ により誘導されるアポトーシスの特異性
TRAIL に対するモノクローナル抗体(ヒト)(2E5)(品番 ALX-804-296)を用いた、BJAB 細胞でのアポトーシス誘導の濃度依存的な阻害。KillerTRAIL™ を介した細胞死の特異性を示す。

図4 TRAIL 感受性骨髄細胞株 ML-1 のアポトーシス

図4 TRAIL 感受性骨髄細胞株 ML-1 のアポトーシス

SuperKillerTRAIL™(ヒト)

TRAIL 感受性細胞のアポトーシス

図5 TRAIL 感受性細胞のアポトーシス
SuperKillerTRAIL™(ヒト)を用いて、BJAB 細胞でアポトーシスを誘導すると、濃度 10-15ng/mL で活性を示した。 (Jurkat 細胞では、わずか 1-10ng/mL)

 

よくあるご質問

【01】 TRAIL、KillerTRAIL™、およびSuperKillerTRAIL™の違いを教えて下さい。

アポトーシスを誘導するためには、TRAILが多量体を形成する必要があります。多量体形成レベルの上昇とともに活性も上昇します。TRAILの多量体形成は、例えば Enzo Life Sciences社の「TRAIL, Soluble (human)(recombinant)(品番ALX-522-003) と「Enhancer for Ligands (品番ALX-804-034)」などを利用して行うことができます。「TRAIL, Soluble (human)(recombinant) set (品番ALX-850-018)」には両商品が含まれています。  より簡便に多量体を形成させるために、Enzo Life Sciences社では「KillerTRAIL™」または「SuperKillerTRAIL™」をお奨めします。これら商品はクロスリンキング試薬が不要です。  通常の TRAIL と比較し、KillerTRAIL™ では独自のリンカーペプチドを使用しており、溶液中での三量体形成が可能となります。SuperKillerTRAIL™ にはリンカーペプチドが含まれるだけでなく、挿入した変異により分子間のジスルフィド架橋を形成させて活性型多量体立体構造を安定化させます。このメカニズムにより、高いレベルのリガンドクロスリンキング率、多量体形成率が達成されます。SuprtKillerTRAILTM は、アポトーシスを誘導するためのもっとも強力なTRAILバリアントです。

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【02】 なぜ特定細胞種ではSuperKillerTRAIL™ の方が KillerTRAIL™ に比べてより効果的にアポトーシスが誘導されるのですか。

TRAILによるアポトーシス誘導は、細胞表面上のTRAIL受容体1及び2 に結合することで惹起されます。細胞種によりTRAIL受容体の数は異なります。TRAIL-R2 は TRAIL-R1 に比べてアポトーシス誘導に、より高いレベルのクロスリンキング率が求められます。そのため、JurkatのようなTRAIL-R1欠損細胞などの場合、多重体化率の高いTRAILs (例えば SuperKillerTRAIL™) のみがTRAIL-R2を介したアポトーシス誘導に必要なシグナルを効果的に惹起できます。

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【03】 KillerTRAIL™ と SuperKillerTRAIL™ について、各生物学的活性を安定に保持するためにはどのように取り扱えばよいですか。

融解後は、適切に分注し、-80℃で保存します。全活性を保持するためには、各分注品の希釈タンパク質濃度を0.1 mg/mL以上、容量は20 μL以上にしてください。また、調製や希釈に Enzo Life Sciences社の KillerTRAIL™ Storage and Dilution Buffer (品番ALX-505-005) を使用することをお勧めします。すぐに使用する場合は、予め希釈したKillerTRAIL™ や SuperKillerTRAIL™ を実験で必要となるまで氷上で保存してください。

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【04】 KillerTRAIL™ と SuperKillerTRAIL™ の推奨アッセイ濃度を教えて下さい。

推奨作業希釈幅は、KillerTRAIL™ で10 - 100 ng/mL、SuperKillerTRAIL™ で 2 - 100 ng/mLです。ただし、お客様の実験条件に合わせて調整が必要な場合もあります。

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【05】 KillerTRAIL™ と SuperKillerTRAIL™ の分子量を教えて下さい。

Enzo Life Sciences社の KillerTRAIL™ と SuperKillerTRAIL™ は単量体で、算出された分子量はそれぞれ 24,144 Daと24,350 Daです。SDS-PAGE条件に合わせて還元や変性を行った場合、どちらもおよそ27 kDa程度の位置に泳動されます。

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使用文献

使用文献多数!

KillerTRAIL™(ヒト) PDF
SuperKillerTRAIL™(ヒト) PDF

 

商品リスト

KillerTRAIL™

ヒトリコンビナント、可溶性

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
KillerTRAILTM (soluble), Human詳細データ ENZ ALX-201-073-C020 20 UG
¥84,000
KillerTRAILTM (soluble), Human詳細データ ENZ ALX-201-073-3020 3*20 UG
¥173,000
KillerTRAILTM (soluble), Human詳細データ ENZ ALX-201-123-C500 500 UG
¥279,000

SuperKillerTRAIL™

ヒトリコンビナント、可溶性
品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
SuperKillerTRAILTM (soluble), Human詳細データ ENZ ALX-201-115-C010 10 UG
¥84,000
SuperKillerTRAILTM (soluble), Human詳細データ ENZ ALX-201-115-3010 3*10 UG
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TRAIL, soluble set, Human詳細データ ENZ ALX-850-018-KI01 1 SET
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TRAIL, Soluble, Human詳細データ ENZ ALX-522-003-3010 3*10 UG
¥90,000
TACI, Human詳細データ ENZ ALX-522-033-C050 50 UG
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¥50,000
Anti TRAIL, Human (Mouse) , 2E5詳細データ ENZ ALX-804-296-C100 100 UG
¥71,000

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商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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