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OxiSelect™ ミエロペルオキシダーゼ塩素化活性アッセイ(Myeloperoxidase Chlorination Activity Assay Kit)は、細胞ライセート、組織ライセート、精製済み酵素サンプル中のミエロペルオキシダーゼ(MPO)活性を定量的に測定できる蛍光アッセイです。

MPO 酵素は、過酸化水素(H2O2)と塩化物イオンが次亜塩素酸(HOCl)を生成する反応を触媒します。本製品は、HOCl と蛍光プローブを反応させて、生じた蛍光を96ウェルプレートリーダーで測定します。

背景

ミエロペルオキシダーゼ(MPO)とは

ミエロペルオキシダーゼ(MPO;Myeloperoxidase)とは、幅広い生物に対して抗菌活性を示すヘムベースのペルオキシダーゼ酵素です。ミエロペルオキシダーゼ(MPO)は、好中球や単球、軟組織内のマクロファージでみられます。刺激された好中球で多く発現し、過酸化水素(H2O2 と塩化物イオン(Cl-)または他のハロゲン化物から、次亜塩素酸(HOCl)などの次亜ハロゲン酸生成を触媒します。ミエロペルオキシダーゼ(MPO)の特徴的なヘム緑色色素は、膿や粘液などの好中球を含む分泌物で見ることができます。

ミエロペルオキシダーゼ(MPO)は、関節炎、がん、腎機能障害、および嚢胞性線維症を含む多くの疾患状態に関与しています。 遺伝的疾患であるミエロペルオキシダーゼ(MPO)欠損症は、免疫不全を引き起こします。反応種 (reactive species)もまた正常な組織を損傷し、炎症を促進します。 また、酸化ストレスの増加、および カタラーゼ 活性レベルの低下に相関することがわかっています。MPO値の上昇と冠動脈疾患との関連が実証されており、特定の患者における心筋梗塞の予測因子として機能することが報告されています。先天性免疫応答と疾患で多くの役割を果たすミエロペルオキシダーゼ(MPO)は、潜在的な治療ターゲットになっています。

MPOは、塩素化活性と過酸化活性の両方を示します。(図1

特長

  • 細胞および組織ライセートから MPO 塩素化活性を定量
  • 96ウェル蛍光プレートリーダーで結果を測定
  • フルオレセインスタンダードに対して未知サンプルを定量

構成内容

  • 96ウェル マイクロタイタープレート
  • 過酸化水素
  • 蛍光プローブ
  • アッセイバッファー
  • フルオレセインスタンダード

アッセイ原理

MPO 酵素は、過酸化水素(H2O2)と反応して、レドックス中間体 MPO-I を生成します。MPO-I は塩素イオン(Cl-)を酸化し、次亜塩素酸(HOCl)を生成します。この反応には塩素化が含まれます。その後、次亜塩素酸イオン(OCl-)は、非蛍光性のアミノフェニルフルオレセイン(APF)を切断し、フルオレセイン(λex = 485 nm/λem = 525 nm)を生成します。あらかじめ作成したフルオレセイン スタンダードカーブと比較することで、サンプル中のミエロペルオキシダーゼ活性を決定します。

図1 ミエロペルオキシダーゼ(MPO)の塩素化/過酸化反応

図1 ミエロペルオキシダーゼ(MPO)の塩素化/過酸化反応
ミエロペルオキシダーゼの過酸化活性の測定には、 「OxiSelect™ ミエロペルオキシダーゼ過酸化活性アッセイキット(蛍光)」(品番: STA-805)をご使用ください。

使用例

図2 フルオレセイン スタンダードカーブ
図2 フルオレセイン スタンダードカーブ

図3 精製ヒト MPO
図3 精製ヒト MPO
アッセイプロトコールに従い、精製ヒトミエロペルオキシダーゼ 300 pM を室温で30分インキュベートした。活性の測定値は 8.7 μU/mL。

参考文献


  1. Kettle, A.J., et al. J. Clin. Invest. (1994) 233: 502-512.
  2. Malle, E., et al. Br. J. Pharmacol. (2007) 152: 838-854.
  3. Marquez, L. A., et al. J. Biol. Chem. (1994) 269: 7950-7956.

OxiSelect™ ミエロペルオキシダーゼ塩素化活性測定アッセイ(蛍光)

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
OxiSelectTM Myeloperoxidase Chlorination Activity Assay Kit (Fluorometric)詳細データ CBL STA-804 192 ASSAY
¥93,000

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