RNA修飾の1つ、5-ヒドロキシメチルシチジン（5-hmrC）を検出 5-Hydroxymethylcytidine 抗体

5-Hydroxymethylcytidine 抗体（anti 5-Hydroxymethylcytidine antibody）は、5-Hydroxymethylcytidine（5-ヒドロキシメチルシチジン、5-hmrC）を検出するマウスモノクローナル抗体です。

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5-Hydroxymethylcytidineとは?

エピジェネティクスで重要なDNA修飾である5-メチルシトシン（5-methylcytosine、5mC）は、DNAメチルトランスフェラーゼ酵素を介してDNA中のシトシン（cytosine、C）がメチル化（メチル基（-CH3）の付加）されることによって生じます［PMID：16403636 ］。5-メチルシトシン（5mC）は、DNAの脱メチル化で重要な水酸化酵素であるTET（ten eleven translocation） ファミリー酵素によって、5-ヒドロキシメチルシトシン（5-hydroxymethylcytosine、5hmC）に酸化・変換されます［PMID：21778364 ］。5-メチルシトシン（5mC）から5-ヒドロキシメチルシトシン（5hmC）への酸化反応は、哺乳類におけるエピジェネティック調節で重要な役割を果たすことが示唆されています［PMID：25411882 ］。

一方RNAでは、これまでに百種類以上のRNA修飾が特徴付けされており、RNAの安定性や機能調節に重要であることが示されています［PMID：32210357 ］。RNA中には修飾リボヌクレオシドの1つとして5-メチルシチジン（5-methylcytidine、5-mrC）が存在することが知られています。先述のTET酵素は、5-メチルシチジン（5-mrC）を5-ヒドロキシメチルシチジン（5-hydroxymethylcytidine、5-hmrC）に変換する触媒活性も示すことが報告されています［PMID：25073028 ］。また、5-メチルシチジン（5-mrC）は、5-ヒドロキシメチルシチジン（5-hmrC）に続いて、5-ホルミルシチジン（5-formylcytidine、5fC）へ酸化代謝される可能性が示されています［PMID：25676849 ］。

5-ヒドロキシメチルシチジン（5-hmrC）は、生物界の3つのドメイン（古細菌ドメイン、細菌ドメイン、真核生物ドメイン）に由来するトータルRNA、および哺乳類細胞由来のポリA濃縮RNA画分において検出されており、5-メチルシチジン（5-mrC）から5-ヒドロキシメチルシチジン（5-hmrC）への酸化反応は細胞内で重要な機能／保存されたプロセスである可能性が示唆されています［PMID：25676849 ］。本抗体（品番：68579-1-IG）は、5-Hydroxymethylcytidine（CAS RN®：19235-17-7）に対して作製されたマウスモノクローナル抗体であり、ELISAアッセイやドットブロットによる5-Hydroxymethylcytidineの検出実験に利用できます。

■ Proteintech Group（プロテインテック）とは?

Proteintech Group, Inc.（プロテインテック）社は、2001年に設立された抗体製造メーカーです。現在までに、米国本社の他、英国、中国、ドイツ、フランス、シンガポール等で支社を展開し、各国で様々なマーカー抗体、タンパク質研究用試薬を供給しています。国内におけるテクニカルサポート等は、2016年より株式会社プロテインテック・ジャパン（www.ptglab.co.jp ）が担当しています。

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プロテインテックは「日本で成長している抗体サプライヤー」

プロテインテックとChromoTek（クロモテック、ドイツ）は、引用数ランキング付の抗体検索サイトを運営する英国「CiteAb 」が主催の「2022 CiteAb Awards」において「Researchers' choice（研究者の選択）」部門と「Environmental Initiative of the Year（今年の環境イニシアチブ）」部門でそれぞれ受賞者として選出されました。優れた品質およびカスタマーサービス、環境への取り組みが高く評価されています。

また「Which suppliers should you watch in the Japanese antibody market?（日本の抗体市場で注目すべきサプライヤーは?）」のブログ記事で、近年発表された論文中の製品引用数を根拠にプロテインテックが「日本で成長している抗体サプライヤー」として「注目に値するシェアの拡大・急上昇」を見せていると言及されています。以下のリンクから、プロテインテックの主なカテゴリー製品をご覧いただけます。

抗体&免疫アッセイ サイトカイン・増殖因子 ChromoTek 試薬 

 

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■ 5-Hydroxymethylcytidine モノクローナル抗体（品番：68579-1-Ig）

図1
Indirect ELISA and competitive ELISA results show that this antibody is specific to 5-Hydroxymethylcytidine (hm5C). Indirect ELISA was performed by coating BSA conjugated 5-Hydroxymethylcytidine (hm5C) at 10ng/well followed by blocking with 1% BSA. Serial diluted primary antibody was added to the plates and incubated at 37℃. HRP-goat anti-mouse was used for detection. Competitive ELISA was performed similarly except that different concentration of 5-Hydroxymethylcytidine (hm5C) or its structure analogue compounds are mixed in primary antibody (fixed at 10 ng/mL).

図2
Total RNA was isolated from HeLa cell line and was dotted to NC membrane at different amount as indicated above the dots. The membrane was blocked with BSA and blotted with 5-Hydroxymethylcytidine (hm5C) antibody 68579-1-Ig at 1:5000 followed by incubation of HRP-goat anti-mouse secondary antibody. Signal was developed by ECL substrate. A parallel dot blot was performed using mouse IgG1 isotype control antibody 66360-1-Ig at the same dose.

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