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記事ID : 12705
研究用

不飽和脂肪酸を測定脂質定量キット(比色)

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脂質定量キットは、血清、血漿、細胞・組織サンプル中の脂質(不飽和脂肪酸)を定量的に測定するための簡単な方法を提供します。

本製品は、sulfo-phospho-vanillin 法[4]を利用しており、サンプルを酸性化・加熱して可溶化した後に定量します。バニリン(vanillin)試薬は酸性環境で脂質と反応し、波長 540 nm のプレートリーダーで簡単に検出できる比色生成物を形成します。

背景

脂質定量について

脂質(Lipids)は、モノグリセリドやジグリセリド、トリグリセリド、脂肪、ステロール、およびその他を含む多様な分子グループの総称です。脂質は、細胞膜の完全性を維持するだけではなく、膜輸送やシグナル伝達、アポトーシス、エネルギー貯蔵などの細胞プロセスに関与しています。脂質代謝の摂動は、癌、糖尿病、アルツハイマー病、冠動脈性心疾患などの多くの疾患に関連します。

脂質を研究するためには、最初に組織や細胞培養物から脂質抽出[1]を行い、その後定量化する必要があります。脂質を高感度に定量するにはいくつかの方法がありますが、HPLC装置や光散乱検出技術 Iatroscan TLC-FID アナライザー などの高価な装置を必要とします[2、3]。

特長

  • 血漿、血清、培養細胞由来のトータル不飽和脂肪酸を定量
  • Sulfo-phospho-vanillin 法を利用して、96ウェルプレートで定量

構成内容

  • 精製脂質スタンダード
  • バニリン試薬

アッセイ原理

まず、粗製または精製脂質を96ウェルマイクロプレートにアプライします。 その後、濃硫酸を添加し、サンプルを可溶化するために加熱します。酸性溶液中でバニリンを加えます。 脂質は、酸の存在下で容易にバニリンと反応し、比色生成物を形成します。

プロトコール

  1. 15 μL のサンプルまたはスタンダードをマイクロ遠心チューブまたは96ウェルプレートに加えます。
  2. サンプルとスタンダードをカバーせずに90℃で30分間インキュベートし、有機溶媒を完全に蒸発させます。
    NOTE: DMSO and aqueous-based samples will not evaporate during this step.
  3. サンプルを、5分間、4℃に移します。
  4. 150 μLの 18M硫酸を加えます。
  5. サンプルを90℃、10 分間インキュベートします。
  6. サンプルを、5分間、4℃に移します。
  7. サンプルまたはスタンダード100 µLを96ウェルプレートに移します。
  8. バックグラウンドを測定するために、OD 540 nm で吸光度測定します。
  9. 100 uL のバニリン(Vanillin)試薬を加え、慎重に混合します。
  10. 37℃、15分間インキュベートします。
  11. OD 540 nm で吸光度測定します。

測定例

脂質定量キット スタンダードカーブ
図1 脂質定量キット スタンダードカーブ

参考文献

1. Folch J, Lees M, and Slone Stanley GH (1956) J. Biol. Chem. 226, 497-509.
2. Lutzke BS and Brauler JM. (1990) J. Lipid Res., 31, 212-2130
3. Fraser AJ, Tocher DR, and Sargent JR (1985) J. Exp. Marine Biol. And Ecol. 88, 91-99.
4. Chabrol E and Charonnat R (1937) Presse Med. 45, 1713-1714.

脂質定量キット(比色)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Lipid Quantitation Kit (Colorimetric)詳細データ CBL STA-613 100 ASSAY
¥81,000

[関連]脂質抽出キット

[注意]培養細胞や組織サンプルの場合、脂質の調製が必要です。

Folch法を用いて抽出するかセルバイオラボ社の 脂質抽出キット のご使用を推奨しています。

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
Lipid Extraction Kit (Chloroform-Free)詳細データ CBL STA-612 50 PREP.
¥75,000
Lipid Extraction Kit (Chloroform-Free), Trial Size詳細データ CBL STA-612-T 10 PREP.
¥37,000

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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