希釈済みの抗体ボトル入り！すぐに使える免疫組織化学染色キット IHCeasy（IHCイージー）キット

本商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

免疫組織化学（IHC：Immunohistochemistry）とは、特定の生体分子（主にタンパク質）に対する特異的抗体を用いて、組織サンプル中の標的分子を検出および視覚化するための実験手法です。生命科学研究では機能未知タンパク質の解析やマーカータンパク質の検出による組織構造の特定等を目的として利用されます。この実験手法により、特定タンパク質の各器官での発現の有無、シグナル強度、その分布や局在を明らかにすることができます。病理学分野ではがん等の疾患に関連するタンパク質、細胞種マーカー／細胞増殖マーカー等を検出することによって、がんの原発部位や転移部位の特定や評価、様々な疾患の診断や予後予測のために広く利用されています。

免疫組織化学（IHC）は、主にホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）組織切片または凍結組織切片を対象にして行われます。その際、保存が容易であるという利点があるホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）組織切片でより一般的に実施されます。

免疫組織化学（IHC）染色時の一連のステップは（1）組織サンプルの調製、（2）抗原賦活化、（3）一次抗体の添加、（4）二次抗体の添加、（5）発色試薬の添加／対比染色に分かれます。

（1）組織サンプルの調製

外科的に採取された組織サンプルを速やかにホルマリン等で固定（Fixation）し、その後、脱水／透徹を行い、パラフィンに包埋します（Paraffin Embedding）。パラフィン包埋ブロックはミクロトームを用いて厚さ数µm程度に薄切され、ホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）組織切片が作製されます。
免疫組織化学（IHC）染色を実施する場合、キシレンとエタノール希釈系列を用いてホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）組織切片の脱パラフィンおよび再水和（Deparaffinization&Rehydration）を行います。

（2）抗原賦活化

免疫組織化学（IHC）染色の実験手順には、固定によってマスクされたエピトープ（抗体反応部位）を再露出させるための「抗原賦活化（Antigen Retrieval）」工程が一般的に含まれています。抗原賦活化法として主に熱処理法（HIER：Heat-Induced Epitope Retrieval）またはタンパク質分解酵素処理法（PIER：Proteolytic Induced Epitope Retrieval）が利用されます。例えばTris-EDTA抗原賦活化バッファー（pH 9.0）にFFPE組織切片スライドを浸漬し、加熱することで抗原賦活化は実施されます。

（3）一次抗体の添加

ターゲット抗原特異的なモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体が「一次抗体（Primary Antibody）」として使用されます。非特異的反応を抑制するために、ブロッキング（Blocking）を実施した組織に対して、適切な希釈倍率の一次抗体を添加します。

（4）二次抗体の添加

間接検出法の場合、未標識の一次抗体を検出するために、蛍光色素または酵素で標識済みの「二次抗体（Secondary Antibody）」を使用します。蛍光色素標識二次抗体を用いる場合、観察のために蛍光顕微鏡を必要とします。光学顕微鏡下で観察する場合、HRP（Horseradish peroxidase、ホースラディッシュペルオキシダーゼ）等の酵素標識された二次抗体を添加し、続く発色試薬の添加によって可視化を行います。

（5）発色試薬の添加／対比染色

発色検出法（Chromogenic Detection）では、HRP等の酵素活性による基質の発色を利用します。DAB等の基質を添加してインキュベーションすることによって得られた着色産物は、組織切片上の抗原分子／タンパク質に由来するシグナルとして理解されます。顕微鏡観察時に細胞核等の組織構造を明確にするため、ヘマトキシリン（HE）等による対比染色（Counterstain）も実施されます。

IHCeasy（IHCイージー）キットは、脱パラフィンおよび再水和後の組織切片サンプルに必要な全ての試薬がセットになったキットです。試薬とプロトコールが最適化済みのため、はじめてIHC染色を行う方はもちろん、短期間で再現性のある結果を必要とする方にもおすすめです。

• プロテインテックラボで最適化済みのIHCキット
• 希釈済み一次抗体／二次抗体が付属
• 抗原賦活化バッファー入り
• はじめてでも分かりやすい！イラスト付きプロトコール
• 組織サンプルに「ドロッパーボトル」から直接添加可能
• 1キットで50スライド^※を染色可能

• 抗原賦活化バッファー（50x）：100 mL
• 洗浄バッファー（20x）：100 mL x 2本
• ブロッキングバッファー：5 mL
• 一次抗体（希釈済み）：5 mL
• 二次抗体（希釈済み）：5 mL
• 発色剤成分A：0.2 mL
• 発色剤成分B：4 mL
• シグナル増強剤：5 mL
• 対比染色剤：5 mL
• 封入剤：5 mL