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Nordmark 社では、幹細胞にも使用できる高品質コラゲナーゼを販売しています。細胞の単離など目的別に選択いただけます。（→ 細胞単離プロトコル例）
※SERVA 社コラゲナーゼ商品は Nordmark 社が販売する事になりました。
背景
Clostridium histolyticum由来のコラゲナーゼはin situでヒトまたは動物の三重らせんコラーゲン分子のペプチド結合を切断するタンパク質加水分解酵素です。Nordmark社の Collagenase NB品質の製品は、特に種々の組織からの細胞単離や幹細胞の継代に適しています。医薬品製造基準を適応することで、厳格な品質管理、ロット間で一貫した信頼性、製品の優れた性能が保証されます。発酵製品の伝達性海綿状脳症（TSE）に関する安全性については欧州政府のEDQMと原料供給者の証明書により確認をしています。
使用目的
膵島の単離
二次的なタンパク質分解活性とエンドトキシンを非常にわずかしか含まない、クロマトグラフィーで高度に精製されたCollagenase NB 1 Premium Gradeは、高収量と優れた細胞生存率を保証します。Neutral Protease NBは必須の添加材で、1回分に分離包装されているため酵素の安定性が高いです。
図1 逆相HPLCによるCollagenase NB1の分析
繊細な細胞の単離
コラゲナーゼ活性を上昇させ、その他プロテアーゼと細菌性エンドトキシン量を減少させた、精製Collagenase NB 8 Broad Range
種々の細胞型の単離
他のタンパク質分解活性と適切な割合でコラゲナーゼを用いることで、最適な組織解離を行えます。
- Collagenase NB 4 Standard Grade
- Collagenase NB 4G Proved Grade
- Collagenase NB 5 Sterile Grade
緩和で効果的‐Collagenase NB 4 Standard Gradeは多種多様な細胞の単離に適しています。
機能評価済み‐Collagenase NB 4G Proved Gradeは特に脂肪細胞、線維芽細胞、肝細胞、カエル卵母細胞、軟骨細胞、幹細胞の単離に向いています。
即使用可‐Collagenase NB 5 Sterile Gradeは欧州薬局方に準拠した無菌条件で製造しています。
特長
保存と再構成
Collagenase NB製品は全て凍結乾燥粉末で供給し、+2〜8℃で保存できます。湿気を避けて保存すれば、最低でも1年間活性を損なうことなく安定性を保てます。Collagenase NB品質の製品は一般的なバッファー、例えばHBSSに可溶性です。再構成した酵素は濾過滅菌可能で、分注して-20℃で1年間保存可能です。凍結再融解の繰り返しはお避け下さい。
組織消化の最適化
一般的に、単離手順と同様に必要なコラゲナーゼ濃度は組織の種類と由来に依存します。よって、下表に示したCollagenase NB濃度は初期条件であり、至適条件を決定するため目視で消化工程を確認し、最適化します。コラゲナーゼ活性はWünschに従いPZ unitで表記し、37℃においてpH ~7.4で最適化して示します。コラゲナーゼは最大の触媒活性を示すのにカルシウムを要求するため、2 mMのCa2+を推奨します。
不活性化と阻害剤
消化の進行は冷却か消化溶液を希釈することで行えます。コラゲナーゼは高pH値で可逆的に不活性化され、低pH値では不可逆的に不活性化されます。コラゲナーゼの阻害剤は例えばシステインやEDTA等のキレート剤です。
- 高い細胞収率と生存率
- 確かなロット間一貫性
- TSE安全性の高い製造
- 低エンドトキシン
- GMPグレードをご用意
研究用 Nordmark 社製酵素
Collagenase NB1 Premium Gradeは副次的なタンパク質分解活性が極めて低い、高度に精製されたコラゲナーゼです。精製したNeutral Protease NBの添加が要求されることもございます。Collagenase NB4 Standard GradeとCollagenase NB4G Proved Gradeはタンパク質分解活性をバランスよく配合した未精製のコラゲナーゼです。Collagenase NB5 Sterile GradeはCollagenase NB4 Standard Gradeに匹敵する酵素性能を有しますが、無菌条件下で製造されています（欧州薬局方準拠）。Collagenase NB8 Broad Rangeはコラゲナーゼを高度に精製、含有し、副次的なタンパク質分解活性を低く抑えています。
高品質のGMP適合酵素
高度に精製したCollagenase NB1 GMP GradeとNeutral Protease NB GMP Gradeは各々Collagenase NB1 Premium GradeとNeutral Protease NBに匹敵した酵素性能を示します。
