COVID-19研究用　血中の抗体検出に ELISA Path: Total Antibody (SARS-CoV-2, RBD)

血漿、血清中の抗 SARS-CoV-2 抗体を定量的に測定するELISAキットです。ブリッジ技術を用いて、SARS-CoV-2 受容体結合ドメイン(RBD)に対する免疫グロブリン IgG、IgA、IgMを特異的に検出します。

本ELISAキットは、COVID-19回復期ならびに陰性のヒト血漿、血清サンプルでの測定で検証済です。また、カニクイザル、アカゲザル、マウス、ラット、ネコ、ウシ、イヌ、ウサギ、ブタなどの健常血漿、血清サンプルの分析では、全てカットオフ以下となる結果が得られています。

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

アッセイ原理

図1 ブリッジ技術を用いたSARS-CoV-2 RBD Antibody
ELISAアッセイ原理

まず、ELISAプレートをStrep-Tactin® XT*でコートし（一晩）、ブロッキング後にサンプルとRBDブリッジ混合液を加えます。RBDブリッジ混合液には、Twin-Strep-tag® 付きリコンビナントRBDと、WASP ペプチドタグ付きリコンビナントRBDの二種類が含まれています。図1のように、RBD特異的な抗体の片方のアームにRBD-Twin-Strep-tag®が結合し、もう一方にはRBD-WASPタグが結合することで、ブリッジが形成されます。そしてRBDのTwin-Strep-tag 部分がプレート上のStrep-Tactin® XTと結合することで、ブリッジ複合体を捕捉します。 捕捉された複合体はAnti-WASP-HRP、TMB基質を添加することで検出します。硫酸で発色反応を停止した後、ELISAプレートリーダーにて光学密度を測定します。

*この製品に含まれている Strep-Tactin® XT タンパク質は、IBA GmbH社により製造されており、研究用および商用としてのご利用のために提供されます。商用利用の場合には、Twin-Strep-tagの商用利用ライセンスを所有する企業に限られています。商用利用ライセンスに関する情報は、IBA GmbH社へのお問い合わせが必要となります。

IgA（免疫グロブリンA）

血清中に存在する総Ig分子のわずか10~15％程度ですが、分泌物や消化管、尿生殖路中では多くを割合を占めるIgアイソタイプです。分泌物中で発見されたIgＡ（分泌型IgA または sIgA）は、通常、J鎖によって2つのIgA分子が結合した二量体です。分泌型IgAは、多くの病原体の侵入領域となる粘膜表面にある最も重要なIgアイソタイプです。

IgG（免疫グロブリンG）

血清中に最も豊富なIgアイソタイプであり、血清免疫イムノグロブリンの約80%を占めています。ヒトでは、4種のサブクラスIgGが存在し、IgG1,、IgG2、 IgG3、 IgG4の順で血清中濃度が高いです。 マウスではIgG1、IgG2a/c、IgG2b、IgG3のサブクラスで定義されています。IgG分子は二つの重鎖、二つの軽鎖（κまたはλ）で構成されており、抗原と結合する二つのアームを持っています。一般的な抗原への免疫応答では、IgM による初期応答の次に、IgG抗体の高発現が誘導されます。

IgM (免疫グロブリンM)

B細胞の表面上で単量体で発見されましたが、形質細胞から分泌されるIgM分子は五量体であり、J鎖によって五つのIgM分子が結合しています。IgMは血清中の総Ig濃度の約10%を構成しています。IgMは一般的な免疫応答で最初に誘導される抗体アイソタイプですが、抗原に対する親和性は最も低いアイソタイプです。しかしながら五量体構造をとるため、IgMは10つの抗原結合部位があり、表面結合抗原のような結合にもかかわらず、非常に高い結合力を持ちます。

• 測定可能なサンプル：血漿、血清
• 測定可能な動物種：種問わず　※ヒトのみ検証済
• 特異性： Negative Percent Agreement (NPA) 100% (51/51) ※ n=51
• RBDをターゲットとすることで、SARS-CoV-2以外のコロナウイルスとの相同性が低く、交差反応のリスクが最小限です。
• 感度：Positive Percent Agreement (PPA) 100% (72/72) ※ n=72
• ブリッジ技術の採用によりサンプル中の抗体と可溶性RBD抗原との高親和性結合が見込まれ、感度が向上します。

• Strep-Tactin®XT
• コーティングバッファー
• 希釈バッファー
• RBD-bridge 混合液
• anti-WASP-HRP
• 基質 (TMB)
• 停止液
• 洗浄バッファー（濃縮）
• ストリップタイプELISAプレート (コートなし)

図2

Mabtech社 COVID-19研究用 製品シリーズ一覧

【T細胞 免疫応答関連】

• SARS-CoV-2 scanning pool / defined peptide pool
  SARS-CoV-2 に由来するT 細胞応答を誘導する細胞刺激用ペプチドプールです。
• ELISpot Path/FluoroSpot Path: ヒト IFN-γ/IL-2/Granzyme B キット(SARS-CoV-2ペプチドプール付)
  SARS-CoV-2 ペプチドに対する免疫応答により細胞から分泌されるIFN-γやIL-2、グランザイムB を検出するキットです。

【B細胞 免疫応答関連】

• ELISpot Path: Human IgG (SARS-CoV-2, RBD)
• FluoroSpot Path: Human IgG (SARS-CoV-2, Spike/RBD)
• ELISA Path: Total Antibody (SARS-CoV-2, RBD)
  SARS-CoV-2のスパイクタンパク質またはレセプター結合ドメイン (RBD) に特異的な抗体を分泌するB細胞の検出するキットです。

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