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1組織スライド上で最大12ターゲットの可視化が可能 RNAscope™ HiPlexアッセイ

メーカー名：Advanced Cell Diagnostics, a brand of Bio-Techne Corporation

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RNAscope™ とは、FFPE 組織、凍結組織、培養細胞等のサンプル中の mRNA を独自の RNA in situ ハイブリダイゼーション（ISH）法により検出・視覚化する新しい技術です。

RNAscope™ HiPlexアッセイは、ターゲット特異的に結合するプローブを1度に結合させた後に、3~4ターゲットずつの可視化を行います。繰り返すことで、1組織上で最大12ターゲットの染色が可能です（画像の組み合わせには専用のソフトウェアが必要となります）。

図1. RNAscope™ HiPlexアッセイ(#324409)の概要

従来のHiPlexアッセイキットは固定凍結切片および新鮮凍結切片がアッセイに使用できる組織サンプルでしたが、バージョンアップによってFFPE組織に対しても適用が可能となりました。

■変更点
	旧バージョン(品番324107・324108)	新バージョン(品番324409・324419)
キット内の自家蛍光防止試薬	無	有
適用可能なサンプル	固定凍結切片・新鮮凍結切片	FFPE組織切片・固定凍結切片・新鮮凍結切片
色素	Alexa Fluor 488, Atto 550, Atto 647N, Alexa Fluor 750	Alexa Fluor 488, Dylight 550, Dylight 650, Alexa Fluor 750

アッセイ例

図2. RNAscope™ HiPlexアッセイによる、マウス脳組織上での12ターゲットの染色

図3. RNAscope™ HiPlexアッセイによる12ターゲットの染色と免疫組織染色を組み合わせた染色例

プロトコル

キット＼使用サンプル	FFPE,固定凍結,新鮮凍結^＊1
HiPlex12 (488, 550, 650, 750) v2	PDF
HiPlex12 (488, 550, 650) v2	PDF

^*1：プロトコルにスチーマーを使う記述がございますが、代替法としてこちらのヒーターと耐熱容器を使用した方法を推奨させて頂いております。(サーモメーター等で温度を確認しながら実施ください)

必要な試薬と機器

ターゲットプローブ, プローブ希釈溶液
試薬キット, ソフトウェア
ポジティブコントロールプローブ
ターゲットの種由来（human，mouse，rat）ごとに用意がございます。
ネガティブコントロールプローブ
各生物種共通のものになります。
疎水性撥水ペン
必要機器（ハイブリダイゼーションシステム）
その他関連試薬

1. ターゲットプローブ, プローブ希釈溶液

RNAscope™ HiPlexアッセイキットで多重染色を行う場合、異なるチャネル（T1～T12）のプローブが必要となります。

【ご注意】
RNAscope™ のターゲットプローブ（C1-C4）はご利用いただくことはできません。また、RNAscope™ HiPlexアッセイキット用のプローブも通常のRNAscope™ アッセイにはご利用いただけません。各キット専用のターゲットプローブをお買い求めください。

■既存プローブ（メーカーデザイン済みの場合）
Advanced Cell Diagnostics社のプローブ検索ページはこちら

プローブの検索方法はこちら

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
ターゲットプローブ（T1）	ADC	XXXXXX-T1^*1	1 vial (10 slide分)	¥76,000
ターゲットプローブ（T2）	ADC	XXXXXX-T2^*1	1 vial (10 slide分)	¥76,000
ターゲットプローブ（T3）	ADC	XXXXXX-T3^*1	1 vial (10 slide分)	¥76,000
ターゲットプローブ（T4）	ADC	XXXXXX-T4^*1	1 vial (10 slide分)	¥76,000
ターゲットプローブ（T5）	ADC	XXXXXX-T5^*1	1 vial (10 slide分)	¥76,000
ターゲットプローブ（T6）	ADC	XXXXXX-T6^*1	1 vial (10 slide分)	¥76,000
ターゲットプローブ（T7）	ADC	XXXXXX-T7^*1	1 vial (10 slide分)	¥76,000
ターゲットプローブ（T8）	ADC	XXXXXX-T8^*1	1 vial (10 slide分)	¥76,000
ターゲットプローブ（T9）	ADC	XXXXXX-T9^*1	1 vial (10 slide分)	¥76,000
ターゲットプローブ（T10）	ADC	XXXXXX-T10^*1	1 vial (10 slide分)	¥76,000
ターゲットプローブ（T11）	ADC	XXXXXX-T11^*1	1 vial (10 slide分)	¥76,000
ターゲットプローブ（T12）	ADC	XXXXXX-T12^*1	1 vial (10 slide分)	¥76,000

