安全・高感度にDNA／RNAを検出 SMOBIO社 FluoroVue™ 核酸染色試薬

FluoroVue™ 核酸染色試薬は、従来のエチジウムブロマイド（EtBr）に代わる安全な染色試薬で、アガロースゲルにあらかじめ添加して核酸を染色する方法（先染め）に最適です。二本鎖 または 一本鎖 DNA/RNA を、EtBr の数倍高感度に検出できます（表1、図2、図3）。TAEバッファー、TBEバッファーで調製したアガロースゲルに、10,000×希釈で加えてご使用ください。

核酸を高感度に検出するために、試薬をアガロースゲルにあらかじめ添加する方法（先染め）を推奨します。

※1： ミニ水平型電気泳動システムの場合：
アガロースゲル 40 mL 、泳動バッファー 300 mL を使用。
通常、後染めに使用する染色液の量は 100 mL。

※2： 感度の評価には、青色光励起下でのExcelBand DNAラダー（品番： DM3100）の 4 kb バンドを用いた。

図1:　励起および蛍光スペクトル
FluoroVue™ 核酸染色試薬は、従来のUVゲル照明装置だけでなく、より安全な長波長の青色LED光照明装置でもご使用いただけます。核酸に結合した色素の最大励起波長は 250 nm および 482 nm で、最大蛍光波長は 509 nm です（図1）。

• アガロースゲルにあらかじめ添加する方法（先染め）に最適
• 一本鎖 DNA、二本鎖 DNA、RNA に結合
• 検出感度： 0.14 ng（DNA）、1 ng（トータル RNA）
• EtBr に代わる安全な染色試薬
• 青色光／UV光で使用可能
• クローニング効率が上昇（青色光）

A. アガロースゲルに添加（先染め）の場合

• TAE／TBEバッファーで調製したゲルを注ぐ直前に、FluoroVue™ 核酸染色試薬を 1：10,000 希釈で加えます。
  TAE（40 mM Tris-acetate, 1 mM EDTA, pH 8）
  TBE（89 mM Tris base, 89 mM boric acid, 1 mM EDTA, pH 8）
• 電気泳動中／後は、ゲルを遮光してください。

B. 泳動バッファーに添加の場合

• 染色試薬を泳動バッファーに 1：10,000 希釈で加え、電気泳動中に核酸を染色します。
• アガロースゲルに添加する方法と比較して、検出感度がやや低下します。
• 電気泳動中／後は、ゲルを遮光してください。

C. 電気泳動後に染色（後染め）の場合

• FluoroVue™ 核酸染色試薬は、後染めにもご使用いただけますが、アガロースゲルに添加する方法と比べると検出感度が低下します。
• 染色試薬を TAE、TBE、TEバッファーで 1：10,000 に希釈し、染色液を調製します。
• ゲルを染色液（1×）に完全に浸し、室温で 10-30 分間インキュベートします。
  染色時間は、アガロースゲルの厚さや割合により変わります。
  必要に応じて、室温でゲルを穏やかに撹拌することで、染色時間を短縮することができます。
• 染色用容器は遮光してください。

図2:
本試薬で染色したゲルは、青色光の励起により、黄緑色の蛍光を発する。
感度は約 0.14 ng（4 kb バンド、矢印）。

図3: FluoroVue™（品番：NS1000）とエチジウムブロマイド（EtBr）の比較
NS1000（1:10,000希釈）とEtBr（最終濃度：0.5 µg/mL）を用いて先染め法でゲルを染色し、青色トランスイルミネーター（Gel Doc™ EZ システム, Bio-Rad®）を使用して検出した。評価サンプルとして、ExcelBand DNAラダー（品番：DM3100）の2倍連続希釈液を使用した。 その結果、先染め法および青色光下での検出において、NS1000はEtBrと比較して優れた感度を示した（矢印は1 kbのバンドを指す）。

※NS1000とEtBrの感度は、染色方法および検出条件により異なります。
　NS1000で最適な結果を得るには、先染め法と青色光による検出の併用を推奨します。

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