COVID-19研究用|ターゲット抗体を分泌する細胞を高感度検出 FluoroSpot Path: Human IgG (SARS-CoV-2, Spike/RBD)

SARS-CoV-2のスパイクタンパク質またはレセプター結合ドメイン (RBD) に特異的な抗体を分泌するB細胞のみを蛍光法にて高感度にカウントするアッセイキットです。また、使用する抗体などを変えることで、IgG（総IgG）を分泌する全ての細胞のカウントも可能です。

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

アッセイ原理

図1. アッセイ原理

IgG（免疫グロブリンG）

血清中に最も豊富なIgアイソタイプであり、血清免疫イムノグロブリンの約80%を占めています。ヒトでは、4種のサブクラスIgGが存在し、IgG1,、IgG2、 IgG3、 IgG4の順で血清中濃度が高いです。 マウスではIgG1、IgG2a/c、IgG2b、IgG3のサブクラスで定義されています。IgG分子は二つの重鎖、二つの軽鎖（κまたはλ）で構成されており、抗原と結合する二つのアームを持っています。一般的な抗原への免疫応答では、IgM による初期応答の次に、IgG抗体の高発現が誘導されます。

• RBD または Spike 特異的IgG スポット検出用：
• WASP タグ付きリコンビナントRBD または / かつ GAL タグ付きリコンビナントSpike
• 蛍光標識抗WASP 抗体 または 蛍光標識抗GAL 抗体
• 総IgGスポット検出用：
• 蛍光標識モノクローナル抗体
• 共通試薬など：
• R848
• ヒト リコンビナントIL-2
• 再構成用バッファー
• 蛍光エンハンサー
• 抗体コート済プレート

※メモリー細胞をご使用の場合、Mabtech社では R848 + recombinant human IL-2にて事前に刺激処理をすることを推奨しています。

図2. Human IgG SARS-CoV-2 RBD FluoroSpot 画像
COVID-19回復期の患者由来のPBMCをR848+IL-2存在下のチューブ内で3日間インキュベートした（メモリーB細胞の刺激処理）。細胞を洗浄後、抗 ヒト IgG モノクローナル抗体をコート済のFluoroSpotプレートに200,000 cells/wellとなるように添加した。RBD特異的なスポットは、WASPタグ付きのリコンビナントRBDタンパク質や抗 WASP-640を用いて検出された。スポットの分析には、Mabtech社IRISを使用した。

図3.Human IgG SARS-CoV-2 Spike/RBD FluoroSpot 画像
COVID-19 回復期患者由来のヒトPBMC をR848+IL-2 と共にチューブ内で3 日間インキュベートしてメモリーB 細胞を刺激した。細胞を十分に洗浄し、抗ヒトIgG マウスモノクローナル抗体コート済のFluoroSpot プレートに細胞（250,000 cells/well)を添加した。スパイクタンパク特異的なIgGスポットをGALペプチドタグを有するリコンビナントスパイクタンパク質と抗GAL-490 を用いて検出し、RBD 特異的なスポットをWASP ペプチドタグを有するリコンビナント抗WASP-640 を用いて検出した各スポットはMabtech 社IRISを用いてFluoroSpot（品番：FSP-05R-RS1-1）により分析した。

Mabtech社 COVID-19研究用 製品シリーズ一覧

【T細胞 免疫応答関連】

• SARS-CoV-2 scanning pool / defined peptide pool
  SARS-CoV-2 に由来するT 細胞応答を誘導する細胞刺激用ペプチドプールです。
• ELISpot Path/FluoroSpot Path: ヒト IFN-γ/IL-2/Granzyme B キット(SARS-CoV-2ペプチドプール付)
  SARS-CoV-2 ペプチドに対する免疫応答により細胞から分泌されるIFN-γやIL-2、グランザイムB を検出するキットです。

【B細胞 免疫応答関連】

• ELISpot Path: Human IgG (SARS-CoV-2, RBD)
• FluoroSpot Path: Human IgG (SARS-CoV-2, Spike/RBD)
• ELISA Path: Total Antibody (SARS-CoV-2, RBD)
  SARS-CoV-2のスパイクタンパク質またはレセプター結合ドメイン (RBD) に特異的な抗体を分泌するB細胞の検出するキットです。

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