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記事ID : 42791
研究用

ワンステップでリポフスチンの自家蛍光を消光 EverBrite TrueBlack® Hardset Mounting Medium

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EverBrite TrueBlack Hardset Mounting Medium

リポフスチンの自家蛍光を消光と同時に、蛍光退色を防ぐhardsetタイプの封入剤です。蛍光染色した組織切片をワンステップで封入、消光、および核対比染色(オプション)することができます。封入剤は、DAPI含有、far-red NucSpot® 640含有、核対比染色なしの組み合わせでお選びいただけます。

背景

TrueBlack® Lipofuscin Quenchersは、ヒトや老齢動物の脳や網膜などの組織において一般的にバックグラウンドの要因とされるリポフスチンの自家蛍光を消光します。また、赤血球細胞や細胞外基質などの他の成分由来のバックグラウンドも低減できる可能性もあります。EverBrite TrueBlack® Hardset Mounting Mediumは、リポフスチンの自家蛍光の消光と封入をワンステップで行う便利な商品です。封入後、封入剤がリポフスチンの蛍光を大幅に減少させ、培地が一晩かけて硬化するのに従って徐々に消光が進んでいきます。VECTASHIELD® Mounting Mediumと異なり、EverBrite TrueBlack®はシアニンベースの蛍光色素にも対応しており、Biotium社のCF® dyesにも使用できるよう最適化されています。
【ご注意】EverBrite TrueBlack® Hardsetは、特定の蛍光を減少させる可能性があります。使用する抗体またはプローブの濃度は、最適化が必要となる場合があります。

EverBrite TrueBlack®は、DAPIまたはBiotium社のNucSpot®核特異的対比染色と共に使用することも可能です。NucSpot® 640は、Cy®5チャネル用の近赤外色素です。近赤外の核染色を用いることで、DAPIのような従来型色素との蛍光の相互干渉やUV光交換(photoconversion)を避けることができます。
【ご注意】NucSpot®dyesは、DAPIフィルターセットを用いると青色の蛍光が検出されます。特に落射蛍光顕微鏡を用いて青色のプローブを使用する場合には、予め確認試験を行う必要があります。

BTI_everbrite_trueblack_fig4.png

特長

  • 自家蛍光を消光できるユニークな封入剤
  • 硬化する際に消光。低いバックグラウンド蛍光
  • CF® dyesや他の色素を光退色から保護
  • 屈折率がカバーガラスと良好に一致(硬化後1.46)
  • DAPI含有、far-red NucSpot® 640含有、核対比染色なしの3タイプから選択可能
【核染色のスペクトル特性】
  • DAPI:Ex/Em=358/461 nm(with DNA)
  • NucSpot® 640:Ex/Em=649/668 nm (with DNA)(Cy®5チャネル用)

アプリケーションに適した消光剤の選択

品名 品番 メリット デメリット
TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 23007
  • リポフスチン自家蛍光を完全に消光
  • 青色と緑色チャネルにおいて超低バックグラウンド
  • わずか30秒で消光
  • 若干の赤色/近赤外バックグラウンドを導入
  • 70% EtOH中でのクエンチング必須
  • 蛍光色素を若干消光する可能性あり
TrueBlack® Plus Lipofuscin Autofluorescence Quencher 23014
  • PBSや他のバッファー中でクエンチング可能
  • リポフスチン自家蛍光を大幅に減少
  • 従来のTrueBlack®に比べ、赤色/近赤外のバックグラウンドが低減
  • 最適な消光を行うため滴定が推奨される
  • 高リポフスチンサンプルに対して、従来のTrueBlack®ほど有効ではない可能性
  • 蛍光色素を若干消光する可能性あり
EverBrite TrueBlack® Hardset Mounting Medium 23017
  • ワンステップで封入・消光
  • リポフスチンの自家蛍光を大幅に減少
  • 従来のTrueBlack®に比べ、赤色/近赤外のバックグラウンドが低減
  • 核対比染色を選択可能
  • 高リポフスチンサンプルに対して、従来のTrueBlack®ほど有効ではない可能性
  • 蛍光色素を若干消光する可能性あり
  • NucSpot®色素は青色色素との適合性を確認する必要あり
EverBrite TrueBlack® Hardset Mounting Medium with DAPI 23018
EverBrite TrueBlack® Hardset Mounting Medium with NucSpot® 640 23019
EverBrite TrueBlack® Hardset Mounting Medium with NucSpot® 680 23022

