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デュアル（ホタル Firefly / ウミシイタケ Renilla）ルシフェラーゼアッセイキット Luc-Pair™ Duo-Luciferase Assay Kit 2.0（優れた安定性）

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メーカー名：GeneCopoeia, Inc.

Luc-Pair™ Duo-Luciferase Assay Kit 2.0 は、従来GeneCopoeia社よりご提供しているルシフェラーゼアッセイキットの安定性を改良したもので、96ウェルプレートでホタル（Firefly）およびウミシイタケ（Renilla）ルシフェラーゼを順次測定することができます。miRNA（microRNA）の標的遺伝子 3'UTR領域を測定することによる機能検証実験にも有用です。

Luc-Pair™ ルシフェラーゼアッセイキット　選択ガイド

背景

ルシフェラーゼについて

レポーター遺伝子発現を用いた転写調節解析は、細胞生物学や医薬品開発で一般的に利用されています。ルシフェラーゼは、以下の利点を持っており、遺伝子発現研究で最も広く使用されるレポーター遺伝子です。

広いダイナミックレンジ・高感度
哺乳類細胞に存在しない
一貫性・再現性
費用対効果の高さ
簡便なアッセイ
ハイスループットスクリーニングに最適

2種類のルシフェラーゼ

ホタル（Firefly）とウミシイタケ（Renilla）由来のルシフェラーゼは、簡便で迅速、高感度なアッセイが可能であるため広く使用されています。これらは、進化的起源が異なり、酵素の構造と基質が大きく違うことから、デュアルアッセイに理想的です。

ホタル由来のルシフェラーゼ

ホタル（Photinus pyralis）ルシフェラーゼは、プロモーター活性や転写後調節の両方をモニターするために最適なレポーターで、61kDaの細胞質酵素です。発光強度は、ルシフェラーゼ量に比例し、ルミノメーターまたは多機能マイクロプレートリーダーを用いて測定されます。

図1. ホタルルシフェラーゼの触媒反応
ウミシイタケ由来のルシフェラーゼ

ウミシイタケ（Renilla reniformis）ルシフェラーゼは、翻訳後修飾を必要としない36kDaの単量体タンパク質です。したがって、リアルタイムでの転写レポーターとして有用です。本酵素は、以下の反応を触媒します。

図2. ウミシイタケルシフェラーゼの触媒反応

ルシフェラーゼアッセイでは、目的遺伝子に近接するシスエレメントの転写活性をモニターすることができます。しかしながら、miRNAによる標的遺伝子3'UTR領域の調節を介した転写抑制効果の測定に関しては、その酵素基質活性の範囲が小さいために今まで困難でした。真の転写抑制効果をモニターするためには、より長期間安定な酵素基質複合体が必要です。

また、生物学的ばらつきや確率論的現象がノイズとして結果に影響します。実際のシグナルと非特異的な応答を区別するためには、独立したコントロールレポーターを用いてレポーター遺伝子の発現を標準化します。これは、トランスフェクション効率や細胞生存率の補正にも必要です。

本製品は、ホタルルシフェラーゼとウミシイタケルシフェラーゼの構造と基質の違いを利用し、2種類のルシフェラーゼ活性を連続的に測定することができ、ウミシイタケルシフェラーゼをコントロールレポーターとして利用できます。アッセイでは、単一サンプル中のホタルルシフェラーゼ活性とウミシイタケルシフェラーゼ活性を順番に測定します。第一の試薬を加えるとホタルルシフェラーゼが発光し、第二の試薬によってホタルルシフェラーゼが消光すると同時にウミシイタケルシフェラーゼの発光が生じます。

特長

安定性を強化
柔軟性を向上
広いダイナミックレンジ・高感度
あらゆる哺乳動物細胞に最適
低バックグラウンド
長時間のシグナル、高い再現性
簡単、安価
ハイスループットスクリーニングにも最適

