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商品情報

記事ID : 41445
研究用

COVID-19研究用|ターゲット抗体を分泌する細胞を高感度検出 FluoroSpot Path: Human IgG (SARS-CoV-2, Spike/RBD)

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SARS-CoV-2のスパイクタンパク質またはレセプター結合ドメイン (RBD) に特異的な抗体を分泌するB細胞のみを蛍光法にて高感度にカウントするアッセイキットです。また、使用する抗体などを変えることで、IgG(総IgG)を分泌する全ての細胞のカウントも可能です。

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

背景

アッセイ原理

MAB_FSP05RR11_01.png
図1. アッセイ原理

IgG(免疫グロブリンG)

血清中に最も豊富なIgアイソタイプであり、血清免疫イムノグロブリンの約80%を占めています。ヒトでは、4種のサブクラスIgGが存在し、IgG1,、IgG2、 IgG3、 IgG4の順で血清中濃度が高いです。 マウスではIgG1、IgG2a/c、IgG2b、IgG3のサブクラスで定義されています。IgG分子は二つの重鎖、二つの軽鎖(κまたはλ)で構成されており、抗原と結合する二つのアームを持っています。一般的な抗原への免疫応答では、IgM による初期応答の次に、IgG抗体の高発現が誘導されます。

構成内容

  • RBD または Spike 特異的IgG スポット検出用:
    • WASP タグ付きリコンビナントRBD または / かつ GAL タグ付きリコンビナントSpike
    • 蛍光標識抗WASP 抗体 または 蛍光標識抗GAL 抗体
  • 総IgGスポット検出用:
    • 蛍光標識モノクローナル抗体
  • 共通試薬など:
    • R848
    • ヒト リコンビナントIL-2
    • 再構成用バッファー
    • 蛍光エンハンサー
    • 抗体コート済プレート

※メモリー細胞をご使用の場合、Mabtech社では R848 + recombinant human IL-2にて事前に刺激処理をすることを推奨しています。

製品使用例

MAB_FSP05RR11_01_02.jpg

図2. Human IgG SARS-CoV-2 RBD FluoroSpot 画像
COVID-19回復期の患者由来のPBMCをR848+IL-2存在下のチューブ内で3日間インキュベートした(メモリーB細胞の刺激処理)。細胞を洗浄後、抗 ヒト IgG モノクローナル抗体をコート済のFluoroSpotプレートに200,000 cells/wellとなるように添加した。RBD特異的なスポットは、WASPタグ付きのリコンビナントRBDタンパク質や抗 WASP-640を用いて検出された。スポットの分析には、Mabtech社IRISを使用した。

 
MAB_FSP05RR11_03

図3.Human IgG SARS-CoV-2 Spike/RBD FluoroSpot 画像
COVID-19 回復期患者由来のヒトPBMC をR848+IL-2 と共にチューブ内で3 日間インキュベートしてメモリーB 細胞を刺激した。細胞を十分に洗浄し、抗ヒトIgG マウスモノクローナル抗体コート済のFluoroSpot プレートに細胞(250,000 cells/well)を添加した。スパイクタンパク特異的なIgGスポットをGALペプチドタグを有するリコンビナントスパイクタンパク質と抗GAL-490 を用いて検出し、RBD 特異的なスポットをWASP ペプチドタグを有するリコンビナント抗WASP-640 を用いて検出した各スポットはMabtech 社IRISを用いてFluoroSpot(品番:FSP-05R-RS1-1)により分析した。

FluoroSpot Path: IgG

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
FluoroSpot Path: IgG (SARS-CoV-2, RBD), Human詳細データ MAB FSP-05R-R1-1 1 KIT
[1 plate]
¥183,000
FluoroSpot Path: IgG (SARS-CoV-2, Spike), Human詳細データ MAB FSP-05R-S1-1 1 KIT
[1 plate]
¥183,000
FluoroSpot Path: IgG (SARS-CoV-2, Spike/RBD), Human詳細データ MAB FSP-05R-RS1-1 1 KIT
[1 plate]
¥220,000
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