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5'capカバレッジが違う！転写開始点の解析に TeloPrime Full-Length cDNA Amplification Kit V2

メーカー名：Lexogen GmbH

5'capカバレッジが違う！転写開始点の解析に　TeloPrime Full-Length cDNA Amplifi cation Kit

本キットは、Lexogen 社独自のcap 依存的リンカーライゲーション (Cap-Dependent Linker Ligation；CDLL) と長鎖逆転写技術を基にしており、cap 構造とpoly(A) を持つ全長RNA を選択可能です。完全なmRNA情報により、mRNA トランスクリプトームを正確に解析可能です。完全な mRNA 情報により、mRNA トランスクリプトームを正確に解析可能です。

※YouTubeサイトにリンクされています。外部リンク

FAQあります！

特長

高収量のFull-length cDNAを調製可能
5'-cap とpoly(A) に対する高い特異性
ロングリード解析（PacBio™ 、Oxford Nanopore™など）におすすめ
フレキシブルな RNAインプット量（1 ng～2 µg total RNA / prep)
逆転写反応用プライマー、PCR プライマー（FWD、REV）はカスタムプライマー（例遺伝子特異的プライマー）に置き換えることが可能
調製した cDNA は様々なアプリケーションに使用可能（NGS ライブラリ作製、マイクロアレイプローブ作製、RACE クローニング等）

構成内容

Reverse Transcription Primer
Reverse Transcription Mix
Enzyme Mix 1
Ligation Mix
Enzyme Mix 2
Second Strand Synthesis Mix
Enzyme Mix 3
TeloPrime PCR Mix
PCR Forward Primer

PCR Reverse Primer
RNA Buffer
DNA Buffer
Column Binding Buffer 1
Column Binding Buffer 2
Column Wash Buffer

ワークフロー

Total RNA からoligo(dT) を用いた逆転写反応により全長 cDNA の合成を行います。次に、5' C オーバーハングを有する二本鎖アダプターを、RNA/cDNA ハイブリッド（二本鎖）のcap 構造のG と結合させます。二本鎖特異的なリガーゼを用いることで、cap 構造を持ち（インタクトなRNA）、第一鎖合成がmRNA の5' 側に到達した場合のみライゲーションが起こります。その後、5' タグ（二本鎖アダプター）を有する産物のみ第二鎖が合成され、5' タグ、3' タグ特異的な PCR プライマーを用いてPCR を行うことで、全長の二本鎖 cDNA が調製されます。

図1. TeloPrime Full-Length cDNA Amplification Kit V2 のワークフロー

製品データ

パフォーマンス

TeloPrime Full-Length cDNA Amplifi cation Kit はテンプレートスイッチ法やオリゴキャッピング法などの他の全長 cDNA 合成法と比較し5' cap カバレッジに優れており、正確に転写開始点をマッピングすることが可能です（図2）。

図2. Lexogen 社のTeloPrime Full-Length cDNA Amplification Kit は転写開始点（TTS）の正確なマッピングを可能にする
テンプレートスイッチ法、オリゴキャッピング法、TeloPrime Full-Length cDNA Amplification Kit を用いて、mRNA の5' 末端をタグ付けした。マウスゲノムに対して転写開始点をマッピングした。転写開始点のリードカバレッジを標準化した転写産物長に対してプロットし、上位 500 種の発現遺伝子の転写開始点をマッピングした。

TeloPrime Full-Length cDNA Amplification Kit

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
TeloPrime Full-Length cDNA Amplification Kit V2	LEX	013.08	8 PREP.	￥223,000
TeloPrime Full-Length cDNA Amplification Kit V2	LEX	013.24	24 PREP.	お問い合わせ