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記事ID : 13292
研究用

超高感度な蛍光多重染色 ISHアッセイRNAscope® マルチプレックス蛍光アッセイ Version 1 & 2

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RNAscope® マルチプレックス蛍光アッセイは、蛍光検出により、シングルアッセイ、2-plex アッセイ、3-plex アッセイが可能です。
RNAscope® マルチプレックス蛍光アッセイV2(バージョン2)は FFPE 組織サンプルに最適なAkoya Biosciences社の Tyramide Signal Amplification technology (TSA™) システムを採用し、さらに感度を高めました。(別途Akoya Biosciences社の蛍光色素の購入が必要です。)補助試薬を合わせることで最大 4-plex アッセイが可能です。

新規導入時の組み合わせにお悩みの方へ

 

2つのキットの比較表
  バージョン1 バージョン2
品番 320850 323100
特長 3-plexまでの蛍光アッセイ FFPE組織に最適なTSA色素を使用した4-plexまでの蛍光アッセイ
別途購入が必要な試薬 なし Akoya Biosciences社 TSA® Plus 試薬
蛍光色素 Alexa 488、Atto 550、Atto 647
(検出キット内に Amp4 として含まれています) *1
下記表を参照
4-plexの可否 4-Plex Ancillary Kit(品番 323120)を購入して可能
組織切片サンプルのタイプ 新鮮凍結切片、固定凍結切片、培養細胞*2 FFPE切片、新鮮凍結切片、固定凍結切片、培養細胞
検出に適した遺伝子の発現レベル 高発現 低発現
アッセイ時間 6-8時間 14時間 (2日間に分けてアッセイ可能)
プローブチャネル C1, C2, C3 C1, C2, C3, C4
推奨封入剤 Prolong Gold などの蛍光用封入剤 Prolong Gold などの蛍光用封入剤
Akoya Biosciences社蛍光色素
TSA Plus 蛍光色素 品番 Opal 蛍光色素 品番
TSA Plus fluorescein
NEL741001KT
Opal 520
FP1487001KT
TSA Plus Cyanine 3
NEL744001KT
Opal 570
FP1488001KT
TSA Plus Cyanine 5
NEL745001KT
Opal 650
FP1496001KT
Opal 690
FP1497001KT
*1 キット内にA∼Cの3種類のAmp4試薬が入っています。それぞれチャネルと蛍光色素の組み合わせが異なりますので、下記表を参考に使用するAmp4試薬の種類をご選択ください。
Amp 4 の種類 C1 C2 C3
Amp 4 Alt A-FL Alexa 488 Atto 550 Atto 647
Amp 4 Alt B-FL Atto 550 Alexa 488 Atto 647
Amp 4 Alt C-FL Atto 550 Atto 647 Alexa 488

*2 固定凍結切片を使用する場合には別売りのTarget Retrieval Reagent(品番:322000)が必要です。新鮮凍結切片、接着細胞、PBMCでは必要ありません。

蛍光アッセイ例

蛍光アッセイ バージョン1

RNAscope®マルチプレックス蛍光アッセイによる、マウス小脳におけるSNCAおよびTH63のmRNA発現
マウス小脳におけるSNCAおよびTH63のmRNA発現。
HCV感染細胞における HCV および 18s mRNA 発現
HCV感染細胞における HCV および 18s mRNA 発現。

RNAscope®マルチプレックス蛍光アッセイによる、HeLa細胞における Beta-Actin,HPRT1,RPLP0 および PPIB 発現
HeLa細胞における Beta-Actin,HPRT1,RPLP0 および PPIB 発現。
RNAscope®マルチプレックス蛍光アッセイによる、培養細胞のIL-8およびbeta-ActinのmRNA発現
培養細胞のIL-8およびbeta-ActinのmRNA発現。

蛍光アッセイ バージョン2

マウス脳FFPE組織切片の神経マーカーの検出
マウス脳FFPE組織切片の神経マーカーの検出
Vglut1(赤色)、Vglut2(緑色)、GABAergic neurons Vgat(白色)、DAPI(青色)
ヒト子宮頸がんFFPE組織でのバイオマーカー・免疫チェックポイントマーカーの検出
ヒト子宮頸がんFFPE組織でのバイオマーカー・免疫チェックポイントマーカーの検出
KRT19(緑色)、CD8A(黄色)、CD4(赤色)、CD68(白色)

