定量PCRや高感度融解温度曲線（HRM）解析に最適なマスターミックス FORGET-ME-NOT™ qPCR Master Mix

Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR マスターミックスは、定量リアルタイムPCR（qPCR）と高解像度融解曲線分析（high-resolution melt curve analysis：HRM）の両方でお使いいただけます。
本製品は、EvaGreen® 色素をベースとした、Ready-to-useのホットスタートqPCRマスターミックスです。 EvaGreen® の吸収及び発光スペクトルはSYBR® GreenやFAMと類似しているため、本製品はSYBR® Green 色素ベースのマスターミックスと同じ設定でお使いいただけます。また、 Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR マスターミックスには、低濃度の不活性青色色素が含まれているため、マスターミックスを含むウェルを簡単に目視で確認できます。

また、マスターミックスとテンプレートを混合すると、薄い青色（マスターミックスのみ）から濃い青色に変化する DNA テンプレートバッファー (濃い青色の染料) を含む、2-color tracking systemを備えたキットもございます(図3)。 2-color tracking systemにより、入れ忘れ等によるピペッティングのミスを防ぎ、時間、試薬、貴重な DNA サンプルを無駄にすることを避けることができます。

• EvaGreen® 蛍光色素（20X）

• PCR 阻害が非常に小さい：PCR に対する阻害性が低いため、より多くの色素を使用でき、強い融解曲線シグナルを得ることができます。（図1）
• 強い蛍光シグナル：他のqPCR試薬と比較して、より明瞭なシグナルを検出できます。（図2）
• 高い安定性：保管およびPCR条件下において、高い安定性をもちます。
• 高い安全性：EvaGreen® 色素は細胞膜不浸透性の構造を有するため SYBR® Green I などの他の市販のPCR色素よりも安全な色素です。 詳しくは、EvaGreen®色素の安全性に関するレポートをご覧ください。
• 実験資源の節約：低濃度の不活性青色色素が含まれているため、試薬の入れ忘れを防ぎます。（図3）
• ホットスタートPCR：FCheetah™ Hotstart Taq DNA ポリメラーゼは室温では完全に不活性化されている一方で 、 95°C 、 2 分で完全に活性化され、迅速なサイクリングプロトコルが利用可能です。

EvaGreen® 色素のデータ

図1　Forget-Me-Not™ EvaGreen® マスターミックス（青色）とSYBR® Green マスターミックス (灰色：他社品SYBR® Green色素ベース）を使用した GAPDH qPCR 産物の融解曲線分析
EvaGreen® Dye は SYBR® Green よりも PCR に対する阻害性が低いため、より多くの色素を使用でき、より強い融解曲線シグナルを得ることができます。

図2　EvaGreen®色素ベースのqPCRマスターミックス（Forget-Me-Not™ EvaGreen® master mix[青色]）とFast EvaGreen® qPCR Master Mix[緑色]）とSYBR® Green 色素ベースのqPCRマスターミックス（他社品[灰色]）のリアルタイムPCRデータの比較

【Forget-Me-Not™ EvaGreen® マスターミックス（Low ROX / High ROX）】
・Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR マスターミックス

【Forget-Me-Not™ EvaGreen® マスターミックス（2-color tracking system）】
・Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR マスターミックス
・Forget-Me-Not™ テンプレートバッファー
・ROX Passive Reference Dye (品番：31042のみ)

図3　Forget-Me-Not™ EvaGreen® マスターミックス（2-color tracking system）の溶液変化
薄い青色のマスターミックスに、濃い青色のテンプレートバッファーを含むテンプレートを混合することで色が2段階で変化し、入れ忘れ等のピペッティングのミスを防ぎ、時間、試薬、貴重な DNA サンプルを無駄にすることを避けることができます。

ROXは、ウェル間の光学的変動を補正するために、一部の qPCR システムでパッシブリファレンス色素として必要です。リアルタイム PCR 装置のパッシブ色素の要件については、表2をご参照ください。

*ROX リファレンス色素を必要としない装置は、通常、ROXを含むqPCRマスターミックスと互換性があります。 (使用前にメーカーにご確認ください)。また、 ROXなしのForget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR マスターミックス(品番：31041)と、独自のLowまたはHigh ROX マスターミックスの作製に使用できるROX別バイアル付き製品(品番：31042)もございます。
**Bio-Rad の iCycler™ ユーザーは、EvaGreen® 色素がわずかなバックグラウンド蛍光を持ち、適切で安定したベースライン レベルの蛍光を提供するため、PCR 反応にフルオレセインを追加する必要はありません。これらの機器には、ROX を含まない Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR Master Mix (品番：31041) の使用をお勧めします。

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