^*1：XXXXXX にはターゲットにより異なる任意の数字が入ります。

【ご注意】
全てのプローブは50倍濃縮で提供されており、アッセイ時に希釈溶液で希釈いただく必要があります。RNAscope™ HiPlex Probe Diluentをご利用ください。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
RNAscope^TM HiPlex Probe Diluent	ADC	324301	1 BOTTLE [2 ml]	￥28,000

■既存ブローブが無い場合
プローブのカスタム作製も承ります。以下の見積もりフォームからお問い合わせください。

見積依頼

プローブのカスタム作製時、または既存プローブのチャネル変更時には別途でセットアップ料金がかかります。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Setup fee for New RNAscope/BaseScope/miRNAscope Probe	ADC	320269	1 SERV.	￥85,000

2. 試薬キット、ソフトウェア

4ターゲットx3回、及び3ターゲットx4回の試薬がございます。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
RNAscope^TM HiPlex12 Reagents Kit (488, 550, 650, 750) v2	ADC	324409	1 KIT [for 20 slides]	￥1,113,000
RNAscope^TM HiPlex12 Reagents Kit (488, 550, 650) v2	ADC	324419	1 KIT [for 20 slides]	￥1,113,000

RNAscope™ HiPlexキットを用いた染色画像の組み合わせには以下のソフトウェアが必須となります。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
RNAscope^TM HiPlex Image Registration Software	ADC	300065	1 EACH	お問い合わせ

*ターゲットプローブのチャネルと蛍光色素の組み合わせは予め以下のように決まっています。

■品番：324409
ターゲットプローブのチャネル	蛍光色素
T1, T5, T9	Alexa Fluor 488
T2, T6, T10	Dylight 550
T3, T7, T11	Dylight 650
T4, T8, T12	Alexa Fluor 750

■品番:324419
ターゲットプローブのチャネル	蛍光色素
T1, T4 T7, T10	Alexa Fluor 488
T2, T5, T8, T11	Dylight 550
T3, T6, T9, T12	Dylight 650

3. ポジティブコントロールプローブ

生物種ごとにご用意がございます（human=Hs，mouse=Mm，rat=Rn）。
12ターゲットのプローブ混合品がコントロールプローブとなります。8ターゲットの染色時にも以下のコントロールプローブをご利用ください。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
RNAscope^TM HiPlex12 Positive Control Probe - Hs, Human	ADC	324311	1 VIAL [(for 10 slides)]	￥46,000
RNAscope^TM HiPlex12 Positive Control Probe - Mm v2	ADC	324433	1 VIAL [(for 10 slides)]	￥46,000
RNAscope^TM HiPlex12 Positive Control Probe - Rn v2	ADC	324434	1 VIAL [(for 10 slides)]	お問い合わせ

4. ネガティブコントロールプローブ

各生物種共通のものになります。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
RNAscope^TM HiPlex12 Negative Control Probe	ADC	324341	1 VIAL [(for 10 slides)]	￥46,000

5. 疎水性撥水ペン

スライド上に疎水性の境界線を描けるペンです。
プローブやバッファーの流出を防ぎます。

*他社のペンは、40℃のハイブリダイゼーション反応中にバリアが溶ける場合がございますので推奨しません。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Hydrophobic Barrier Pen	ADC	310018	1 PC	￥15,000

6. 必要機器（ハイブリダイゼーションシステム）

HybEZ™ ハイブリダイゼーションシステムは、RNAscope™ アッセイ用に開発されています。

*ADC社では、HybEZ™ ハイブリダイゼーションシステムを用いた場合のみ、RNAscope™ in situ hybridization の性能を保証しております。同システム以外のオーブンでご使用頂いた場合、結果不良の際のサポート対象外となります。
*初回ご検討用のレンタル機をご用意しております。ご予約制となりますので、ご希望の期間等、ご相談ください。

名称	HybEZ™ II Hybridization System With EZ-Batch Slide System
品番	321710
本体写真
電力定格	155W
加熱率	20分以内に常温～40℃まで加熱可
寸法(WxDxH)	28（W）×40（D）×21（H）cm
重量(kg)	9.5

オーブンに冷却機能がないため、外気温より低い温度に設定した場合、設定温度通りにはなりません。

付属品
	321710
オーブン本体	●
電源コード	●
ユーザーマニュアル	●
HybEZ™ Humidity トレイ	●
EZ-Batch™ スライドホルダー	●
EZ-Batch™ 洗浄トレイ	●
浸潤ペーパー2枚（品番310015の一部）	●

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
HybEZ^TM II Hybridization System (110v)With ACD EZ-Batch Slide System	ADC	321710	1 SYSTEM	￥920,000
HybEZ^TM 湿潤紙 / HybEZ^TM Humidifying Paper	ADC	310015	1 SET [15pack]	￥17,000