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記事ID : 13292
研究用

超高感度な蛍光多重染色 ISHアッセイ RNAscope™ マルチプレックス蛍光アッセイ Version 2

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(2022/11/10) Advanced Cell Diagnostics社推奨の色素 TSA vivid が新しく発売になりました。以下のマニュアルPDFも併せてご覧ください。

RNAscope™ マルチプレックス蛍光アッセイV2(バージョン2)は、Tyramide Signal Amplification technology (TSA™) システムを採用しており高感度な蛍光検出が可能です。TSA vivid色素を用いれば最大3-plex、
Opal色素※と補助試薬(品番323120)を併用すれば最大4-plexのアッセイが可能です。
※Opal色素はAkoya Biosciences社からご購入頂く必要がございます。

マニュアル

キット\使用サンプル FFPE、固定凍結、新鮮凍結※2 培養細胞(接着細胞)※1 培養細胞(浮遊細胞)※1 PBMC※1
蛍光アッセイ Version 2 PDFnew! PDF PDF PDF
4重染色する場合※3 PDF

※1 これらのマニュアルはサンプルの前処理方法のみが記載されております。
  染色の手順に関しましては「FFPE、固定凍結、新鮮凍結」用のマニュアルに書かれている手順を併せてご参照ください。
※2 プロトコルにスチーマーを使う記述がございますが、代替法としてこちらのヒーターと耐熱容器を使用した方法を推奨させて頂いております。(サーモメーター等で温度を確認しながら実施ください)
 また、封入剤はProlong Goldを推奨しております。その他に、VECTASHIELD with DAPIやDako fluorescent mounting mediumもご使用いただけます。Fluoromont GとProlong Diamondは蛍光シグナルが不安定になることがございますので、推奨いたしません。
※3 試薬キットとは別にRNAscope™ 4-Plex Ancillary Kit for Multiplex Fluorescent Kit v2(品番323120)が必要となります。サンプルの前処理方法は各サンプル種ごとのマニュアルをご参照ください。

免疫染色との組み合わせを実施したい方はこちらも併せてご覧ください。

 

蛍光アッセイ例

蛍光アッセイ バージョン2

マウス脳FFPE組織切片の神経マーカーの検出
マウス脳FFPE組織切片の神経マーカーの検出
Vglut1(赤色)、Vglut2(緑色)、GABAergic neurons Vgat(白色)、DAPI(青色)
ヒト子宮頸がんFFPE組織でのバイオマーカーの検出
ヒト子宮頸がんFFPE組織でのバイオマーカーの検出
KRT19(緑色)、CD8A(黄色)、CD4(赤色)、CD68(白色)

ヒト肺がんFFPE組織でのバイオマーカーの検出
ヒト肺がんFFPE組織でのバイオマーカーの検出
KRT19(緑色)、CD8A (黄色)、CD4(赤色)、CD68(白色)

必要な試薬と機器

  1. ターゲットプローブ
  2. 試薬キット及び蛍光色素
  3. ポジティブコントロールプローブ
    :ターゲットの種由来(human,mouse,rat)ごとにご用意がございます。
  4. ネガティブコントロールプローブ
    :各種共通のものになります。
  5. コントロールスライド
    :ターゲットと同一の種由来 (humanまたはmouse/rat)のものをご選択下さい。
  6. 疎水性撥水ペン
  7. ハイブリダイゼーションシステム
  8. その他関連試薬

1.ターゲットプローブ

RNAscope™ で多重染色を行う場合、異なるチャネル(C1、C2、C3、C4)のプローブが必要となります。 
*C4プローブの使用にあたっては補助試薬(品番:323120)が必要です。

既存プローブ(メーカーデザイン済みの場合)

:Advanced Cell Diagnostics社のプローブ検索ページはこちら

プローブの検索方法はこちら

品名メーカー品番包装希望販売価格
ターゲットプローブ(C1) ADC XXXXXX*1 1 vial
(20 slide分)
¥125,000
ターゲットプローブ(C2) ADC XXXXXX-C2*1 1 vial
(20 slide分)
¥125,000
ターゲットプローブ(C3) ADC XXXXXX-C3*1 1 vial
(20 slide分)
¥125,000
ターゲットプローブ(C4) ADC XXXXXX-C4*1 1 vial
(20 slide分)
¥125,000