Biotium社の抗退色封入剤のリスト

品名 核対比染色 品番 特長
EverBrite™ Mounting Medium 23001
  • ゲル状のwet-set封入剤
  • カバーガラスシーリングが必須
  • 屈折率:1.46
EverBrite™ with DAPI DAPI 23002
EverBrite™ with NucSpot® 640 (近日発売) NucSpot® 640 近日発売
EverBrite™ with NucSpot® 680 (近日発売) NucSpot® 680 近日発売
Drop-n-Stain EverBrite™ Mounting Medium なし 23008
  • ゲル状のwet-set封入剤
  • 簡便なスポイトボトル
  • ウェルとチャンバーに適切
  • 屈折率:1.42
Drop-n-Stain EverBrite™ with DAPI DAPI 23009
EverBrite™ Hardset Mounting Medium なし 23003
  • hard-set封入剤
  • 封入後24時間で硬化シール形成
  • カバースリップシールは不要
  • 屈折率:1.46(硬化後)
EverBrite™ Hardset with DAPI DAPI 23004
EverBrite™ Hardset with NucSpot® 640 NucSpot® 640 23016
EverBrite™ Hardset with NucSpot® 680 (近日発売) NucSpot® 640 近日発売
EverBrite TrueBlack® Hardset Mounting Medium なし 23017
  • リポフスチン消光を行う唯一のユニークな退色防止剤
  • 硬化に伴い消光、バックグラウンドを低減
EverBrite TrueBlack® Hardset with DAPI DAPI 23018
EverBrite TrueBlack® Hardset with NucSpot® 640 NucSpot® 640 23019
EverBrite TrueBlack® Hardset with NucSpot® 680 (近日発売) NucSpot® 680 近日発売
CoverGrip™ Coverslip Sealant N/A 23005
  • wet-setしたカバーガラスの端を密封

注:NucSpot® dyesは、DAPIフィルターセットを用いるとかすかな蛍光を示すため、特に落射蛍光顕微鏡によるイメージングでは、青色プローブとの適合性を予めテストする必要があります。

実験例

BTI_everbrite_trueblack_fig5.png
図1
メタノール固定したヒト大脳皮質の凍結切片をCF® 488A Anti-GFAP、クローンGA5+ ASTRO/789(グリア細胞:緑色)で染色後、NucSpot® 640(核:紫紅色)と共にEverBrite™ HardsetまたはEverBrite TrueBlack® Hardset mounting mediumで封入した。リポフスチン自己蛍光はCy3®チャネル(燈色)でイメージングした。切片を室温で一晩硬化させた後、イメージングをしており、EverBrite TrueBlack® Hardsetはリポフスチンを効率よく消光した。
BTI_everbrite_trublack_fig9.png
図2
メタノール固定したヒト大脳皮質の凍結切片をCF® 488A Anti-GFAP GA5+ ASTRO/789で染色した。これをDAPIと共にEverBrite™ HardsetまたはEverBrite TrueBlack® Hardset mounting mediumで封入した後、室温で一晩、硬化させた。青、緑、赤、および遠赤色チャネルを統合した画像を示した。リポフスチン自己蛍光はEverBrite™ Hardsetで封入したサンプルでは桃/赤で示される(左)。EverBrite TrueBlack® Hardsetは、GFAP(緑色)とDAPI(青色)シグナルを保ちつつ、リポフスチン蛍光を消光した(右)。