Collagenase NB6 GMP GradeはCollagenase NB4 Standard Gradeに匹敵した酵素性能を示しますが、特に組織工学や幹細胞の単離継代のようにEU-cGMPに適合する必要がある場合を想定して製造されています。よって、Collagenase NB4 Standard Gradeを用いた単離手順を容易にCollagenase NB6 GMP Gradeで置換することが可能です。
各種から特定の細胞を単離するには、個別のプロトコルが要求されます。
下表にはCollagenase NB品質の商品を利用した場合の消化条件をお示しします。
| 細胞種 | 組織 | 種 | コラゲナーゼ | 濃度 | 実験条件 | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 腺房細胞 | 膵臓 | ヒト | NB 8 | 0.05〜0.1 PZ U/ml | 1時間, 37℃ | |
| 脂肪細胞 | 脂肪 | ヒト, マウス | NB 4 (NB 5 or NB 6), NB 4G |
0.2〜0.3 PZ U/ml * | 30〜45分, 37℃ | |
| 羊膜細胞 | 羊膜 | ヒト | NB 8 | 3.5〜5.5 PZ U/ml | 3〜5時間, 37℃ | |
| 心筋細胞 | 心臓 | ラット （成獣） |
NB 8 | 0.5 PZ U/ml | 45〜60分 (再循環と消化) |
必要ならhyaluronidase, pancreatin, DNase I |
| ヒト | NB 8 | 0.8〜1.0 PZ U/ml | 2〜3.5時間, 37℃ | |||
| 軟骨細胞 | 軟骨 | マウス （新生仔） |
NP** and NB 4 (NB 5 or NB 6) |
1) NP: 0.5〜1 DMC U/ml 2) NB 4: 0.3 PZ U/ml |
1) NP: 15〜20分, 37℃ 2) NB: 30〜45分, 37℃ |
連続消化工程 |
| ヒト | NB 4 (NB 5 or NB 6) | 0.3〜0.4 PZ U/ml | 4〜16時間, 37℃ | 必要なら Neutral Protease NB |
||
| 軟骨細胞（関節） | 軟骨 | ウシ | NB 4 (NB 5 or NB 6) | 0.2〜0.3 PZ U/ml | 14〜16時間, 37℃ | |
| 軟骨細胞（半月板） | 繊維軟骨 | ウシ | NB 4 (NB 5 or NB 6) | 0.2〜0.3 PZ U/ml | 14〜16時間, 37℃ | |
| 絨毛膜細胞 | 絨毛膜 | ヒト | NB 8 | 3.5〜5.5 PZ U/ml | 3〜5時間, 37℃ | |
| クロム親和性細胞 | 副腎 | ウシ, ラット | NB 4 (NB 5 or NB 6) | 0.3〜0.5 PZ U/ml | 20〜30分, 37℃ | |
| 子宮内膜細胞 | 子宮内膜 | ヒト | NB 4 (NB 5 or NB 6) | 0.2〜0.3 PZ U/ml | 30分, 37℃ | |
| 内皮細胞 (HDMEC) |
包皮 | ヒト | NB 4 (NB 5 or NB 6), NB 4G |
0.5〜0.7 PZ U/ml | 0.5〜2時間, 37℃ | |
| 内皮細胞 (HUVEC) |
臍帯 | ヒト | NB 4 (NB 5 or NB 6) | 0.15〜0.25 PZ U/ml | 0.5〜2時間, 37℃ | 必要ならhyaluronidase |
| 上皮細胞 | 乳腺 | マウス | NB 4 (NB 5 or NB 6) | 0.34 PZ U/ml | 15〜25分, RT | |
| 甲状腺 | ヒト | NB 4G | 0.25〜0.3 PZ U/ml | RT | 必要ならdispase | |
| 線維芽細胞 | 皮膚 | ヒト | NB 4G | 0.26 PZ U/ml | 2時間, 37℃ | |
| 皮膚、 結合組織 |
齧歯類 | NB 4G | 0.2〜0.5 PZ U/ml | 12〜20時間, 37℃ | ||
| 肝細胞 | 肝臓 | ブタ | NB 8 | 0.2〜0.3 PZ U/ml | 灌流と連続消化 | |
| マウス | NB 4G | 0.08〜0.11 PZ U/ml | 5〜15分, 37℃ (灌流 5〜8 ml/min) |
総collagenase 灌流量 90〜110 ml |
||
| ラット | NB 4G | 0.12〜0.15 PZ U/ml | 10〜25分, 37℃ (灌流 5〜8 ml/min) |
総collagenase 灌流量 100〜125 ml |
||
| 肝細胞/肝星細胞 | 肝臓 | ヒト | NB 4G | 0.25〜0.35 PZ U/ml | 10〜20分, 37℃ | |