ヒト肺がんFFPE組織でのバイオマーカー・免疫チェックポイントマーカーの検出
ヒト肺がんFFPE組織でのバイオマーカー・免疫チェックポイントマーカーの検出
KRT19(緑色)、CD8A (黄色)、CD4(赤色)、CD68(白色)

必要な試薬と機器

  1. ターゲットプローブ
  2. 試薬キット
    上記キット比較表を参考に、バージョン1もしくは2をお選びください。
  3. ポジティブコントロールプローブ
    :ターゲットの種由来(human,mouse,rat)ごとにご用意がございます。
  4. ネガティブコントロールプローブ
    :各種共通のものになります。
  5. コントロールスライド
    :ターゲットと同一の種由来 (humanまたはmouse/rat)のものをご選択下さい。
  6. ハイブリダイゼーションシステム
  7. 疎水性撥水ペン
  8. 関連商品
  9. その他関連試薬

1.ターゲットプローブ

* RNAscope® で多重染色を行う場合、異なるチャネル(C1、C2、C3、C4)のプローブが必要となります。

既存プローブ(メーカーデザイン済みの場合)

:既存プローブのリストはこちら→ RNAscope® ProbelistExcel

:Advanced Cell Diagnostics社のプローブ検索ページはこちら

品名メーカー品番包装希望販売価格
ターゲットプローブ(C1) ADC XXXXXX*1 1 vial
(20 slide分)
¥113,000
ターゲットプローブ(C2) ADC XXXXXX-C2*1 1 vial
(20 slide分)
¥113,000
ターゲットプローブ(C3) ADC XXXXXX-C3*1 1 vial
(20 slide分)
¥113,000
ターゲットプローブ(C4) ADC XXXXXX-C4*1 1 vial
(20 slide分)
¥113,000

*1XXXXXX にはターゲットにより異なる任意の数字が入ります。
:既存ブローブが無い場合、プローブのカスタム作製も承ります。カスタム作製時、または既存プローブのチャネル変更時には別途でセットアップ料金がかかります。

品名
メーカー
品番
包装
希望販売価格
Setup fee for RNAscope new target ADC 320269 1 serv. ¥65,000

 

C2、C3プローブは50倍濃縮で提供されており、通常はアッセイ時に C1プローブで希釈いたします。C1プローブを使用せずにアッセイを行う場合(例:C2プローブのみ、 C3プローブのみ 、C2・C3プローブのみのアッセイ)は、希釈液として品番:300041 の C1 Blank Probe Diluent を使用する必要があります。

2.試薬キット

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscope(R) Fluorescent Multiplex Reagent kit詳細データ ADC 320850 1 KIT
[for 20 slides]
¥288,000
RNAscope(R) Multiplex Fluorescent Reagent Kit v2詳細データ ADC 323100 1 KIT
[(for 20 slides)]
¥333,000

<ご注意>

蛍光キット バージョン1(品番320850)について

固定凍結切片を使用する場合には別売りのTarget Retrieval Reagent(品番:322000)が必要です。
未固定凍結切片、接着細胞、PBMCでは必要ありません。
キット内に3種類のAmp4試薬が入っています。それぞれチャネルと蛍光色素の組み合わせが異なりますので、 下記表を参考に使用するAmp4試薬の種類をご選択ください。

チャネル Amp4 Alt A-FL Amp4 Alt B-FL Amp4 Alt C-FL
C1
Alexa 488
Atto 550
Atto 550
C2
Atto 550
Alexa 488
Atto 647
C3
Atto 647
Atto 647
Alexa 488

*Alexa 488:Green、Atto 550:Orange、Atto 647:Far Red

蛍光キット バージョン2(品番323100)について

Plex数に応じて、Akoya Biosciences社の下記の蛍光色素を別途購入いただく必要があります。
また、4-plexの場合は、4-plex用のコントロールプローブと下記「9. その他関連試薬」に記載の4-plex Ancillary Kit(品番323120)もご購入頂く必要があります。

3-plexの場合
TSA Plus
蛍光色素
品番 Opal 蛍光色素 品番
TSA Plus
fluorescein
NEL741001KT
または
NEL741B001KT
Opal 520
FP1487001KT
TSA Plus
Cyanine 3
NEL744001KT
または
NEL744B001KT
Opal 570
FP1488001KT
TSA Plus Cyanine 5
NEL745001KT
または
NEL745B001KT
Opal 650
または
Opal690
FP1496001KT
または
FP1497001KT

