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記事ID : 14957
研究用

蛍光標識法による糖鎖解析に!還元剤は2種類ご用意 LudgerTag™ PROC(プロカインアミド)糖鎖標識キット

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特長

色素の特性

分子量 = 235.33
励起波長 = 310 nm、蛍光波長 = 370 nm

PROC (プロカインアミド)
標識可能なサンプル数 標識試薬1セットにつき、12サンプルの標識が可能(合計24サンプル)
必要なサンプル量 1サンプルにつき、25 pmol - 25 nmol の糖鎖
適したサンプル フリーの還元末端を持つ精製された糖鎖

構成内容

本キットには、試薬が2セット(標識反応2回分)含まれます。

  • プロカインアミド色素 (品番:LT-PROC-01) ×2本
  • 2-PB 還元剤(2-ピコリンボラン) (品番:LT-PB-01) ×2本
    または、NaCNBH3 還元剤(シアノ水素化ホウ素ナトリウム) (品番:LT-CYANOB-05) ×2本
  • 30% 酢酸 in DMSO (品番:LT-ACETIC-DMSO-01) ×2本

原理

標識は2段階の反応からなります。

  1. シッフ塩基の形成
    この反応には、閉環構造と開環構造が平衡状態にあるフリーの還元末端を持つ糖鎖が必要です。色素の第一級アミンが、開環状の還元末端残基のカルボニル炭素に求核攻撃し、部分的に安定したシッフ塩基を形成します。
  2. シッフ塩基の還元
    シッフ塩基(イミン)は化学的に還元され、安定した標識糖鎖が生成されます。

図1 還元的アミノ化による糖鎖のプロカインアミド(PROC)標識

図1. 還元的アミノ化による糖鎖のプロカインアミド(PROC)標識

プロトコール概略

  1. 糖鎖を精製する(必要に応じて)
  2. サンプルを反応バイアルに移す
  3. サンプルを乾燥させ、水 10μL に再溶解する
  4. 色素溶液の調製
  5. サンプルに標識試薬を添加する
  6. インキュベート
  7. 遠心分離後に室温に冷却

使用例

図2 プロカインアミド標識ヒト IgG 糖鎖のUHPLC分析
(画像はクリックで拡大されます)

図2. プロカインアミド標識ヒト IgG 糖鎖のUHPLC分析
標識後のサンプルクリーンアップは行っていない。

図3 プロカインアミド標識エリスロポエチン糖鎖のUHPLC分析
(画像はクリックで拡大されます)

図3. プロカインアミド標識エリスロポエチン糖鎖のUHPLC分析
標識後のサンプルクリーンアップは行っていない。

参考文献
  1. Lucy et al., Prominent members of the human gut microbiota express endo-acting O-glycanases to initiate mucin breakdown. Nat Commun . 2020 Aug 11;11(1):4017. [DOI]10.1038/s41467-020-17847-5,(品番:LT-KPROC-24)
  2. Daniel et al., Interlaboratory evaluation of plasma N-glycan antennary fucosylation as a clinical biomarker for HNF1A-MODY using liquid chromatography methods. Glycoconj J . 2021 Jun;38(3):375-386. doi: 10.1007/s10719-021-09992-w.(品番:LT-KPROC-96)
  3. Radoslaw et al., Tsetse salivary glycoproteins are modified with paucimannosidic N-glycans, are recognised by C-type lectins and bind to trypanosomes. PLoS Negl Trop Dis . 2021 Feb 2;15(2):e0009071. doi: 10.1371/journal.pntd.0009071.(品番:LT-KPROC-VP24)

LudgerTag™ PROC(プロカインアミド)糖鎖標識キット

■ 還元剤:2-PB(2-ピコリンボラン)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Procainamide Glycan Labeling Kit, 2PB reductant詳細データ LUD LT-KPROC-VP24 1 KIT
[24サンプル]
¥163,000
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■ 還元剤:NaCNBH3(シアノ水素化ホウ素ナトリウム)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Procainamide Glycan Labeling Kit, sodium cyanoborohydride reductant詳細データ LUD LT-KPROC-24 1 KIT
[24サンプル]
¥163,000
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【関連商品】 Ludger Clean™ プロカインアミド クリーンアップ プレート

標識後のサンプルのクリーンアップ(未反応の色素やその他の標識試薬の除去)にご使用いただけるプレート(96ウェル)です。

 

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
LudgerClean Plate for Procainamide Glycan Clean Up詳細データ LUD LC-PROC-96 96 WELL
¥51,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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