*1XXXXXX にはターゲットにより異なる任意の数字が入ります。
:既存ブローブが無い場合、プローブのカスタム作製も承ります。カスタム作製時、または既存プローブのチャネル変更時には別途でセットアップ料金がかかります。

品名
メーカー
品番
包装
希望販売価格
Setup fee for RNAscope new target ADC 320269 1 serv. ¥85,000
C2、C3、C4プローブは50倍濃縮で提供されており、通常はアッセイ時に C1プローブで希釈いたします。C1プローブを使用せずにアッセイを行う場合(例:C2プローブのみ、C2・C3プローブのみのアッセイ)は、希釈液として品番:300041 の C1 Blank Probe Diluent を使用する必要があります。

2.試薬キット及び蛍光色素

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscopeTM Multiplex Fluorescent Reagent Kit v2 with TSA Vivid Dyes詳細データ ADC 323270 1 KIT
[(for 20 slides)]
¥478,000
RNAscopeTM Multiplex Fluorescent Reagent Kit v2詳細データ ADC 323100 1 KIT
[(for 20 slides)]
¥371,000
TSA Vivid Fluorophore 520詳細データ ADC 323271 1 EACH
¥40,000
TSA Vivid Fluorophore 570詳細データ ADC 323272 1 EACH
¥40,000
TSA Vivid Fluorophore 650詳細データ ADC 323273 1 EACH
¥40,000

<ご注意>

品番323100につきまして

TSA vividが含まれておりませんので必要に応じ別途ご購入ください。TSA vividでは3-plexまでの染色が可能です。
4-plexの場合は、Opal色素※、及び下記「8. その他関連試薬」に記載の4-plex Ancillary Kit(品番323120)、4-plex用のコントロールプローブもご購入頂く必要がございます。
※Akoya Biosciences社よりご購入頂けます。

3.ポジティブコントロールプローブ(ヒト用、マウス用)

ターゲットの種由来(human,mouse,rat)ごとにご用意がございます。

注1:コントロールプローブの種類はplex数に応じて異なります。
注2:C2、C3プローブは50倍濃縮で提供されており、通常はアッセイ時にC1プローブで希釈いたします。C1プローブを使用せずにアッセイを行う場合(例:C2プローブのみ、 C3プローブのみ 、C2・C3プローブのみのアッセイ)は、希釈液として品番300041のC1 Blank Probe Diluentを使用する必要があります。
品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscopeTM Positive Control Probe - Hs-PPIB, Human ADC 313901 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscopeTM Positive Control Probe - Mm-Ppib, Mouse ADC 313911 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscopeTM 2.5 Duplex Positive Control Probe PPIB-C1/POLR2A-C2 - Hs, Human ADC 321641 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscopeTM 2.5 Duplex Positive Control Probe PPIB-C1/POLR2A-C2 - Mm, Mouse ADC 321651 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscopeTM 3-plex Positive Control Probe - Hs, Human ADC 320861 1 VIAL
[for 20 slides]
¥25,000
RNAscopeTM 3-plex Positive Control Probe - Mm, Mouse ADC 320881 1 VIAL
[for 20 slides]
¥25,000
RNAscopeTM Blank Probe Diluent- C1 ADC 300041 1 VIAL
[for 20 slides]
¥21,000

4.ネガティブコントロールプローブ(各種共通)

ネガティブコントロールプローブは各種共通です。

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscopeTM Negative Control Probe-DapB ADC 310043 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscopeTM 2-plex Negative Control Probe詳細データ ADC 320751 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscopeTM 3-plex Negative Control Probe ADC 320871 1 VIAL
[for 20 slides]
¥25,000

5.コントロールスライド

ターゲットと同一の動物種(humanまたはmouse)をご選択ください。

ポジティブコントロールの発現が確認されている細胞ペレットのFFPE 切片です。
サンプルがヒト、マウスの FFPE 切片の時に使用します。凍結切片等の他のサンプルの場合や、ヒト、マウス以外の動物種の場合はご自身でポジティブコントロールの発現が確認されているスライドをご用意ください。

