商品情報 CytoSelect™ 細胞遊走アッセイ
（品番CBA-100）
技術情報
セルバイオラボ社 セルベースアッセイプロトコール
1. キット以外に必要な試薬・機器
- 遊走細胞株
- 細胞培養培地
- 無血清培地（例えば、0.5% BSA・2 mM CaCl2・2 mM MgCl2を含むDMEM）
- 細胞培養インキュベーター（37℃、5% CO2）
- 光学顕微鏡
- 96ウェルマイクロタイタープレート
- マイクロタイタープレートリーダー
2. アッセイプロトコール
- 滅菌条件下で、24ウェル遊走プレートを10分間室温に置き、室温に戻しておきます。
- 無血清培地に0.5〜1.0×106 cells/mLを入れ、細胞懸濁液を準備します。細胞遊走阻害もしくは刺激薬剤を細胞懸濁液に直接加えます。
（NOTE： アッセイを行う前24時間飢餓状態にしておいた方がよいでしょう。） - 遊走プレートの下層ウェルに評価する化学誘因物質もしくは 10% FBSを含む培地を500μL加えます。
- インサートに細胞懸濁液を300μLを加えます。
- プレートをカバーし、2〜24時間インキュベーションします。
- 注意しながらインサートから培地を吸引除去します。綿棒を使ってインサートの内側から非遊走細胞をやさしく除去します。その際、ポリカーボネート膜に穴をあけないように注意し、丁寧に内側周辺の細胞を除去してください。
- 24ウェル遊走プレートの何も入っていないウェルに細胞剥離溶液400μLを入れておきます。
- インサートをステップ7で用意した細胞剥離溶液が入ったウェルに移し、室温に10分間おきます。
- ビーカーにはった水で染色されたインサートを丁寧に何回か洗浄します。インサートを空気乾燥させます。
- （オプション）高倍率にした光学顕微鏡で少なくとも任意3箇所のフィールドについて遊走細胞数を数えます。
- 空のウェルに各インサートを移し、1ウェルあたり抽出溶液200μLを加えます。オービタルシェーカーで振とうさせながら10分間インキュベーションします。
- 96ウェルマイクロタイタープレートに各サンプル100μLを移し、プレートリーダー（OD560nm）で測定します。
商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては
使用しないように、十分ご注意ください。
