トランスフェクションの必要なし！生細胞中のオートファジーを迅速に検出CYTO-ID® オートファジー検出キット 2.0

本製品は、オートファジー小胞の検出や生細胞内でのオートファジーのモニタリングに使用できます。
オートファジー小胞を選択的に染色する新規蛍光プローブが含まれているため、トランスフェクションの必要がなく、迅速かつ定量的アプローチが可能となります。

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＊本製品はCYTO-ID® オートファジー検出キット(品番：ENZ-51031-K200、ENZ-51031-0050)と染色メカニズムは同様ですが、蛍光プローブの改良により染色の鮮明さと光安定性が向上しています。

オートファジー（Autophagy）とは？

下記リンクより特集ページをご覧ください。

• 特集：オートファジー／Autophagy

キットに含まれる蛍光プローブは、カチオン性両親媒性トレーサー（Cationic Amphiphilic Tracer, CAT）色素であり、リン脂質症誘発薬物と似たプロセスで細胞内に素早く入り込みます。色素の官能基を精選することで、リソソームへの色素の蓄積を防ぎながら、かつオートファジーパスウェイに関連する小胞を特異的に染色することが可能となりました。

• オートファジー小胞を特異的に染色するため、トランスフェクションの必要なし
• 従来のオートファジー検出用蛍光プローブ（Monodansylcadaverine, MDC）と比較して、より明るく光安定性の高いプローブを使用
• リソソームのごくわずかな染色によるバックグラウンドを低減
• 異種細胞集団内におけるオートファジーを迅速に定量
• オートファジー誘発剤および阻害剤のハイスループットスクリーニングを容易に行うことが可能

• CYTO-ID® Green 検出試薬2
• Hoechst 33342（核染色試薬）
• ラパマイシン（オートファジー誘発剤）
• 10X アッセイバッファー
• クロロキン（リソソーム阻害剤）

下記リンクよりメーカープロトコールをご確認ください。

1. 試薬の調製
2. 蛍光/共焦点顕微鏡（接着細胞）
3. 蛍光/共焦点顕微鏡（浮遊細胞）
4. フローサイトメトリー
5. 蛍光マイクロプレートリーダー

図1. CYTO-ID® Green 検出試薬2によるHeLa細胞の染色画像
A：適正培地で4時間培養　B：クロロキン 40µMを含む飢餓培地（EBSS）で4時間培養
クロロキン存在下のEBSSで培養した細胞は非常に鮮明な染色像を示す。

図2. フローサイトメトリーによるJurkat細胞のオートファジープロファイリング
Jurkat細胞をそれぞれ0.5µM ラパマイシン（RAP）、10µM クロロキン（CLQ）、ラパマイシンとクロロキンの両方（RAP+CLQ）で20時間処理した。CYTO-ID® Green 検出試薬2で30分間染色し、フローサイトメトリーで解析した。ラパマイシンとクロロキンの両方（RAP+CLQ）で処理した細胞で蛍光強度の増加を示す。

図3. マイクロプレートベースでのHepG2細胞のオートファジープロファイリング
HepG2細胞をそれぞれ0.5µM ラパマイシン（Rap）、10µM クロロキン（CLQ）、ラパマイシンとクロロキンの両方（Rap+CLQ）で20時間処理した（DMSO：コントロール）。細胞数を標準化するためにHoechst 33342で核染色を行った。ラパマイシンとクロロキンの両方（Rap+CLQ）で処理した細胞でオートファジーの増加が確認された。

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