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少量サンプルに使用可能！早くて便利なEVs精製カラム MiniPURE-EVsスピンカラム

メーカー名：HansaBioMed OU

EVsのバイオマーカーとしての分析には、スケーラブルで安価、早くて簡単にサンプル調整可能な方法が求められます。複雑なサンプルの処理には超遠心や、密度勾配遠心分離、デッドエンドろ過などが使用されています。しかし、これらの方法は手順が多く、時間がかかり、またサンプルの回収率が低いこともあります。加えて、余剰な色素や抗体を除去する工程は、さらにサンプルのロスにつながります。

MiniPURE-EVs Spin Size Exclusion Chromatography columnは、血漿などのサンプルから、素早く、再現可能なEVs精製が可能です。また、Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)の前の、余剰な色素や抗体を除去するステップを高効率に行うことができます。

特長

スピーディー： MiniPURE-EVsスピンカラムは細胞外小胞（EVs）の迅速な精製が可能
高いサンプル回収率：サンプルを破壊することなく、EVsの高い回収率を実現
再利用性：カラムは再利用が可能で、EVs分離に費用対効果の高いソリューションを提供
汎用性：未処理のバイオフルイド、細胞培養培地からのEVs精製、および余分な色素除去の両方に利用可能
簡便性：簡単な遠心分離で精製可能なため非常に簡便

ワークフロー

製品情報

少量サンプルからのEVs精製

MiniPURE-EVs Spinカラムに100 μLの血漿を充填した。
まず、200×gで3分間遠心を行い、その後カラムに50 μLのPBSを加え、さらに3分間200×gで遠心を行った。合計の溶出量は150 μLで、所要時間は約6分程度だった。
洗浄後、各ろ液の粒子数とタンパク質量について評価し、再利用性を確認した。

血漿からのEVs精製に成功。99％のタンパク質が2回の遠心分離ステップによって除去された。

MiniPURE-EVs Spinによる過剰色素の除去

膜染色色素によるEVsラベリングへの利用

U87由来のEVsを膜染色用色素とともに37℃で1時間インキュベートした。
インキュベーション後、100 μLのサンプルをMiniPURE-EVsスピンカラムに充填し、200 xgで3分間遠心した。標識EVsを含む100 μLの溶出液を回収し、散乱モードと蛍光モードの両方でNTAを用いて分析した。競合他社のスピンカラムを用いた比較試験を並行して行った。

高効率で未結合色素の除去に成功した。

Fluorophore-conjugated antibodyによるEVsラベリングへの利用

COLO由来のEVsを抗CD9抗体（Alexa Fluor 488 conjugated）と37℃で1.5時間インキュベートした。
インキュベーション後、サンプル(100 μL）をMiniPURE-Evsスピンカラムに充填し、200 xgで3分間遠心した。さらに100 μLのPBSを充填し、遠心分離を行った。全溶出液 200 μLを回収し、NTAで分析した。

抗体で標識されたEVsは、90%以上の高効率で精製することに成功した。
デッドエンドろ過と比較した場合、所要時間は6分 vs 90分と非常にスピーディーに精製することが可能。

参考文献

Konoshenko, M. Yu.; Lekchnov, E. A.; Vlassov, A. V.; Laktionov, P. P. Isolation of Extracellular Vesicles: General Methodologies and Latest Trends. BioMed Res. Int. 2018, 2018, 1-27. https://doi.org/10.1155/2018/8545347.
Brennan, K.; Martin, K.; FitzGerald, S. P.; O’Sullivan, J.; Wu, Y.; Blanco, A.; Richardson, C.; Mc Gee, M. M. A Comparison of Methods for the Isolation and Separation of Extracellular Vesicles from Protein and Lipid Particles in Human Serum. Sci. Rep. 2020, 10 (1), 1039. https://doi. org/10.1038/s41598-020-57497-7.
Clos-Sansalvador, M.; Monguiö-Tortajada, M.; Roura, S.; Franquesa, M.; Borràs, F. E. Commonly Used Methods for Extracellular Vesicles’ Enrichment: Implications in Downstream Analyses and Use. Eur. J. Cell Biol. 2022, 101 (3), 151227. https://doi.org/10.1016/j.ejcb.2022.151227.
Rautaniemi, K.; Zini, J.; Löfman, E.; Saari, H.; Haapalehto, I.; Laukka, J.; Vesamäki, S.; Efimov, A.; Yliperttula, M.; Laaksonen, T.; Vuorimaa-Lauk￢kanen, E.; Lisitsyna, E. S. Addressing Challenges in the Removal of Unbound Dye from Passively Labelled Extracellular Vesicles. Nanoscale Adv. 4 (1), 226-240. https://doi.org/10.1039/d1na00755f.

商品リスト

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
miniPURE-EVs Spin: Centrifugal Size Exclusion Chromatography columns	HNB	HBM-MPEVS-12	12 PC [12columns]	￥83,000
miniPURE-EVs Spin: Centrifugal Size Exclusion Chromatography columns	HNB	HBM-MPEVS-24	24 PC [24columns]	￥162,000