Small RNA-Seq Library Prep Kit

Small RNA-Seq Library Prep Kit は、total RNA や豊富なsmall RNA からイルミナ社シーケンサー用ライブラリを、5 時間以内で簡単に調整できます。遺伝子発現制御において重要な役割を担っているとされるmicroRNA やsmall interfering RNA 等のsmall RNA のプロファイリングが可能です。

• 5 時間以内でライブラリ調製が可能
• RNA 必要量は50 pg から（適応範囲は50 pg - 1,000 ng）
• 血漿、血清、尿のようなRNA 含量の低い検体にも対応
• i7 インデックスにより96 サンプルまでマルチプレックス解析が可能
　
• TraPR small RNA 単離キットと併用可能

ライブラリ作製は、total RNA やsmall RNA の3' 末端側と5' 末端側にアダプターを付ける事（ライゲーション）をベースにしています。両末端（5' 末端と3' 末端）にアダプターを付加したRNA をもとにcDNA を合成し、PCR ステップでi7 インデックスを付加します。これにより、マルチプレックス解析が可能になります。多くの場合、特に試料RNA にmicroRNA が多く含まれる場合、作製したライブラリはイルミナ社シーケンサーにそのままご使用いただけます。一方、リンカー同士の結合産物（ダイマー等）の除去や、total RNAライブラリからsmall RNA ライブラリを分けたい場合は、Lexogen 社の磁気ビーズによる精製モジュールをご利用いただけます。

図.1 Small RNA-Seq ライブラリ作製のワークフロー

Small RNA-Seq Kit は少量のRNA で、microRNA 発現解析のためのライブラリ作製が可能です（図2）。高感度な検出により、血漿、血清、尿等のリキッドバイオプシー（エクソソーム含む）のようなRNA含量の低い検体での解析に適しています。加えて、本キットは、異なるインプット量やサンプル間でも高い再現性と相関性を示します（図3）。

図.2 Lexogen 社Small RNA-Seq Kit は少量のRNA から多くのmicroRNAの検出が可能
個別に作製した4 つのライブラリにおいて、各ライブラリで検出されたmicroRNA の総数。精製した血漿RNA（6 pg、60 pg、600 pg）を用いて、4 社のライブラリ作製キットでライブラリを作製した。各ライブラリを等しいモル濃度、1.5 - 2 M Total Raw Reads でシーケンス解析した。Lexogen社ライブラリ作製キットは全ての試験区、5 Raw Reads 以上で、非常に多くのmicroRNA を検出した。

図.3
a）サンプル間の高い相関性：精製した血漿RNA の各濃度（60 pg、600 pg）、RPM（Reads per Million）で、サンプル間で高い相関性を示した。
b）濃度間の高い相関性：精製した血漿RNA の濃度間（60 pg、600 pg）で高い相関性を示した。

• Reagent box
• Purification Columns / Collection Tubes
• Small RNA i7 Index Plateまたはプライマー（キットサイズにより異なります）
• Purification Module with Magnetic Beads

• HiSeq 2000/2500/3000/4000
• NextSeq 500/550
• MiSeq
• MiniSeq
• Genome Analyzer

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