利点とアプリケーション

高い安定性 - ルシフェラーゼ活性は、酵素基質添加後30分でも80％以上
miRNAの機能検証に理想的
使いやすい - 短い操作時間と迅速な結果
マイクロプレートフォーマットに適合 - 時間とお金を節約

構成内容

構成品	LF001 （100 反応）	LF002 （300 反応）	LF003 （1000 反応）
Lysis Buffer（10×）［Cell Lysis buffer］	1.0 mL	1.0 mL×3	10 mL
Luc Buffer I（5×）［Firefly luciferase buffer］	1.0 mL×2	1.0 mL×6	10 mL×2
Luc Sub I（100×）［Firefly luciferase substrate］	100 μL	100 μL×3	500 μL×2
Luc Buffer II（5×）［Renilla luciferase buffer］	1.0 mL×2	1.0 mL×6	10 mL×2
Luc Sub II（100×）［Renilla luciferase substrate］	100 μL	100 μL×3	500 μL×2

製品データ

図3. 本製品でのホタルルシフェラーゼ（FLuc）またはウミシイタケルシフェラーゼ（RLuc）シグナルの安定性
HEK293細胞に、GeneCopoeia社 pEZX-MT06 miRNAレポーターベクターをトランスフェクションし、48時間後に測定した。
（A）FlucとRLuc活性の測定
（B）他社のデュアルルシフェラーゼアッセイキットのデータ

図4. HEK293細胞にトランスフェクションしたルシフェラーゼ発現ベクター量と発光量の直線性
HEK293細胞に、GeneCopoeia社 pEZX-MT06 miRNAレポーターベクターをトランスフェクションし、48時間後に測定した。
Fluc活性（A）とRluc活性（B）は、3分間のインキュベーション後、異なる細胞数のライセートから測定した。

Luc-Pair™ Duo-Luciferase Assay Kit 2.0（Firefly and Renilla）

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Luc-Pair Luciferase Assay Kits 2.0	GCP	LF001	100 RXN	￥37,000
Luc-Pair Luciferase Assay Kits 2.0	GCP	LF002	300 RXN	￥87,000
Luc-Pair Luciferase Assay Kits 2.0	GCP	LF003	1000 RXN	￥250,000

Firefly luciferase (hLuc) and Renilla luciferase (Rluc) cloning vector

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Firefly luciferase (FLuc) and Renilla luciferase (Rluc) reporter cloning vector	GCP	ZX001	10 UG	お問い合わせ
Firefly luciferase (FLuc) and Renilla luciferase (Rluc) reporter cloning vector	GCP	ZX002	10 UG	お問い合わせ
Firefly luciferase (FLuc) and Renilla luciferase (Rluc) reporter cloning vector	GCP	ZX003	10 UG	お問い合わせ

Luc-Pair™ ルシフェラーゼアッセイキット　ラインアップ

選択ガイド
	ベクター	Luc-Pair™ Luciferase Assay Kit
	ベクター	Duo-Luciferase Assay Kit 2.0	Duo-Luciferase HS Assay Kit	Firefly Luciferase HS Assay Kit	Renilla Luciferase HS Assay Kit
レポーター遺伝子		ホタル・ウミシイタケルシフェラーゼ	ホタル・ウミシイタケルシフェラーゼ	ホタルルシフェラーゼ	ウミシイタケルシフェラーゼ
主な特長		安定性が向上	高感度	高感度	高感度
miTarget™ 3′ UTR miRNA Target Clones	pEZX-MT05
miTarget™ 3′ UTR miRNA Target Clones	pEZX-MT06
GeneCopoeia社ベクターオプション	pEZX-FR01 （品番： ZX001）
	pEZX-FR02 （品番： ZX002）
	pEZX-FR03 （品番： ZX003）
Promega社ベクターオプション	pGL4 Luciferase Reporters vectors
Promega社ベクターオプション	pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vectors