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscopeTM Control Slides - Human Hela Cell Pellet, Human ADC 310045 1 UNIT
[4 slides]
¥36,000
RNAscopeTM Control Slides - Mouse 3T3 Cell Pellet, Mouse ADC 310023 1 UNIT
[4 slides]
¥36,000

6.疎水性撥水ペン

スライド上に疎水性の境界線を描けるペンです。
プローブやバッファーの流出を防ぎます。

*他社のペンは、40℃のハイブリダイゼーション反応中にバリアが溶ける場合がございますので推奨しません。

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Hydrophobic Barrier Pen ADC 310018 1 PC
¥15,000

7.必要機器(ハイブリダイゼーションシステム)

HybEZ™ ハイブリダイゼーションシステムは、RNAscope™ アッセイ用に開発されています。

*ADC社では、HybEZ™ ハイブリダイゼーションシステムを用いた場合のみ、RNAscope™ in situ hybridization の性能を保証しております。同システム以外のオーブンでご使用頂いた場合、結果不良の際のサポート対象外となります。
*初回ご検討用のレンタル機をご用意しております。ご予約制となりますので、ご希望の期間等、ご相談ください。

名称 HybEZ™ II Hybridization System With EZ-Batch Slide System
品番 321710
本体写真 HybEZ™ II Hybridization System With EZ-Batch Slide System
電力定格 155W
加熱率 20分以内に常温〜40℃まで加熱可
寸法(WxDxH) 28(W)×40(D)×21(H)cm
重量(kg) 9.5

オーブンに冷却機能がないため、外気温より低い温度に設定した場合、設定温度通りにはなりません。

付属品
  321710
オーブン本体
電源コード
ユーザーマニュアル
HybEZ™ Humidity トレイ
EZ-Batch™ スライドホルダー
EZ-Batch™ 洗浄トレイ
浸潤ペーパー2枚(品番310015の一部)
品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
HybEZTM II Hybridization System (110v)With ACD EZ-Batch Slide System詳細データ ADC 321710 1 SYSTEM
¥920,000
HybEZTM 湿潤紙
HybEZTM Humidifying Paper詳細データ
ADC 310015 1 SET
[15pack]
¥17,000

8. その他関連試薬

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscopeTM Multiplex Fluorescent Detection Kit V2 (Kit Components) ADC 323110 1 KIT
[(for 20 slides)]
¥334,000
RNAscopeTM 4-Plex Ancillary Kit for Multiplex Fluorescent Kit v2 ADC 323120 1 KIT
[(for 20 slides)]
¥28,000
RNAscopeTM H202 & Protease Plus Reagents詳細データ ADC 322330 1 KIT
[for 20 slides]
¥43,000
RNAscopeTM Target Retrieval Reagents詳細データ ADC 322000 4*70 ML
¥21,000
RNAscopeTM Protease III & Protease IV Reagents詳細データ ADC 322340 1 KIT
[for 20 slides]
¥28,000
RNAscopeTM H2O2 and Protease Reagents詳細データ ADC 322381 1 KIT
[for 20 slides]
¥43,000
RNAscopeTM 4-plex Negative Control Probe ADC 321831 1 VIAL
[20 slides/unit]
¥25,000
RNAscopeTM 4-plex Positive Control Probe - Hs ADC 321801 1 VIAL
[20 slides/unit]
¥25,000
RNAscopeTM 4-plex Positive Control Probe - Mm ADC 321811 1 VIAL
[20 slides/unit]
¥25,000
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ページ最下部のフォームからもカスタムプローブの作成可否をご確認いただけます。
以下情報をお伝えください。

  • RNAscopeの使用経験の有無
  • ご使用予定のキット (例:RNAscope(R) Multiplex Fluorescent Reagent Kit v2)
  • 自動染色機器使用の有無
  • ターゲット遺伝子の生物種
  • プローブを使用する組織の生物種
  • ターゲット遺伝子のAccession No.かGene ID
  • 作製希望のチャネル (例:C1)

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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「RNAscope™ マルチプレックス蛍光アッセイ Version 2」は、下記のカテゴリーに属しています。

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