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研究用

高感度なバインディング・アッセイプロトコールを提供新型コロナウイルス(SARS-CoV-2)受容体結合試験用試薬

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新型コロナウイルスが細胞に感染する際、ウイルス表面のスパイク蛋白が細胞表面のACE2に結合します。その結合を阻害する薬剤はウイルス感染を防ぐ薬剤となります。そのスクリーニングを行う試薬として、

  1. ACE2細胞外ドメイン
  2. SARS-CoV-2スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ
  3. ビオチン化SARS-CoV-2スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ

の販売を開始しました。

SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ
SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ

ビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ
ビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ

背景

アンジオテンシン変換酵素2( Angiotensin-converting enzyme 2、ACE2)はACE ホモログとも呼ばれ、ACE とかなり相同性のある内在性膜タンパク質です。ACE2 は血圧調節に関与するレニン・アンジオテンシン系で働く因子の一つとして知られていましたが、最近になり、COVID-19 の原因である新型コロナウイルスがヒトの細胞に感染する際、細胞膜に存在するACE2 に結合してから細胞内に取り込まれることが明らかとなり、ACE2 は新型コロナウイルスの受容体でもあると考えられています。(1)
ヒトACE2 蛋白・His タグ (品番:HAK-ACE2_UL-1) を96穴プレートに固相し、ウイルス蛋白の受容体結合ドメインをウサギFc と結合させた融合蛋白である SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ(品番:HAK-SPD_UL-1) または ビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ(品番:HAK-SPD_bio-1) を加え、HRP 標識した2次抗体やストレプトアビジンで検出させることで、高感度なバインディング・アッセイを提供します。

SARS-CoV-2 スパイク蛋白とACE2 との結合実験プロトコール

詳細なバインディング・アッセイおよび競合法による結合阻害物質スクリーニングのプロトコールを提供しております。
こちらから、PDFをダウンロードしてご覧いただけます。

ACE2細胞外ドメイン

製品情報

SDS-PAGE
図1 SDS-PAGE
タンパク質構造
ヒトACE2 蛋白・His タグ (HAK-ACE2_UL-1) は、ヒト・アンジオテンシン変換酵素2 の細胞外領域に相当するSer19-Pro738 のC 末端にポリヒスチジンタグを付けてHEK293 細胞で発現させ、Ni カラムを用いて精製したものが含まれています。
純度
>95%(SDS-PAGE)
組成
ヒトACE2 蛋白・His タグ 1mg/mL、0.1MPBS(pH7.2~7.4)
保存
凍結融解の繰り返しは避けてください。製品は受領時に-70°C 以下で保管して下さい。使用時に小分け分注を推奨します。
SDS-PAGE
本製品430ng を4~20%グラジエント・ゲルで電気泳動し、CBB 染色した。(図1)
 

使用例

  1. バインディング・アッセイ
    • 固相化した0.156-10µg/mL のヒトACE2蛋白・His タグ(100µL/ウェル)に0.8µg/mLのビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグを結合させ、HRP 標識ストレプトアビジンで検出した。
      この際の検量線において、線形範囲(リニアレンジ)は0.156-1.25µg/mL であった。(図2)
  2. 競合法による結合阻害物質スクリーニング
    • 固相化した1µg/mL のヒトACE2 蛋白・His タグ(100µL/ウェル)と600ng/mL のビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグの結合反応に10-5000ng/mLの結合阻害物質(SARS-CoV-スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ)を添加し、HRP 標識ストレプトアビジンで検出した。この際の50%阻害濃度(IC50)は140ng/mL(2.7nM)であった。(図3)

バインディング・アッセイ
図2 バインディング・アッセイ

競合法によるインヒビション・アッセイ
図3 競合法によるインヒビション・アッセイ

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
ヒトACE2蛋白・Hisタグ
Angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) protein, Human 詳細データ
HAK HAK-ACE2_UL-1 100 UG
¥80,000
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SARS-CoV-2スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ

製品情報

SDS-PAGE
図4 SDS-PAGE

タンパク質構造
SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ(HAK-SPD_UL-1) は、SARS-CoV-2Spike glycoprotein Receptor-bindingdomain のArg319-Phe541 のC 末端にウサギIgG1 Fc タグを付けてHEK293 細胞で発現させ、プロテインA カラム を用いて精製したものが含まれています。
純度
>95%(SDS-PAGE)
組成
SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ 1mg/mL, 0.1M-PBS(pH7.2~7.4)
保存
凍結融解の繰り返しは避けてください。製品は受領時に-70°C 以下で保管して下さい。使用時に小分け分注を推奨します。
SDS-PAGE
本製品500ng を4~20%グラジエント・ゲルで電気泳動し、CBB 染色した。(図4)
 

使用例

  1. バインディング・アッセイ
    • 固相化した1μg/mL のヒトACE2 蛋白・His タグ(100µL/ ウェル) に0.293-1200 ng/mL のSARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグを結合させ、HRP 標識 ウサギIgG 抗体で検出した。この際の検量線において、線形範囲(リニアレンジ) は0.293-18.8ng/mL であった。(図5)

バインディング・アッセイ
図5 バインディング・アッセイ

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
SARS-CoV-2スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ
SARS-CoV-2 Spike glycoprotein Receptor-binding domain, Virus 詳細データ
HAK HAK-SPD_UL-1 100 UG
¥80,000
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ビオチン化SARS-CoV-2スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ

製品情報

SDS-PAGE
図6 SDS-PAGE

タンパク質構造
ビオチン化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ(HAK-SPD_bio-1)は、 SARS-CoV-2 Spike glycoproteinReceptor-binding domain のArg319-Phe541 の C 末端にウサギIgG1 Fc タグを付けてHEK293 細胞で発現させ、プロテインA カラムを 用いて精製し、ビオチン化したものが含まれています。
純度
>95%(SDS-PAGE)
組成
SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグ 1mg/mL, 0.1M-PBS(pH7.2~7.4)
保存
凍結融解の繰り返しは避けてください。製品は受領時に-70°C 以下で保管して下さい。使用時に小分け分注を推奨します。
SDS-PAGE
ビオチン化前の本製品500ng を4~20%グラジエント・ゲルで電気泳動し、 CBB 染色した。(図6)
 

使用例

  1. バインディング・アッセイ
    • 固相化した1µg/mL のヒトACE2 蛋白(100µL/ウェル)に29-21000ng/mL のビオチン 化SARS-CoV-2 スパイク蛋白RBD・ウサギFc タグを結合させ、HRP 標識ストレプト アビジンで検出した。この際の検量線において、線形範囲( リニアレンジ) は 29-798ng/mL であった。(図7)

バインディング・アッセイ
図7 バインディング・アッセイ

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
ビオチン化SARS-CoV-2スパイク蛋白RBD・ウサギFcタグ
SARS-CoV-2 Spike glycoprotein Receptor-binding domain, Virus, Biotin 詳細データ
HAK HAK-SPD_BIO-1 20 UG
¥20,000
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参考文献

  1. Alexandra C. Walls, Young-JunPark, et al., Cell 180, 1-12 (2020)

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商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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