| ランゲルハンス島 | 膵臓 | ヒト | NB 1 and NP** | グラム組織あたり： 20 PZ U (NB 1) 0.8〜1.5 DMC U (NP) |
15〜30分, 37℃ | |
| 齧歯類 | NB 8 | 1.5〜1.7 PZ U/ml | 14〜17分, 37℃ (灌流と連続消化) |
|||
| ブタ （成獣） |
NB 1 and NP** | グラム組織あたり： 15〜18 PZ U (NB 1) 0.8〜1.3 DMC U (NP) |
15〜30分, 37℃ | |||
| NB 8 and NP** | グラム組織あたり： 4.4 PZ U (NB 8) 0.5〜0.7 DMC U (NP) |
37℃ | ||||
| ブタ （新生仔） |
NB 4 (NB 5 or NB 6) | 0.17〜0.2 PZ U/ml | 10〜20分, 37℃ | |||
| 肺細胞 | 肺 | マウス | NB 4 (NB 5 or NB 6) | 0.2 PZ U/ml | 1時間, 37℃ | |
| 肥満細胞 | 腸管粘膜 | ヒト | NB 4G | 0.5 PZ U/ml | 1時間, 37℃ | |
| メラノーマ細胞 | 皮膚 | マウス | NB 8 | 0.12 PZ U/ml | 30分, 37℃ | |
| 筋細胞 | 骨格筋 | ヒト | NB 8 | 0.4〜0.6 PZ U/ml | ||
| 神経 | 後根神経節 | ヒト、 齧歯類 |
NB 4 (NB 5 or NB 6) | 0.15〜0.25 PZ U/ml | 30〜60分, 37℃ | |
| 卵母細胞 | 卵巣 | アフリカ ツメガエル |
NB 4G | 0.3〜0.5 PZ U/ml | 1.5〜2時間, RT | |
| 骨芽細胞 | 骨 | マウス | NB 4 (NB 5 or NB 6) | 0.15〜0.25 PZ U/ml | 5〜10分, 37℃ (4〜5回反復) 0.2% dispase |
連続消化工程 |
| ヒト | NB 8 | 1.5〜2 PZ U/ml (NB 8) 0.25 DMC U/ml (NP) |
2〜4時間, 37℃ | |||
| シュワン細胞 | 坐骨 /末梢神経 |
齧歯類 | NB 4 (NB 5 or NB 6) | 0.2〜0.3 PZ U/ml | 1〜3時間, 37℃ | 必要ならtrypsin, hyaluronidase |
| 幹細胞 | ウォートン軟肉 | ヒト | NB 4 (NB 5 or NB 6) | 0.13〜0.15 PZ U/ml | 1〜6時間, 37℃ | 必要なら hyaluronidase 1 mg/ml |
| 幹細胞 (ADSC) /前脂肪細胞 |
吸引脂肪組織 | ヒト、 マウス |
NB 4 (NB 5 or NB 6), NB 4G |
0.2〜0.3 PZ U/ ml * | 30〜60分, 37℃ | |
| 腫瘍細胞 | 乳房、子宮、 甲状腺、肺 |
ヒト | NB 8 | 3.5〜5.5 PZ U/ml | 3〜5時間, 37℃ | |
| 結腸 | NB 4G | 0.5〜1 PZ U/ml | RT | |||
| 幹細胞（継代） | ヒト | NB 4 (NB 5 or NB 6) | 0.15 PZ U/ml | 37°C, 6〜8分 | ||
| *脂肪組織添加後の最終コラゲナーゼ濃度0.1 – 0.15 PZ U/ml ** Neutral Protease NB | ||||||
コラゲナーゼ
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
|---|---|---|---|---|
Collagenase NB 4 Standard Grade from Clostridium histolyticum, Clostridium histolyticum  |
NRD | S1745401 | 1 G |
￥64,000 |
| Collagenase NB 4 Standard Grade |
NRD | S1745403 | 5 G |
￥281,000 |
| Collagenase NB 4 Standard Grade from Clostridium histolyticum, Clostridium histolyticum |
NRD | S1745402 | 500 MG |
￥38,000 |
| Collagenase NB 1 Premium Grade from Clostridium histolyticum, Clostridium histolyticum |
NRD | S1745503 | 2000 UNIT |
￥333,000 |
| Collagenase NB 1 GMP Grade from Clostridium histolyticum, Clostridium histolyticum |
