スピンカラムで簡単に分離・抽出 尿中のエクソソームRNA精製キット

本製品は、尿サンプルから迅速なエクソソーム（エキソソーム）RNAの抽出・精製を行えるキットです。

Exosome（エクソソーム）は40〜100 nmの膜小胞で、多くの細胞種が分泌します。

エクソソームは唾液、血液、尿、羊水、悪性腹水等の体液中で観察されます。この小胞は、体内の離れた細胞や組織に情報を伝達する役割があるとする、多数の報告があります。エクソソームに収容されたRNAはRNaseによる分解から免れるため、尿のような体液中を効率よく運搬することができます。このキットを用いれば、エクソソームRNA研究を簡単で迅速かつ確実に行うことができます。また、エクソソームの濃縮と、高感度ダウンストリームアッセイに使用可能なmicroRNAを含む高品質RNAの単離を同時に行うことができます。

Norgen社の尿中エクソソームRNA単離キットは、尿や培養上清からエクソソームRNAを単離、濃縮するオールインワンシステムです。Norgen社専売の樹脂を基剤としたスピンカラムクロマトグラフィーにより精製します。本キットは50の尿サンプルからエクソソームRNAを単離できるよう設計されています。また1〜10 mLの尿サンプルからエクソソームRNAを単離することができます。
エクソソームRNAは阻害物質を含まずに単離できるため、以下に示すように多くの高感度なダウンストリームアッセイに鋳型として用いることができます。

• バイオアナライザー
• リアルタイムPCR法による定量
• RT-PCR法
• ノーザンブロット法
• RNaseプロテクション法
• プライマー伸長法
• 発現アレイ
• 次世代シーケンシング
• RNAクローニング

• 素早く簡単な工程 迅速なスピンカラム法により、複数サンプルが30分以内に処理できます。
• 幅広い尿量に対応 1〜10 mLの尿サンプルからエクソソームRNAを抽出できます。
• フェノール：クロロホルム抽出不要 このキットはフェノールやクロロホルム等、有毒な化学物質を用いずにエクソソームRNAを抽出できます。
• ダウンストリーム実験に適切な、阻害物質を含まないRNAを単離 精製したRNAは、RT-PCR法、ノーザンブロット法、マイクロアレイ等、遺伝子制御や機能解析に係るダウンストリーム実験に利用可能です。

• Slurry B1
• Binding Buffer A
• Lysis Buffer A
• Wash Solution A
• Elution Solution A
• Mini Filter Spin Columns
• Collection Tubes
• Elution Tubes (1.7 mL)
• Product Insert

まず、尿サンプルを遠心し、細胞を沈殿させます。続いて、スピンカラムを用いて尿中エクソソームを回収します。次に、エクソソームを溶解してRNAを放出させると、RNAは樹脂に結合します。この条件下ではRNAのみが樹脂に結合し、不純物は溶出するか樹脂の上部にとどまります。続いて、不純物を除去するため、結合しているRNAを洗浄します。最後に、100 µLの溶出バッファーで精製したRNAを溶出します。下図の手順フローチャートをご覧ください。

図1　各用量の尿からのエクソソームRNA抽出
本キットを用いて、1〜15 mLの尿からエクソソームRNAを抽出し、RNAの収量を従来のナノろ過法と比較した。本キットは、処理した尿量に応じてRNAの収量も直線的に増加した。また、本キットと従来のナノろ過法で10 mLの尿から抽出した場合では、本キットの方が高収量であった。

図2　各尿量から抽出したエクソソームRNA量の測定
本キットを用いて、1〜15 mLの尿量からエクソソームRNAを抽出した。抽出した尿中エクソソームRNAをRT-qPCRの鋳型とし、ヒト5S遺伝子を測定した。3 µLの単離した尿中エクソソームRNAをRTの鋳型とし、cDNAの3 µLをqPCRに供した。確認できるよう、各尿量から単離したRNAでqPCRでの検出と増幅が行えたため、単離した尿中エクソソームRNAは高品質であるといえる。

図3　尿中エクソソームRNAを効果的かつ確実に検出
本キットは、尿からRNAを効果的に単離できる。本キット（青）、他社製キット2種類（緑、赤）を用いて、細胞を除いた5 mLのヒト尿からエクソソームRNAを抽出した。miR-21, miR-16のステムループと、ハウスキーピング遺伝子として5S rRNAをRT-qPCRで測定した。まず、100 µLの単離RNA溶液から3 µLを、5S rRNA, miR-21, miR-16の各リバースプライマーを用いた反応系20 µLの逆転写反応に供した。cDNAの3 µLを、反応系20 µLの各遺伝子のリアルタイムPCR反応に用いた。本キットは唯一、確認したすべての転写産物を品質よく確実に検出した。

関連情報

• 特集：Exosome（エクソソーム・エキソソーム）

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