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高感度プローブ MitoROS™ OH580 を使ったヒドロキシラジカル検出 Cell Meter™ ミトコンドリア特異的ヒドロキシラジカル検出キット（赤色蛍光）

メーカー名：AAT Bioquest, Inc. (Former ABD Bioquest, Inc.)

Cell Meter™ ミトコンドリア特異的ヒドロキシラジカル検出キットは、生細胞透過性プローブである MitoROS™ OH580 を用いて、生細胞のミトコンドリアのヒドロキシラジカルを検出できるキットです。

背景

ヒドロキシラジカル（OH･、hydroxyl radical）

細胞内のヒドロキシラジカル検出は、細胞内レドックス調節や様々な疾患でのそれらの調節異常を理解する上で重要です。反応性酸素種（ROS）の1つであるヒドロキシラジカル（OH･）は、安定化するために他の分子に対して非常に反応性が高く、一般的には酸化代謝の有害な副産物（生存システムに分子ダメージを引き起こす）であると考えられています。平均存続時間は 10-9 秒と短く、核DNAやミトコンドリアDNA、タンパク質や膜脂質といった近くの生体分子に反応します。

使用目的

本キットで使用している MitoROS™ OH580 は生細胞透過性プローブで、迅速かつ選択的にミトコンドリアのヒドロキシラジカルを標的にします。OH･と反応すると赤色の蛍光を発し、容易に読み取ることができます（Ex/Em = 540/590 nm）。
蛍光マイクロプレートリーダー、蛍光顕微鏡等で使用できます。

構成内容

Component A: MitoROS™ OH580
Component B: アッセイバッファー
Component C: DMSO

プロトコール概要

細胞を用意
MitoROS™ OH580 ワーキング溶液で37℃、60分間インキュベートする
テスト化合物を加えてインキュベートする（OH･誘導）
蛍光上昇をモニター（Ex/Em = 540/590 nm）

製品データ

図1　HeLa 細胞のヒドロキシラジカル測定の蛍光画像
フェントン反応： 1xHBSS バッファー中に 10 µM CuCl₂ および 100 µM H₂O₂ が入った溶液で細胞を37℃、1時間反応させた。
コントロール： 1xHBSS バッファーに置いた HeLa 細胞、細胞核を Hoechst 33342（品番：17530、青）で染色した。