CytoSelect™ 細胞接着アッセイキット

 商品情報 CytoSelect™ 細胞接着アッセイ

Cell Biolabs（セルバイオラボ）社のCytoSelect™ Cell Adhesion Assay Kitはフィブロネクチンコート済み48ウェルプレート（プレートレイアウト参照）を利用しています。まず細胞をコートした基質の上に播き、接着細胞を接着させます。次に、非接着性細胞を洗浄除去し、比色定量の場合（品番：CBA-050、CBA-052、CBA-056、CBA-058、CBA-060、CBA-070）は、接着細胞を固定/染色し、染色物を抽出した後、比色定量します。蛍光定量の場合（品番：CBA-051、CBA-053、CBA-057、CBA-059、CBA-061、CBA-071）は、接着細胞を溶解してCyQuant® GRDyeで検出・定量します。

1. 細胞培養培地
2. 無血清培地（例えば、0.5% BSA・2 mM CaCl₂・2 mM MgCl₂を含むDMEM）
3. 細胞培養インキュベーター（37℃、5% CO₂）
4. 光学顕微鏡
5. 96ウェルマイクロタイタープレート（品番：CBA-050、CBA-052、CBA-056、CBA-058、CBA-060、CBA-070の場合）、蛍光プレートリーダーに適した 96ウェルプレート（品番：CBA-051、CBA-053、CBA-057、CBA-059、CBA-061、CBA-071の場合）
6. マイクロタイタープレートリーダー（品番：CBA-050、CBA-052、CBA-056、CBA-058、CBA-060、CBA-070の場合）、蛍光プレートリーダー（品番：CBA-051、CBA-053、CBA-057、CBA-059、CBA-061、CBA-071の場合）

3-1. 品番：CBA-050、CBA-051、CBA-052、CBA-053、CBA-056、CBA-057、CBA-058、CBA-059、CBA-060、CBA-061、CBA-070、CBA-071共通

1. 滅菌条件下でマトリックスコート済み接着プレートを10分間室温に置き、室温に戻しておきます。
2. 無血清培地に0.1〜1.0×10⁶ cells/mLを入れ、細胞懸濁液を準備します。細胞接着阻害もしくは刺激薬剤を細胞懸濁液に直接加えます。
3. 細胞懸濁液150μLずつ、ウェルに加えます（BSAコートのウェルはネガティブコントロール用）。
4. 30〜90分間インキュベーションします。
5. 注意しながら各ウェルから培地を吸引あるいは廃棄します（NOTE：ウェルを乾燥させないこと）。各ウェルをPBS 250μLで4-5回穏やかに洗浄します。

3-2-1. 品番：CBA-050、CBA-052、CBA-056、CBA-058、CBA-060、CBA-070共通

6. PBSを各ウェルから吸引除去し、細胞染色溶液を200μLずつ加えます。室温で10分間おきます。
7. 細胞染色溶液をウェルから廃棄あるいは吸引除去します。各ウェルを脱イオン水500μLで4-5回穏やかに洗浄します。
8. 最後の洗浄液を廃棄し、ウェルを乾燥させます。
9. 抽出溶液200μLを各ウェルに加え、10分間オービタルシェーカーで振盪させながらインキュベーションします。
10. 96ウェルマイクロタイタープレートに各サンプル150μLを移し、プレートリーダー（OD560nm）で測定します。

3-2-2. 品番：CBA-051、CBA-053、CBA-057、CBA-059、CBA-061、CBA-071共通

6. 十分量の1×溶解バッファー/CyQuant® GR Dye（300：1に希釈）を調製します。（例えば、dye 5μLを1X溶解バ ッファー1495μLと混合）。
7. 1×溶解バッファー/CyQuant® GR Dye溶液200μLを、細胞が入った各ウェルに加えます。室温で20分間振盪させながらおきます。
8. 蛍光測定用の96ウェルプレートに各サンプル150μLを移します。蛍光プレートリーダー（480nm/520nm）で測定しま す。