 

4-plexの場合(Opalの使用が必須)
Opal
蛍光色素
品番
Opal 520
FP1487001KT
Opal 570
FP1488001KT
Opal 620
FP1495001KT
Opal 690
FP1497001KT

3.ポジティブコントロールプローブ(ヒト用、マウス用)

ターゲットの種由来(human,mouse,rat)ごとにご用意がございます。

注1:コントロールプローブの種類はplex数に応じて異なります。
注2:C2、C3プローブは50倍濃縮で提供されており、通常はアッセイ時にC1プローブで希釈いたします。C1プローブを使用せずにアッセイを行う場合(例:C2プローブのみ、 C3プローブのみ 、C2・C3プローブのみのアッセイ)は、希釈液として品番300041のC1 Blank Probe Diluentを使用する必要があります。
品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscope(R) Positive Control Probe - Hs-PPIB, Human ADC 313901 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R) Positive Control Probe - Mm-Ppib, Mouse ADC 313911 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R)2.5 Duplex Positive Control Probe - Hs ADC 321641 1 VIAL
[(for 20 slides)]
¥19,000
RNAscope(R) Duplex Positive Control Probe - Mm ADC 321651 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R) 3-plex Positive Control Probe - Hs, Human ADC 320861 1 VIAL
[for 20 slides]
¥25,000
RNAscope(R) 3-plex Positive Control Probe - Mm, Mouse ADC 320881 1 VIAL
[for 20 slides]
¥25,000
RNAscope(R) Blank Probe Diluent- C1 ADC 300041 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000

4.ネガティブコントロールプローブ(各種共通)

ネガティブコントロールプローブは各種共通です。

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscope(R) Negative Control Probe-DapB ADC 310043 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R) 2-Plex Negative Control Probe詳細データ ADC 320751 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R) 3-plex Negative Control Probe ADC 320871 1 VIAL
[for 20 slides]
¥25,000

5.コントロールスライド

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscope(R) Control Slides - Human Hela Cell Pellet, Human ADC 310045 1 UNIT
[4 slides]
¥32,000
RNAscope(R) Control Slides - Mouse 3T3 Cell Pellet, Mouse ADC 310023 1 UNIT
[4 slides]
¥32,000

自家蛍光の影響でシグナルの判別が難しくなるため、品番:320850 RNAscope® Fluorescent Multiplex Reagent kit を用いたアッセイでのご利用は推奨しておりません。
品番:313100 RNAscope® Multiplex Fluorescent Reagent Kit v2 でのアッセイでは、コントロールスライドとしてご利用いただくことが可能です。

6.疎水性撥水ペン

Barrier Pen

スライド上に疎水性の境界線を描けるペンです。
プローブやバッファーの流出を防ぎます。

*他社のペンは、40℃のハイブリダイゼーション反応中にバリアが溶ける場合がございますので推奨しません。

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Hydrophobic Barrier Pen ADC 310018 1 PC
¥10,000

7.必要機器(ハイブリダイゼーションシステム)

HybEZ™ ハイブリダイゼーションシステムは、RNAscope® アッセイ用に開発されています。

*ADC社では、HybEZ™ ハイブリダイゼーションシステムを用いた場合のみ、RNAscope® in situ hybridization の性能を保証しております。同システム以外のオーブンでご使用頂いた場合、結果不良の際のサポート対象外となります。
*初回ご検討用のレンタル機をご用意しております。ご予約制となりますので、ご希望の期間等、ご相談ください。
同等の機能をご利用いただくことが可能なため、販売は終了していますが、品番:321461もデモ機として貸し出しております。

