記事ID ： 38548

高感度なバインディング・アッセイプロトコールを提供新型コロナウイルス（SARS-CoV-2）受容体結合試験用試薬

メーカー名：株式会社ハカレル

新型コロナウイルスが細胞に感染する際、ウイルス表面のスパイク蛋白が細胞表面のACE2に結合します。その結合を阻害する薬剤はウイルス感染を防ぐ薬剤となります。そのスクリーニングを行う試薬として、

ACE2細胞外ドメイン
SARS-CoV-2スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ
ビオチン化SARS-CoV-2スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ
中和抗体

の販売を開始しました。

また、スパイクタンパク質S1ドメインの受容体結合ドメインに特異的かつ親和性の高いモノクローナル抗体（抗SARS-CoV-2スパイクタンパク質モノクローナル抗体(マウス)）の販売を開始いたしました。受容体結合ドメインとACE2の結合を阻害する中和抗体です。

変異株もご提供しています。こちらをご参照ください。

SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ

ビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ

背景

アンジオテンシン変換酵素2（ Angiotensin-converting enzyme 2、ACE2）はACE ホモログとも呼ばれ、ACE とかなり相同性のある内在性膜タンパク質です。ACE2 は血圧調節に関与するレニン・アンジオテンシン系で働く因子の一つとして知られていましたが、最近になり、COVID-19 の原因である新型コロナウイルスがヒトの細胞に感染する際、細胞膜に存在するACE2 に結合してから細胞内に取り込まれることが明らかとなり、ACE2 は新型コロナウイルスの受容体でもあると考えられています。⁽¹⁾
ヒトACE2 蛋白・His タグ (品番：HAK-ACE2_UL-1) を96穴プレートに固相し、ウイルス蛋白の受容体結合ドメインをウサギFc と結合させた融合蛋白である SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ(品番：HAK-SPD_UL-1) またはビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ(品番：HAK-SPD_bio-1) を加え、HRP 標識した2次抗体やストレプトアビジンで検出させることで、高感度なバインディング・アッセイを提供します。

SARS-CoV-2 スパイク蛋白とACE2 との結合実験プロトコール

詳細なバインディング・アッセイおよび競合法による結合阻害物質スクリーニングのプロトコールを提供しております。
こちらから、PDFをダウンロードしてご覧いただけます。

ACE2細胞外ドメイン

製品情報

図１ SDS-PAGE

タンパク質構造
ヒトACE2 蛋白・His タグ (HAK-ACE2_UL-1) は、ヒト・アンジオテンシン変換酵素2 の細胞外領域に相当するSer19-Pro738 のC 末端にポリヒスチジンタグを付けてHEK293 細胞で発現させ、Ni カラムを用いて精製したものが含まれています。
純度
＞95％（SDS-PAGE）
組成
ヒトACE2 蛋白・His タグ 1mg/mL、0.1MPBS(pH7.2~7.4)
保存
凍結融解の繰り返しは避けてください。製品は受領時に-70°C 以下で保管して下さい。使用時に小分け分注を推奨します。
SDS-PAGE
本製品430ng を4~20%グラジエント・ゲルで電気泳動し、CBB 染色した。（図1）

使用例

バインディング・アッセイ

固相化した0.156-10µg/mL のヒトACE2蛋白・His タグ(100µL/ウェル)に0.8µg/mLのビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグを結合させ、HRP 標識ストレプトアビジンで検出した。
この際の検量線において、線形範囲（リニアレンジ）は0.156-1.25µg/mL であった。（図２）

競合法による結合阻害物質スクリーニング

固相化した1µg/mL のヒトACE2 蛋白・His タグ(100µL/ウェル)と600ng/mL のビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグの結合反応に10-5000ng/mLの結合阻害物質（SARS-CoV-スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ)を添加し、HRP 標識ストレプトアビジンで検出した。この際の50％阻害濃度(IC50)は140ng/mL(2.7nM)であった。（図３）

図2 バインディング・アッセイ

図3 競合法によるインヒビション・アッセイ

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
ヒトACE2蛋白・Hisタグ / Angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) protein, Human	HAK	HAK-ACE2_UL-1	100 UG	￥80,000