NRD | N0002937 | 2000 UNIT |
お問い合わせ |
| Collagenase NB 8 Broad Range from Clostridium histolyticum, Clostridium histolyticum |
NRD | S1745602 | 1 G |
￥157,000 |
| Collagenase NB 8 Broad Range from Clostridium histolyticum, Clostridium histolyticum |
NRD | S1745601 | 250 MG |
￥55,000 |
| Collagenase AF-1 GMP Grade |
NRD | N0003554 | 2000 UNIT |
お問い合わせ |
| Collagenase NB 6 GMP Grade from Clostridium histolyticum, Clostridium histolyticum |
NRD | N0002779 | 1 G |
￥258,000 |
| Collagenase NB 6 GMP Grade from Clostridium histolyticum, Clostridium histolyticum |
NRD | N0002880 | 100 MG |
￥75,000 |
| Collagenase NB 5 Sterile Grade from Clostridium histolyticum, Clostridium histolyticum |
NRD | N0002778 | 1 G |
￥106,000 |
| Collagenase N Reference Content from Clostridium histolyticum, Clostridium histolyticum | NRD | S1746301 | 50 MG |
販売終了 |
| Collagenase N Reference Identity from Clostridium histolyticum, Clostridium histolyticum | NRD | S1746401 | 50 MG |
販売終了 |
| Collagenase NB 4G Proved Grade from Clostridium histolyticum, Clostridium histolyticum |
NRD | S1746502 | 1 G |
￥74,000 |
| Collagenase NB 4G Proved Grade, Clostridium histolyticum |
NRD | S1746503 | 5 G |
￥318,000 |
| Collagenase NB 4G Proved Grade from Clostridium histolyticum, Clostridium histolyticum |
NRD | S1746501 | 500 MG |
￥43,000 |
中性プロテアーゼ
| 品名 | メーカー | 品番 | 包装 | 希望販売価格 |
|---|---|---|---|---|
| Neutral Protease NB from Clostridium histolyticum |
NRD | S3030111 | 50 UNIT |
￥45,000 |
| Neutral Protease NB from Clostridium histolyticum, Clostridium histolyticum |
NRD | S3030112 | 100 UNIT |
￥65,000 |
| Neutral Protease NB High Active Grade from Clostridium histolyticum, Clostridium histolyticum |
NRD | S3030202 | 80 UNIT |
￥69,000 |
| Neutral Protease NB GMP Grade from Clostridium histolyticum, Clostridium histolyticum |
NRD | N0002936 | 100 UNIT |
￥269,000 |
| Neutral Protease AF GMP Grade |
NRD | N0003553 | 100 UNIT |
￥219,000 |
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SER | 37289 | 25 G |
販売終了 |
| Trypsin 1:250, Bovine |
SER | 37289 | 100 G |
販売終了 |
商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。
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