名称 HybEZ™ Hybridization System With EZ-Batch Slide System HybEZ™ II Hybridization System With EZ-Batch Slide System NEW
品番 321461(販売は終了しました) 321710
本体写真 HybEZ™ Hybridization System With EZ-Batch Slide System HybEZ™ II Hybridization System With EZ-Batch Slide System
仕様
有効な温度設定範囲※1 外気温+10℃〜75℃まで 外気温+10℃〜75℃まで
安定性 +/- 0.5℃ +/- 0.5℃
正確性 +/- 0.5℃ (40℃の時) +/- 0.5℃ (40℃の時)
温度ディスプレイ解像度 0.1℃ 0.1℃
電圧 115V +/- 10%, 50/60 Hz 115V +/- 10%, 50/60 Hz
電力定格 155W 155W
加熱率 20分以内に常温〜40℃まで加熱可 20分以内に常温〜40℃まで加熱可
寸法(WxDxH) 45(W)×44(D)×15(H)cm 28(W)×40(D)×21(H)cm
重量(kg) 12 9.5
モード Hold-T モードのみ 4種類※2

※1:オーブンに冷却機能がないため、外気温より低い温度に設定した場合、設定温度通りにはなりません。

※2[モード詳細]

  • RNAscopeモード — RNAscope® 、BaseScope™ アッセイ用に、温度を40℃に保つモードです。
  • Bake モード — スライドのBake用のモードです。開始すると温度が上昇し、60℃に達した時点で1時間のタイマーがスタートし、自動的に終了します。
  • Hold-T モード — 10℃〜75℃内の任意の温度に設定するモードです。
  • P-Run モード — お好みのプログラムを10個までプリセット可能です。1つのプログラム中に、3段階の温度・時間を設定できます。
付属品
  321710
オーブン本体
電源コード
ユーザーマニュアル
HybEZ™ Humidity トレイ (品番310012)
EZ-Batch™ スライドホルダー (品番321716)
EZ-Batch™ 洗浄トレイ (品番321717)
浸潤ペーパー2枚(品番310015の一部)
品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
HybEZTM II Hybridization System (110v)With ACD EZ-Batch Slide System詳細データ ADC 321710 1 SYSTEM
¥620,000
HybEZTM 湿潤トレイ (フタ付)
HybEZTM Humidifying Tray (with lid)
ADC 310012 1 UNIT
¥58,000
HybEZTM 湿潤紙
HybEZTM Humidifying Paper詳細データ
ADC 310015 1 SET
[15pack]
¥11,000

8. 関連商品 RNAscope® EZ-Batch™ Slide Processing System

RNAscope® EZ-Batch™ Slide Processing System

RNAscope® EZ-Batch™ Slide Holder 上に最大 20 スライドまでセットでき、EZBatch™ Wash Tray 内で複数スライドを同時に洗浄操作が行えます。また、HybEZ™ オーブンのコントロールトレイにそのまま入れる事ができ、ハイブリダイゼーションステップでのスライドの移動の手間を省き、効率的に実験を進める事ができます。

構成品
  -EZ-Batch™ Slide Holder
  -EZBatch™ Wash Tray

 
品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscope(R) EZ-BatchTM Slide Processing System ADC 310007 1 UNIT
¥58,000
RNAscope(R) EZ-BatchTM Slide Holder ADC 321716 1 UNIT
¥51,000
RNAscope(R) EZ-BatchTM Wash Tray ADC 321717 1 UNIT
¥15,000

9. その他関連試薬

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
RNAscope(R) Fluorescent Multiplex Detection Kit (Kit Components)詳細データ ADC 320851 1 KIT
[for 20 slides]
¥250,000
RNAscope(R) Multiplex Fluorescent Detection Kit V2 (Kit Components) ADC 323110 1 KIT
[(for 20 slides)]
¥300,000
RNAscope(R) 4-Plex Ancillary Kit for Multiplex Fluorescent Kit v2 ADC 323120 1 KIT
[(for 20 slides)]
¥25,000
RNAscope(R) H202 & Protease Plus Reagents詳細データ ADC 322330 1 KIT
[for 20 slides]
¥30,000
RNAscope(R) Target Retreival Reagents詳細データ ADC 322000 4*70 ML
¥19,000
RNAscope(R) Protease III & Protease IV Reagents詳細データ ADC 322340 1 KIT
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R) H202 and Protease Reagents詳細データ ADC 322381 1 KIT
[for 20 slides]
¥30,000
RNAscope(R) PBMC Sample Prep Reagents詳細データ ADC 320970 1 KIT
販売終了
RNAscope(R) Positive Control Probe - Hs-Ubc-C3, Human ADC 310041-C3 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000
RNAscope(R) Positive Control Probe - Mm-Ubc-C3, Mouse ADC 310771-C3 1 VIAL
[for 20 slides]
¥19,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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