ヒトαTAT1 リコンビナントタンパク質 α-チューブリン N-アセチルトランスフェラーゼ 1 (αTAT1)

αTAT1とは

微小管 (MT) の翻訳後修飾 (PTM) は 、40年以上前に初めて発見され⁽¹⁾、微小管の活性を調節するメカニズムです。α-チューブリン N-アセチルトランスフェラーゼ 1 (αTAT1) によるα-チューブリンのリジン 40 (K40) のアセチル化 (図 1) は、最もよく研究されているチューブリンのアセチル化です。 MT のほとんどの PTM は C 末端にありますが、K40 は MT の内腔側にあります。K40 のアセチル化が MT の安定性に影響を与えるかどうかは不明ですが、Cryo-EM を使用した最近の研究では、K40 でのアセチル化による MT の構造変化が観察されています⁽²⁾。加えて、MT-PTM は、MT 関連タンパク質 (MAP) およびキネシンモータータンパク質の MT への異なる結合に関連していると考えられています^(3,4)。MT アセチル化が細胞プロセスの調節において果たす役割を明らかにするにはさらなる研究が必要ですが、異常なアセチル化は神経変性疾患、繊毛症、および癌と関連付けられています^(5)。

図1　微小管内腔への入り口

【関連情報】

• 微小管内部の実体
  CYTOSKELETON NEWS 2013年5月号
• 翻訳後修飾のアセチル化による微小管の安定化
  CYTOSKELETON NEWS 2017年9月号

• チューブリンのIn Vitroアセチル化
• チューブリンを用いたアセチル化研究
• 他の既知ターゲットのIn Vitroアセチル化

• 由来：The human αTAT1 protein (2-236) was produced in a bacterial expression system
• タグー：untagged
• 分子量：約27kDa
• 形状：白色個体　凍結乾燥品

純度

20µgのαTAT1サンプルの純度は、4-20%ポリアクリルアミド勾配ゲル上でのクマシーブルー染色によるタンパク質濃度のスキャン測定にて決定しました。アセチル化チューブリンタンパク質の純度は 90% であると測定されました。(図2)

図2. αTAT1(residues 2-236)の純度分析
タンパク質定量は、Precision Red Protein Assay Reagent (Cytoskeleton社 品番：ADV02) を使用して実行された。 分子量マーカー： Invitrogen社製 (Mark 12)。

生物活性

αTAT1 の生物学的活性は、ウェスタン分析によってチューブリンのアセチル化を測定することにより、チューブリン重合中のチューブリンをアセチル化する能力によって評価されます (図3)。結果は、αTAT1 の添加により K40 アセチル化α-チューブリンが増加することを示しています。

図3. TAT1によるチューブリンのアセチル化
各反応には 40 mM のチューブリン (Cytoskeleton社 品番：T240) が含まれており、チューブリン:αTAT1 タンパク質の反応比は 1:12、1:24、1:48、および 1:120 に減少する。αTAT1の存在下または非存在下で、チューブリンを5 mg/mlで30℃で60分間重合させた。

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