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少量・多検体のExtracellular vesicle（EV）精製に最適 EV-Capture™ EV Purification Spin Column Kit

メーカー名：コスモ・バイオ株式会社

EV-Capture™ EV Purification Spin Columnは細胞外小胞(extracellular vesicle : EV) 表面が負に帯電していることを利用して精製します。小型卓上遠心機で使用可能なスピンカラムタイプで、安価で容易にインタクトなEVを回収できます。少量・多検体のEV精製に最適です。

サンプルのお申し込み

* 無料サンプルは1研究室あたり1点のみです。

無料サンプル（品番：EVP01-004S　4本入り）

背景

細胞外小胞(extracellular vesicle : EV) は細胞から放出される脂質二重膜を持つ粒子の総称で、細胞間の情報伝達に重要な役割を果たすとされ、盛んに研究されています。生体試料や培養上清からEVを精製する際には超遠心法が最もよく使われていますが、高額な設備と長時間の処理が必要となります。そのため、様々な代替法が開発されている反面、用途に応じて適切な方法を選択することが非常に重要になってきています。

特長

簡単な操作で30分以内にインタクトなEV（エクソソームを含む）を回収可能です。
生体サンプルや培養上清など、幅広いサンプルに使用可能です。
ヒト・マウス等生物種問わず、乳酸菌等の微生物のEVも回収可能です。
血清サンプルでは約98％のタンパク質を除去可能です。
小型卓上遠心機で使用可能なスピンカラムタイプです。

精製例

1.　ヒト血清のEVおよびタンパク質回収率

サンプル：ヒト血清

ヒト血清をEV-Capture™ EV Purification Spin Columnで精製しました。血清は12,000 x gで15分間遠心分離し、上清を0.45 µmのフィルタで処理しました。血清アプライ量を50 µLから400 µLまで増加させ、ナノサイトで精製物の微粒子濃度を測定しました。タンパク濃度はBradford法で測定し、SDS-PAGEで精製前後のバンドパターンを比較しました。

	精製した血清量（µL）	精製時希釈倍率	溶出容量（µL）	微粒子濃度（particles / mL）	タンパク濃度（mg / mL)	泳動アプライ量（µL）	泳動アプライ量血清相当量（µL）
血清	-	-	-	4.14 x 10¹²	55.54	0.1	0.10
条件1	50	6	300	4.22 x 10¹¹	0.13	5.0	0.83
条件2	100	4	300	8.14 x 10¹¹	0.29	5.0	1.67
条件3	200	2	300	1.64 x 10¹²	0.69	5.0	3.33
条件4	400	2	300	2.08 x 10¹²	1.16	5.0	6.67

血清アプライ量が200 µL以下であれば微粒子の約6割を回収することができ、98％以上のタンパク質を除去することができました。SDS-PAGEのバンドパターンも精製前と大きく変化しており、主要タンパク質を効率的に除去できていることが分かります。

2. 微生物由来EVの回収

サンプル
1.大腸菌由来EV（品番：ECEV）
2.乳酸菌由来EV（品番：LBEV-R2）

それぞれ5.0 x 10⁹ particles / mLに調製してEV-Capture™ EV Purification Spin Columnに0.6 mLアプライして回収しました。標品と回収物をグラム陰性菌由来EV検出キットおよびグラム陽性菌由来EV検出キットで比較して回収率を算出しました。

3. Tween20添加による回収率向上

サンプル： HCT116培養上清（無血清）

約1.0 x 10¹⁰ particles / mLの培養上清をEV-Capture™ EV Purification Spin Columnに0.7 mLアプライして回収しました。精製前の培養上清と精製物をヒト由来エクソソーム定量用 CD9×CD63 ELISAキット（品番：EXH0102EL）で比較して回収率を算出しました。溶出バッファーに0.01％のTween20を添加することで、回収率が1.4倍に増加しました。

留意点

サンプルのpHが9を超えると回収率が低下する可能性があります。中和するか付属バッファーで希釈してご使用ください。
血清などのタンパク質濃度が高いサンプルは2～6倍に希釈してからアプライしてください。
サンプルアプライ量は300 µL～700 µLになるよう調整してください。
精製物に樹脂片が混入することがあります。ナノ粒子トラッキング解析などに使用する場合には精製物の遠心上清をご使用ください。
精製物には高濃度の塩が含まれています。必要に応じて透析や限外ろ過などで溶媒置換を行ってください。

EV-CaptureTM EV Purification Spin Column Kit

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
エクソソーム精製スピンカラムキット / EV-Capture^TM EV Purification Spin Column Kit	CSR	EVP01-010	1 KIT [10 PREP]	￥20,000

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少量・多検体のExtracellular vesicle（EV）精製に最適 EV-Capture™ EV Purification Spin Column Kit

背景

特長