記事ID ： 14958

糖鎖標識後に未反応のPROCを除去 LudgerClean™ プロカインアミドクリーンアッププレート

メーカー名：Ludger Ltd.

LudgerClean™ プロカインアミドクリーンアッププレートは、糖鎖（グリカン）をプロカインアミド（PROC）で標識した後に、未反応のプロカインアミドを除去するためのプレートです。過剰なプロカインアミドが、その後のサンプル解析に影響する場合にご使用いただけます。

本製品は、特殊な糖鎖結合メンブレンが装着された、96ウェルメンブレンボトムフィルタープレートです。一般的な吸引濾過用マニホールドと一緒に使用します。未反応のプロカインアミドはメンブレンを通過しますが、糖鎖はメンブレンに結合するため、両者の分離が可能になります。

【関連商品】

LudgerTag™　PROC (プロカインアミド) 糖鎖標識キット
- 蛍光標識法による糖鎖（グリカン）解析に

特長

サンプル数：最大96サンプル
サンプル量：最大 350μL / ウェル
適したサンプル：プロカインアミド標識糖鎖

構成内容

LudgerClean™ 96ウェルプロカインアミド標識糖鎖クリーンアッププレート　×1

プロトコール概略

吸引濾過用マニホールドを組み立てる
プロカインアミドクリーンアッププレートの準備
プロカインアミド標識糖鎖サンプルの調製
サンプルをプレートに添加する
糖鎖以外の混入物を洗浄により除去する
標識糖鎖を溶出する
糖鎖を乾燥させる

FAQ

【01】溶液がメンブレンを通過しません

メンブレンはあらかじめエタノールで湿らせておいてください。そうしないと、溶液がメンブレンを通過しません。

【02】標識後のサンプルを精製することはなぜ重要なんですか？

標識後のサンプルには、余分な色素、塩、その他標識試薬などの非糖鎖物質が含まれています。余分な試薬や汚染物質は蛍光検出、クロマトグラフィー分離に干渉し、カラムの寿命を短くしてしまい、それにより方法のロバストネスを損なう可能性があります。また、MALDI-MSやLC-MS解析に影響を与え、複雑にしてしまう可能性があります。そのため、HPLC や MALDI-MS、LC-MS解析する前にサンプルを精製することをお奨めします。

上図は、エリスロポエチン (EPO) 糖タンパク質から遊離した N-結合型糖鎖の BEH HILIC UHPLCプロファイルです。糖鎖はプロカインアミドで標識しています (品番LT-KPROC-24を使用) 。Aは、解析前にサンプルを精製しておらず、4つのサンプルのオーバーレイを示します。残った色素が分離を妨げて、再現性のない結果 (メインのピークのCV値が25% まである) が生じていることが分かります。Bは、標識後の同じサンプルをHILIC SPE (品番LC-PROC-96) で精製したものです。サンプル間のばらつきが減少し、再現性が改善しています。

Ludger社では、2-AAや2-AB、プロカインアミド、APTSで標識した糖鎖の精製に最適化した商品やLC、MSアプリケーション用に特別に設計された精製方法を提供しています。精製技術の詳細については、こちらをご覧ください。