技術情報
クロマチン免疫沈降法プロトコール2（先付け方式）
| ■ 1 x PBS(-) / 0.5% BSA |
（最終濃度） |
| 1 x PBS(-) |
497.5 mL |
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| bovine serum albumin |
2.5 g |
(0.5%) |
| 10% NaN3 |
2.5 mＬ |
(0.05%) |
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| total |
500 mL |
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| BSAが完全に溶解するまでスターラーで撹拌後、4℃にて保存。 |
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| ■ 11 X fixation solution |
（最終濃度） |
| 37% formaldehyde |
3 mＬ |
(11.1%) |
| 細胞培養用メディウム |
7 mL |
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| total |
10 mL |
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| 用時調製のこと。 |
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| ■ 1.5 M glycine |
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| ■FACS solution |
（最終濃度） |
| 1 x PBS(-) |
487.5 mＬ |
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| bovine serum |
10 mＬ |
(2%) |
| 10% NaN3 |
2.5 mＬ |
(0.05%) |
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| total |
500 mL |
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| 4℃にて保存。 |
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| ■ SDS lysis buffer |
（最終濃度） |
| 1 M Tris-HCl (pH 8.0) |
2.5 mＬ |
(50 mM) |
| 0.5 M EDTA (pH 8.0) |
1 mＬ |
(10 mM) |
| 10% SDS |
5 mＬ |
(1%) |
| H2O |
41.5 mＬ |
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| total |
50 mL |
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室温で保存。
使用時に Protease Inhibitor Cocktail を加えましょう。 |
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| ■ ChIP dilution buffer |
（最終濃度） |
| 1 M Tris-HCl (pH 8.0) |
2.5 mＬ |
(50 mM) |
| 5 M NaCl |
1.67 mＬ |
(167 mM) |
| 10% Triton X-100 |
5.5 mＬ |
(1.1%) |
| 10% sodium deoxycholate |
0.55 mL |
(0.11%) |
| H2O |
39.78 mＬ |
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| total |
50 mL |
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室温で保存。
使用時にProtease Inhibitor Cocktailを加えましょう。 |
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| ■ 50% Protein G Sepharose®/0.5% BSA slurry |
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Protein G Sepharose 4 Fast Flow (GEヘルスケア社 Catalog# 17-0618) を 1X RIPA buffer/ 150 mM NaCl で２回洗浄します。その後、1X RIPA buffer/0.5% BSA/0.05% NaN3に懸濁し、 ローテーターを用いて 4℃ にて一晩攪拌。50% slurry となるように分注し、 4℃にて保存。
SEPHAROSE®はGE Healthcare社の登録商標です。
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| ■ 2 X RIPA buffer |
（最終濃度） |
| 1 M Tris-HCl (pH 8.0) |
5 mＬ |
(100 mM) |
| 5 M NaCl |
3 mＬ |
(300 mM) |
| 0.5 M EDTA (pH 8.0) |
0.2 mL |
(2 mM) |
| 10% Triton X-100 |
10 mＬ |
(2%) |
| 10% SDS |
1 mL |
(0.2%) |
| 10% sodium deoxycholate |
1 mL |
(0.2%) |
| H2O |
29.8 mＬ |
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| total |
50 mL |
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| 室温で保存。 |
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| ■ 1 X RIPA buffer/ 150 mM NaCl |
（最終濃度） |
| 2 X RIPA buffer |
25 mＬ |
(1 X ) |
| H2O |
25 mＬ |
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| total |
50 mL |
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| NaCl濃度は最終的に150 mM。 |
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| ■ 1 X RIPA buffer/ 500 mM NaCl |
（最終濃度） |
| 2 X RIPA buffer |
25 mＬ |
(1 X ) |
| 5 M NaCl |
3.5 mＬ |
(350 mM) |
| H2O |
21.5 mＬ |
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| total |
50 mL |
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| NaCl濃度は最終的に500 mM。 |
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| ■ LiCl wash solution |
（最終濃度） |
| 1 M Tris-HCl (pH 8.0) |
0.5 mＬ |
(10 mM) |
| 5 M LiCl |
2.5 mＬ |
(0.25 M) |
| 0.5 M EDTA (pH 8.0) |
0.1 mL |
(1 mM) |
| 10% NP40 |
2.5 mL |
(0.5%) |
| 10% sodium deoxycholate |
2.5 mL |
(0.5%) |
| H2O |
41.9 mＬ |
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| total |
50 mL |
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| 室温で保存。 |
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| ■ ChIP direct elution buffer |
（最終濃度） |
| 1 M Tris-HCl (pH 8.0) |
0.5 mＬ |
(10 mM) |
| 5 M NaCl |
3 mＬ |
(300 mM) |
| 0.5 M EDTA (pH 8.0) |
0.5 mL |
(5 mM) |
| 10% SDS |
2.5 mL |
(0.5%) |
| H2O |
43.5 mＬ |
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| total |
50 mL |
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| 室温で保存。 |
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■ 1 x TE
■ 4 mg/mL DNase-free RNase A
■ 10 mg/mL proteinase K
■ 20 mg/mL glycogen
■ シリコナイズチューブ
■ 1.5ml TPX tube（ハイテック社 M50001）
■ 1.5ml Eppendolf DNA LoBind tube
■ フェノール／CIAA
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この技術情報は、滋賀医科大学 生化学・分子生物学講座 縣 保年 先生にご提供いただきました。
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商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては
使用しないように、十分ご注意ください。
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