その他のイメージギャラリーはこちら

EverBrite TrueBlack® Hardset Mounting Mediumシリーズ

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
EverBrite TrueBlack(R) Hardset Mounting Medium詳細データ BTI 23017-T 2 ML
¥19,000
EverBrite TrueBlack(R) Hardset Mounting Medium詳細データ BTI 23017 10 ML
¥70,000
EverBrite TrueBlack(R) Hardset Mounting Medium with DAPI詳細データ BTI 23018-T 2 ML
¥20,000
EverBrite TrueBlack(R) Hardset Mounting Medium with DAPI詳細データ BTI 23018 10 ML
¥76,000
EverBrite TrueBlack(R) Hardset Mounting Medium with NucSpot(R) 640詳細データ BTI 23019-T 2 ML
¥22,000
EverBrite TrueBlack(R) Hardset Mounting Medium with NucSpot(R) 640詳細データ BTI 23019 10 ML
¥81,000

【関連商品】 CoverGrip™ カバーガラス シーリング剤

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
CoverGripTM Coverslip Sealant詳細データ BTI 23005 15 ML
¥10,000
CoverGripTM Coverslip Sealant Refill詳細データ BTI 23005-1 100 ML
¥44,000

【関連商品】EverBrite™ Mounting Medium

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
EverBriteTM Mounting Medium詳細データ BTI 23001 10 ML
¥35,000
EverBriteTM Mounting Medium with DAPI詳細データ BTI 23002 10 ML
¥40,000
EverBriteTM Hardset Mounting Medium詳細データ BTI 23003 10 ML
¥40,000
EverBriteTM Hardset Mounting Medium with DAPI詳細データ BTI 23004 10 ML
¥45,000

【関連商品】TrueBlack® リポフスチン自家蛍光クエンチャー(20X in DMF)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
TrueBlack(R) Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 20X in DMF詳細データ BTI 23007 1 ML
¥37,000

イメージギャラリー

BTI_everbrite_trueblack_fig7.png
図3
ヒト大脳皮質の凍結切片をCF® 405S GFAP Antibody (ASTRO/1974R)(グリア細胞:シアン)で染色後、NucSpot® 640と共にEverBrite™ HardsetまたはEverBrite TrueBlack® Hardsetで封入した。統合された画像では、リポフスチン自己蛍光は燈色で示されるが、EverBrite TrueBlack® Hardsetで封入した後、効率よく消光されたのがわかる。核はNucSpot® 640で染色した(紫紅色)。
BTI_everbrite_trueblack_fig6.png
図4
DAPIと共にEverBrite™ Hardsetで封入(上)、またはDAPIと共にEverBrite TrueBlack® Hardsetで封入(下)したメタノール固定ヒト大脳皮質の凍結切片を示した。EverBrite TrueBlack® Hardset mounting mediumは、緑、赤、遠赤色チャネルが融合した桃/白色で示されている(右)。全チャネルの統合では、核はDAPIにより青色に染色されている(左)。
 
BTI_everbrite_trueblack_fig8.png
図5
PFA固定化ラット精巣凍結切片をCF® 488Aファロイジン(緑色)で染色後、NucSpot® 640と共にEverBrite TrueBlack® Hardset mounting mediumで封入した。
BTI_everbrite_trueblack_fig11.png
図6 FITC抗体で染色したHeLa細胞の光安定性
種々の封入剤を用いたHeLa細胞におけるFITC染色の光安定性。EverBrite™ Hardset mounting mediumは、ProLong® Gold Antifade Mountant(Thermo Fisher Scientific)に比べてFITC蛍光を著しく延長できた。
 
BTI_everbrite_trueblack_fig12.png
図7 Cy5抗体で染色したHeLa細胞の光安定性
種々の封入剤を用いたHeLa細胞におけるCy5®染色の光安定性。EverBrite™ Hardset mounting mediumの主な利点は、Vectashield®と異なりシアンを利用したフルオロフォア蛍光を低減させないことである。Vectashield®におけるCy5®の蛍光値は時間t0におけるPBSの値にノーマライズされたことから、Vectashield®によるシアニン色素蛍光の降下がわかる。

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

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