タンパク質分解酵素処理（PIER）法による免疫組織化学（IHC）用サンプルのエピトープ露出に有効 Proteinase K（プロテイナーゼK）抗原賦活化バッファー

Proteinase K（プロテイナーゼK）抗原賦活化バッファーは、免疫組織化学（IHC）染色実験において、パラフィン包埋（FFPE）切片サンプルの抗原賦活化（Antigen Retrieval）に使用できる抗原賦活化液です。タンパク質分解酵素処理法（PIER：Proteolytic Induced Epitope Retrieval）に基づくエピトープ（抗体反応部位）を再露出させる方法に有効です。本製品は、濃縮酵素溶液（100倍）と専用希釈液で構成されます。

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• Proteinase K（プロテイナーゼK）抗原賦活化バッファー（100倍濃縮）：0.2 mL
• 専用希釈液：20 mL

写真1. Proteinase K（プロテイナーゼK）抗原賦活化バッファー

■ 操作手順

1. 標準的方法に従って免疫組織化学（IHC）染色用の組織切片スライドを調製します。スライド上のパラフィン包埋（FFPE）切片をキシレンで脱パラフィン後、濃度を徐々に低くしたエタノール系列を使用して再水和します。
2. 組織切片スライドを洗浄バッファーを用いて洗浄します。組織切片スライドから液体を除去し、組織切片の周囲に残存する液体も吸着して取り除いてください。撥水性ペン（Hydrophobic IHC pen）を使用して組織切片周囲をマーキングし、撥水性サークルを作ります。
3. Proteinase K（プロテイナーゼK）ストック溶液（100x）に専用希釈液を加えてワーキング溶液（1x）を調製します。例えば、10 mLのワーキング溶液（1x）を調製する場合、0.1 mLのProteinase K（プロテイナーゼK）ストック溶液（100x）に対し、9.9 mLの専用希釈液を加えます。
4. 100〜150 µLのワーキング溶液（1x）をスライド上に添加後、スライドを湿潤箱（インキュベーションチャンバー）内に静置して、37℃で5〜15分間インキュベートします。その際、抗原賦活化バッファーが組織全体を覆っていることを確認してください。組織が大きい場合は、ワーキング溶液（1x）をさらに50〜100 µL程度追加します。
5. 未希釈のProteinase K（プロテイナーゼK）ストック溶液（100x）は冷凍（-20℃）で保管してください。
6. その後、標準的方法に従って免疫組織化学（IHC）染色の各ステップ（クエンチング、ブロッキング、一次抗体、二次抗体とのインキュベート、発色、対比染色、封入）を実施してください。

■ Proteinase K（プロテイナーゼK）抗原賦活化バッファーの参考資料

• ［データシート］Protease K Antigen Retrieval Buffer User Manual

■ Proteinase K 抗原賦活化バッファー（品番：PR30014）利用サンプルの免疫組織化学の例

図1
VWFウサギポリクローナル抗体（品番：27186-1-AP）を用いたヒト扁桃炎組織のIHC染色結果。タンパク質分解酵素処理法（PIER）法は、Proteinase K（プロテイナーゼK）抗原賦活化バッファー（品番：PR30014）のワーキング溶液を添加し、37℃で5分間インキュベートすることによって実施されました。

図2
ALPPマウスモノクローナル抗体（品番：60294-1-Ig）を用いたヒト悪性黒色腫（メラノーマ）組織のIHC染色結果。タンパク質分解酵素処理法（PIER）法は、Proteinase K（プロテイナーゼK）抗原賦活化バッファー（品番：PR30014）のワーキング溶液を添加し、37℃で15分間インキュベートすることによって実施されました。

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