SARS-CoV-2スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ

製品情報

図4 SDS-PAGE

タンパク質構造
SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ(HAK-SPD_UL-1) は、SARS-CoV-2Spike glycoprotein Receptor-bindingdomain のArg319-Phe541 のC 末端にウサギIgG1 Fc タグを付けてHEK293 細胞で発現させ、プロテインA カラムを用いて精製したものが含まれています。
純度
＞95％（SDS-PAGE）
組成
SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ 1mg/mL, 0.1M-PBS(pH7.2~7.4)
保存
凍結融解の繰り返しは避けてください。製品は受領時に-70°C 以下で保管して下さい。使用時に小分け分注を推奨します。
SDS-PAGE
本製品500ng を4~20%グラジエント・ゲルで電気泳動し、CBB 染色した。（図4）

使用例

バインディング・アッセイ

固相化した1μg/mL のヒトACE2 蛋白・His タグ(100µL/ ウェル) に0.293-1200 ng/mL のSARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグを結合させ、HRP 標識ウサギIgG 抗体で検出した。この際の検量線において、線形範囲（リニアレンジ）は0.293-18.8ng/mL であった。(図５）

図5 バインディング・アッセイ

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
SARS-CoV-2スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ / SARS-CoV-2 Spike glycoprotein Receptor-binding domain, Virus	HAK	HAK-SPD_UL-1	100 UG	￥80,000

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ビオチン化SARS-CoV-2スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ

製品情報

図6 SDS-PAGE

タンパク質構造
ビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ(HAK-SPD_bio-1)は、 SARS-CoV-2 Spike glycoproteinReceptor-binding domain のArg319-Phe541 の C 末端にウサギIgG1 Fc タグを付けてHEK293 細胞で発現させ、プロテインA カラムを用いて精製し、ビオチン化したものが含まれています。
純度
＞95％（SDS-PAGE）
組成
SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ 1mg/mL, 0.1M-PBS(pH7.2~7.4)
保存
凍結融解の繰り返しは避けてください。製品は受領時に-70°C 以下で保管して下さい。使用時に小分け分注を推奨します。
SDS-PAGE
ビオチン化前の本製品500ng を4~20%グラジエント・ゲルで電気泳動し、 CBB 染色した。（図6)

使用例

バインディング・アッセイ

固相化した1µg/mL のヒトACE2 蛋白(100µL/ウェル)に29-21000ng/mL のビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグを結合させ、HRP 標識ストレプトアビジンで検出した。この際の検量線において、線形範囲（リニアレンジ）は 29-798ng/mL であった。(図７）

図7 バインディング・アッセイ

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
ビオチン化SARS-CoV-2スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ / SARS-CoV-2 Spike glycoprotein Receptor-binding domain, Virus, Biotin	HAK	HAK-SPD_BIO-1	20 UG	￥20,000

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中和抗体

SARS-CoV-2の全長スパイクタンパク質を発現させたエクソソームを用いた独自の抗体スクリーニング法により、スパイクタンパク質とACE2の結合を阻害するモノクローナル抗体を取得しました。さらに、その可変領域の構造を決定し、ヒト定常領域（IgG1）とのキメラ抗体を動物細胞で発現・精製しました。ともにバインディング・アッセイ試薬により強い結合阻害活性が確認されました。

抗SARS-CoV-2スパイクタンパク質モノクローナル抗体（マウス）
抗SARS-CoV-2スパイクタンパク質組換えキメラ抗体（ヒト／マウス）

抗SARS-CoV-2スパイクタンパク質モノクローナル抗体(マウス)

製品情報

抗体情報
クローン名：A2-5A12 抗体の詳細：抗SARS-CoV-2スパイクタンパク質モノクローナル抗体クラス：IgG1/κ 免疫源：組換えSARS-CoV-2スパイクタンパク質（Val327~Thr531）由来種：マウスアプリケーション：ELISA, スパイクタンパク質/ACE2結合阻害実験
濃度
約 1mg/mL
組成
0.1M-PBS(pH7.2~7.4) , 0.2µmフィルターろ過
保存
凍結融解の繰り返しは避けてください。製品は受領時に-70°C 以下で保管して下さい。使用時に小分け分注を推奨します。

