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抗糖化作用成分の探索に最適コラーゲン抗糖化アッセイキット（蛍光性AGEs）

コラーゲン抗糖化アッセイキットは 96well プレートを用いることにより、無細胞および無酵素的にコラーゲンの糖化反応を追うことができるキットです。コラーゲンの糖化反応を阻害する物質のスクリーニングを容易に行うことができます。機能性食品および化粧品開発における抗糖化素材開発にご利用ください。

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背景

糖類は生体内のタンパク質と共存すると、タンパク質内のリジンやアルギニン残基を修飾・架橋形成し、タンパク質の立体構造を変え、活性や物性に大きく影響を及ぼします。この反応は糖化反応（Glycation）もしくはメイラード反応と呼ばれ、アマドリ転移物が生成する前期反応と、酸化、脱水、縮合等の反応を経て糖化反応後期生成物（advancedglycation endproducts：AGEs）に至る後期反応に分けられます。皮膚、血管壁、骨等あらゆる臓器を形作る構造タンパク質であるコラーゲンも例外ではなく糖化反応を受けます。

本商品は、糖化コラーゲンから生じる蛍光（Ex/Em：370/440 nm）を測定し、糖化反応を追うことができるキットで、コラーゲンの糖化反応を阻害する物質のスクリーニングを容易に行うことができます。機能性食品及び化粧品開発における抗糖化素材開発にご利用ください。

コラーゲン抗糖化アッセイキット

近年、AGEsは生体内においてグルコースだけではなく、グルコースの代謝中間体や分解物、メイラード反応中間体などからも生成することが報告され、生体内で生成されるAGEsの中でも、特に糖代謝中間体に由来するグリセルアルデヒド由来のAGEsが疾患の発症や進展に強く関わっていることが報告されています。

特長

アッセイに必要なすべての試薬が含まれています。（※キットにプレートは含まれていません）
プロトコールが簡便で蛍光プレートリーダー（励起波長370 nm、蛍光波長440 nm）で測定できます。
96ウェルプレート2枚分をアッセイできます。
糖化コラーゲン生成を抑制する物質を探索するのに最適です。

品番：AK70は、フルクトースからの初期の糖化反応の検討にご利用いただけます。経時的に長期間検討することが可能です。
品番：AK71、AK72は、糖代謝中間体であるグリセルアルデヒドを用いることで、24時間の短い糖化反応で結果が得られます。

各キットの違いについて

品番	製品名	糖化開始させる糖・糖代謝物質名	糖化期間
AK70	コラーゲン抗糖化アッセイキット	グルコース / フルクトース	長時間（10～30日間）
AK71	コラーゲン抗糖化アッセイキットver.2	グリセルアルデヒド	短時間（1日間）
AK72	軟骨II型コラーゲン抗糖化アッセイキット	グリセルアルデヒド	短時間（1日間）

実験例

図1　グリセルアルデヒド溶液で糖化させた糖化コラーゲン生成の検討（品番：AK71）
陽性コントロールとしてアミノグアニジン溶液、試料としてドグダミ葉熱水抽出物およびアスパラガス擬葉抽出物を添加し、各成分の糖化コラーゲンの抗糖化活性を検討した。その結果、いずれも濃度依存的に抗糖化活性を有することが認められた。

参考文献

Rungaroon Waditee-Sirisattha, Hakuto Kageyama.
Protective effects of mycosporine-like amino acid-containing emulsions on UV-treated mouse ear tissue from the viewpoints of antioxidation and antiglycation, Journal of Photochemistry & Photobiology, B: Biology, 223 (2021) 112296

よくいただく質問と答え（FAQ）

【01】キット構成品のアミノグアニジン（※抗糖化標準物質）の分子量は？塩酸塩ですか？

分子量は110.55です。塩酸塩です。

【02】アミノグアニジンが抗糖化作用を示すメカニズムは？

アミノグアニジンは、糖化反応前期段階のアマドリ化合物や後期段階生成物である3-デオキシグルコソン分子内のカルボニル基に分子内のアミノ基が結合し、以降の反応の進行を阻止することで糖化反応阻害作用を示します。
薬理作用については、in vitroにおいて糖化反応によるAGEsの生成抑制とタンパク質の架橋・重合形成の抑制作用があると報告されています。

【03】 DMSOの入ったサンプルでの測定は可能ですか？

サンプル溶液中のDMSO濃度を0.2％以下であれば、影響はありません。それ以上の濃度で使用する時はDMSOのみの群を用意してコントロール群としてください。

【04】中和コラーゲン溶液のコラーゲンの種類は？

ブタの皮膚由来コラーゲンになります。Ⅰ型コラーゲンが多く含まれると考えられます。

【05】サンプルのpHに影響される評価系でしょうか？

サンプルのpHに影響される系となります。キット付属の緩衝液でサンプル調整をお願いいたします。とくに酸性が強いサンプルの場合、白濁したコラーゲンゲルがサンプル添加によって溶解し透明になることがあります。ゲルが溶解した場合は、測定値に影響が出ますのでご注意ください。

【06】 37℃かつ湿潤状態が維持できるので、CO₂インキュベーター使用で構わないでしょうか？

CO₂インキュベーターではウェル内の緩衝液が酸性となってしまい、糖化反応に影響が出てしまうため使用できません。CO₂を遮断するために96ウェルプレートに密閉シール処理をしてしまうと、酸素供給が断たれ糖化反応が阻害されます。通常のインキュベーターを使用し、タッパーに湿らせたキムワイプ等を入れ、そこにプレートを静置して蓋をする方法を推奨しております。

コラーゲン抗糖化アッセイキット（グルコース／フルクトース）

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
コラーゲン抗糖化アッセイキット(グルコース/フルクトース) / Collagen Glycation assay kit, Glucose / Fructose	PMC	AK70	1 KIT [96 well x 2]	￥40,000

コラーゲン抗糖化アッセイキット（グリセルアルデヒド）

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
コラーゲン抗糖化アッセイキット (グリセルアルデヒド) / Collagen Glycation Assay Kit, Glyceraldehyde	PMC	AK71	1 KIT [96 well x 2]	￥52,000

製品使用文献

Kazuhiko Ono and Manabu Nakashima. Sodium 4-phenylbutyrate inhibits protein glycation, Biomedical Reports,13, (2020), 61.

軟骨II型コラーゲン抗糖化アッセイキット（グリセルアルデヒド）

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
軟骨Ⅱ型コラーゲン抗糖化アッセイキット（グリセルアルデヒド） / Cartilage Type II Collagen Glycation Assay kit, Glyceraldehyde	PMC	AK72	1 KIT [96 well x 2]	￥52,000