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研究用

簡便かつ正確な軟寒天コロニー形成試験、引用文献多数!CytoSelect™ 96-well 悪性形質転換アッセイ〜軟寒天コロニー形成試験キット〜

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セルバイオラボ社のコロニー形成(細胞形質転換)アッセイは検出系とその他オプションによりお選びいただけます。

背景

悪性形質転換はジェネティックやエピジェネティックの変化により誘導され、成長抑制因子のシグナルに関係なく独自で成長する細胞集団を産生し、細胞外の成長因子をほとんど必要とせずに成長し、場合によっては不死化を起こします。形質転換細胞は正常細胞と異なり、接着せずに増殖する(足場非依存性増殖)ことが可能です。この特性を利用して形質転換細胞を検出するのが、軟寒天コロニー形成試験です。

使用目的

正常細胞は、腫瘍細胞に形質転換すると細胞内外の増殖を制限するシグナルに関係なく増殖するようになります。足場非依存性の増殖をモニターするためには、従来から軟寒天コロニー形成試験が用いられてきましたが、細胞の増殖に3〜4週間かかり、その後、マニュアルで細胞の数を数えなければなりません。
本製品は面倒なマニュアルによる細胞のカウントをなくし、ハイスループットのDrug Screeningを可能にし、形質転換した細胞を、その後の解析のために回収できるという利点を持っています。また、不均一な腫瘍塊から、クローン原性の癌細胞と、通常細胞を分離することも可能になります。また、6〜8日という短い培養期間ですので、癌遺伝子もしくはsiRNAが一過性に導入された細胞の評価も可能です。

特長

  • コロニーカウント不要
  • 3〜4週間の培養期間をたった1週間に短縮!
  • ハイスループットフォーマット
  • 定量的で、正確な分析が可能
  • 細胞リカバリー可能:次の解析のために形質転換した細胞を回収
    (細胞リカバリー対応キットのみ)

構成内容

【CytoSelect™ 96well Cell Transformation Assay Kit(品番:CBA-130(-5))】
  • CytoSelect™ 寒天パウダー
  • 寒天溶解液
  • DMEM(5×)
  • Lysisバッファー(8×)
  • CyQuant® GR Dye
【CytoSelect™ 96well Cell Transformation Assay Kit(Cell Recovery Compatible)(品番:CBA-135(-5))】
  • CytoSelect™ 寒天マトリックス溶液(10×)
  • CytoSelect™ マトリックス希釈液
  • DMEM(5×)
  • マトリックス溶解液(10×)
  • 界面活性剤溶液
  • MTT溶液
【CytoSelect™ 96well Cell Transformation Assay Kit(Cell Recovery Compatible)(品番:CBA-140(-5))】
  • CytoSelect™ 寒天マトリックス溶液(10×)
  • CytoSelect™ マトリックス希釈液
  • DMEM(5×)
  • マトリックス溶解液(10×)
  • Lysisバッファー(4×)
  • CyQuant® GR Dye
【CytoSelect™ 384well Cell Transformation Assay Kit(品番:CBA-145(-5))】
  • CytoSelect™ 寒天マトリックス溶液(10×)
  • CytoSelect™ マトリックス希釈液
  • DMEM(5×)
  • Lysisバッファー(5×)
  • CyQuant® GR Dye

※CyQuant® GR DyeはMolecular Probes(Life Technologies)社の商標です。

アッセイ原理

CBL_CBA130_3.jpg
図1 アッセイ原理

使用例


図2 CytoSelect™ 96-well Cell Transformation Assay(品番:CBA-130)
HeLa及びNIH3T3細胞を様々な濃度で6日間培養。形質転換したコロニーをアッセイプロトコールにしたがって定量。

参考文献

CBA-130の引用文献


 1.Dennis, M. et al. (2012). Snail Controls the Mesenchymal Phenotype and Drives Erlotinib Resistance in Oral Epithelial and Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Cells. Otolaryngology--Head and Neck Surgery. 147: 726-732.