使用例

スパイクタンパク質とACE2の結合阻害

ACE2タンパク質を固相した96穴マイクロプレートに、500ng/mLに希釈調製したビオチン標識受容体結合ドメインタンパク質と結合阻害物質である抗SARS-CoV-2ウイルス・スパイクタンパク質抗体（本製品）(3.1、9.1、27.4、82.3、247、741、2222、6667、20000ng/mL)を各50µL/ウェル添加し、室温で2時間静置反応しました。比較対象の抗体として、他社から市販されている抗SARS-CoV-2ウイルス・スパイクタンパク質モノクローナル抗体を用いました。
それぞれの抗体で反応後、洗浄し、HRP標識ストレプトアビジンと発色基質を添加し反応させました。停止液を添加後、各ウェルの吸光度を測定しました。その結果、いずれの抗体もスパイクタンパク質受容体結合ドメインとACE2との結合を阻害しましたが、本製品と他社抗体のIC50値はそれぞれ23.6ng/mLおよび1270ng/mLであり、本製品の阻害活性は他社抗体の53.8倍強いことが明らかとなりました（図８）。

図8 スパイクタンパク質とACE2の結合阻害

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
抗SARS-CoV-2スパイクタンパク質モノクローナル抗体(マウス) / Anti-SARS-CoV-2 Spike glycoprotein, (Mouse) , A2-5A12	HAK	HAK-ANTI-SPD-MAB-1	100 UG	￥55,000

抗SARS-CoV-2スパイクタンパク質組換えキメラ抗体（ヒト／マウス）

製品情報

抗体情報
クローン名：A2-5A12H 抗体の詳細：抗SARS-CoV-2スパイクタンパク質組換えキメラ抗体（ヒト／マウス）クラス：IgG1/κ 免疫源：組換えSARS-CoV-2スパイクタンパク質（Val327~Thr531）由来種：ヒト／マウスアプリケーション：ELISA, スパイクタンパク質/ACE2結合阻害実験
濃度
約 1mg/mL
組成
0.1M-PBS(pH7.2~7.4) , 0.2µmフィルターろ過
保存
凍結融解の繰り返しは避けてください。製品は受領時に-70°C 以下で保管して下さい。使用時に小分け分注を推奨します。

使用例

スパイクタンパク質とACE2の結合阻害

ACE2タンパク質を固相した96穴マイクロプレートに、500ng/mLに希釈調製したビオチン標識RBDタンパク質と結合阻害物質である本製品抗SARS-CoV-2スパイクタンパク質組換えキメラ抗体（ヒト／マウス）(0.8～1000ng/mL)を各50µL/ウェル添加し、室温で2時間静置反応しました。比較対象の抗体として、別売品でありオリジナル・クローンであるマウス抗SARS-CoV-2スパイクタンパク質抗体(品番：HAK-ANTI-SPD-MAB-1）を用いました。
それぞれの抗体で反応後、洗浄し、HRP標識ストレプトアビジンと発色基質を添加し反応させました。停止液を添加後、各ウェルの吸光度を測定しました。
その結果、いずれの抗体もRBDタンパク質とACE2との結合を強力に阻害し、本製品の組換えキメラ抗体と別売品であるマウス抗SARS-CoV-2スパイクタンパク質抗体(品番：HAK-ANTI-SPD-MAB-1）のIC50値はそれぞれ10.3ng/mLおよび14.4ng/mLでありました。反応模式図と結合阻害活性は、以下のとおりです。

図9 反応模式図

図10 結合阻害活性

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
抗SARS-CoV-2スパイクタンパク質組換えキメラ抗体(ヒト／マウス) / Anti-SARS-CoV-2 Spike glycoprotein Recombinant Chimeric Antibody, Human	HAK	HAK-ANTI-SPD-CAB-1	100 UG	￥55,000

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参考文献

Alexandra C. Walls, Young-JunPark, et al., Cell 180, 1-12 (2020)

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

※ 表示価格について

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