2.Tan, X. et al. (2012). cAMP Response Element-Binding Protein Promotes Gliomagenesis by Modulating the Expression of Oncogenic MicroRNA-23a. PNAS. 109: 15805-15810.


3.Maccario, C. et al. (2012).The Resveratrol Analog 4,4'-Dihydroxy-Trans-Stilbene Suppresses Transformation in Normal Mouse Fibroblasts and Inhibits Proliferation and Invasion of Human Breast Cancer Cells. Carcinogenesis. 10.1093/carcin/bgs244.


4.Inami, Y. et al. (2011). Persistent Activation of Nrf2 through p62 in Hepatocellular Carcinoma Cells. J. Cell Biol. 10.1083/jcb.201102031.


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6.Faoro, L. et al. (2010). EphA2 Mutation in Lung Squamous Cell Carcinoma Promotes Increased Cell Survival, Cell Invasion, Focal Adhesions, and Mammalian Target of Rapamycin Activation. J. Biol. Chem. 285:18575-18585.


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13.Kang, M-I. et al. (2009). A selective small-molecule nuclear factor-kB inhibitor from a high-throughput cell-based assay for "activator protein-1 hits". Mol. Cancer Ther. 8:571-581.


14.Lee, K.B. et al. (2008). Low energy proton beam induces tumor cell apoptosis through reactive oxygen species and activation of caspases. Exp. and Mol. Medicine 40(1):118-129.


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17.Gazin, C. et al. (2007). An elaborate pathway required for Ras-mediated epigenetic silencing. Nature449  (7165):1073-1077


 


CBA-135の引用文献


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2.Lee, H.J. et al. (2012). Chemokine (C-X-C Motif) Ligand 12 Is Associated with Gallbladder Carcinoma Progression and Is a Novel Independent Poor Prognostic Factor. Clin. Cancer. Res. 18:3270-3280 (#CBA-135).


3.Chapeau, E.A. et al.(2012).Ecotopic Viral Integration Site 1 (EVI1) Regulates Multiple Cellular Processes Important for Cancer and is a Synergistic Partner for FOS Protein in Invasive Tumors. Proc Natl Acad Sci 109:2168-2173.(#CBA-135)


4.Lim, S.K. et al. (2011). Tyrosine Phosphorylation of Transcriptional Coactivator WW-Domain Binding Protein 2 Regulates Estrogen Receptor a Function in Breast Cancer via the Wnt Pathway. FASEB J. 25:3004-3018. (#CBA-135)


5.Mathew, B. et al. (2011). The Novel Role of the Mu Opioid Receptor in Lung Cancer Progression: A Laboratory Investigation. Anesth. Analg. 112:558-567 (#CBA-135).


6.Hirata, H. et al. (2010). Role of secreted Frizzled-related protein3 in Human Renal Cell Carcinoma. Cancer Res. 70:1896-1905 (#CBA-135).


7.Xie, G. et al. (2009). Acetylcholine-Induced Activation of M3 Muscarinic Receptors Stimulates Robust Matrix Metalloproteinase Gene Expression in Human Colon Cancer Cells. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 296:G755-G763 (#CBA-135).


8.Hirata, H. et al. (2009). Wnt Antagonist Gene DKK2 is Epigenetically Silenced and Inhibits Renal Cancer Progression through Apoptotic and Cell Cycle Pathways. Clin. Cancer Res. 15:5678-5687 (#CBA-135).


9.Ke, X-S. et al. (2008). Epithelial to Mesenchymal Transition of a Primary Prostate Cell Line With Switches of Cell Adhesion Modules but Without Malignant Transformation. PLoS One 3(10):e3368 (#CBA-135).

CytoSelect™ 96-well 悪性形質転換アッセイ〜軟寒天コロニー形成試験キット〜

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