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免疫系の研究に。ブロッキングペプチドの併用でより正確な実験ができます。抗CLEC7A/Dectin-1(細胞外領域)抗体

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メーカー名：Alomone Labs

抗CLEC7A/Dectin-1(細胞外領域)抗体は、マウス、ラットのCLEC7A/Dectin-1細胞外領域を認識し、ウェスタンブロット、免疫組織化学等に使用することができます。
CLEC7A/Dectin-1ブロッキングペプチド (抗原ペプチド。品番#BLP-LR062) を抗体溶液に添加したネガティブコントロールをおくことでより正確な実験が可能です。

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背景

CLEC7A/Dectin-1は、パターン認識受容体 (PRR) であるC型レクチンファミリーの一員である小さな膜貫通型受容体です^{(1, 2)}。真菌や酵母の細胞壁に存在する多糖類βグルカンを特異的に認識・結合することから、抗真菌免疫に関与することが明らかにされています⁽³⁾。
Dectin-1は、マクロファージ、樹状細胞、好中球に主に発現しています^{(4, 5)}。βグルカンのライゲーションにより、Dectin-1はアダプタータンパク質であるCARD9を動員して脾臓チロシンキナーゼ (Syk) をリン酸化し、これが食作用を誘導するシグナルカスケードを開始し、NF-κBとMAPK6を活性化させることが報告されています⁽⁶⁾。
マクロファージのalternative activationを誘導するサイトカインであるIL-4やIL-13で刺激すると、in vitroで4時間以内にDectin-1が上昇することから、Dectin-1 Sykを介した経路が活性化し、マクロファージのalternative activationに関与することが明らかにされています⁽⁷⁾。
さらに、活性化されたSyk経路は腎間質性線維症にも関与しており、実験的腎線維症モデルマウスでSykを抑制すると、Arginase-1 (マウスM2マクロファージマーカー) のmRNA発現が減少することにより、腎線維症の進行が抑制されることが実証されています⁽⁸⁾。

特長

商品名	抗CLEC7A/Dectin-1(細胞外領域)抗体
品番	ALR-062
タイプ	ウサギポリクローナル
交差種	マウス、ラット
アプリケーション	WB (ウェスタンブロット) 、IHC (免疫組織化学) 、IFC (フローサイトメトリー(間接法))、LCI（ライブセルイメージング）
標識	非標識
別名	C-Type Lectin Domain Family 7 Member A, Dendritic Cell-Associated C-Type Lectin 1, DC-Associated C-Type Lectin 1, Beta-Glucan Receptor, C-Type Lectin Superfamily Member 12, CLECSF12, CD369
抗原	マウス CLEC7A (Accession Q6QLQ4) のアミノ酸残基 87 - 102 に対応するペプチド (C)RNKENHKPTESSLDEK。細胞外C末端側。
抗原のホモロジー	ラット：16アミノ酸残基のうち15アミノ酸残基が同一です。ヒトサンプルには推奨致しません。
アイソタイプ	Rabbit IgG
精製方法	Affinity purified on immobilized antigen.
商品形態	凍結乾燥粉末(Lyophilized powder)
溶解方法(再構成)	25µl、50µlあるいは0.2ml (商品サイズに依ります) のdouble distilled water (DDW)に溶解ください。溶解後の溶媒はPBS, pH 7.4, 1% BSA, 0.05% NaN₃となります。
溶解後の濃度	0.8mg/mL
溶解後の保管方法	溶解後の抗体液は、4℃で1週間まで保存できます。それ以上の期間は、少量の分注物を-20℃で保存ください（凍結融解の繰り返しは避けてください）。使用前に抗体液を遠心 (10000×g 5分）してください。

適用例

ウェスタンブロット

図１．ラット脳ライセート (レーン1, 3) 、マウス脳ライセート (レーン2, 4) を用いたウェスタンブロット。
1-2: 抗CLEC7A/Dectin-1抗体 (品番#ALR-062, 1:200)
3-4: CLEC7A/Dectin-1ブロッキングペプチド（品番#BLP-LR062）とプレインキュベートした抗CLEC7A/Dectin抗体。

図２．マウスBV-2ミクログリア細胞株ライセート (レーン1, 3) 、マウスJ774マクロファージ細胞株ライセート (レーン2, 4) を用いたウェスタンブロット。
1-2: 抗CLEC7A/Dectin-1抗体 (品番#ALR-062, 1:200)
3-4: CLEC7A/Dectin-1ブロッキングペプチド（品番#BLP-LR062）とプレインキュベートした抗CLEC7A/Dectin抗体。

免疫組織化学

図３．マウス脳(海馬)におけるCLEC7A/Dectin-1の発現。
潅流固定した凍結マウス脳切片を抗CLEC7A/Dectin-1抗体 (品番#ALR-062)を用いて免疫染色を行った。二次抗体はヤギ抗ウサギ抗体-AlexaFluor488を用いた。
A. hilus(H)と外分子層 (OML) のアストロサイトにCLEC7A免疫反応 (緑) が見られた。
B. CLEC7A/Dectin-1ブロッキングペプチド (品番#BLP-LR062) と共に一次抗体をプレインキュベーションすると、染色が抑制された。
細胞核 (青) はDAPIで染色した。

図４．ラット海馬CA1領域における、CLEC7AとGFAPの染色例。
潅流固定した凍結ラット脳切片を抗CLEC7A/Dectin-1抗体 (品番#ALR-062)、及びGuinea Pig 抗GFAP抗体 (品番#AFP-001-GP)を用いて免疫染色を行った。
二次抗体はヤギ抗ウサギ抗体-AlexaFluor488、及びヤギ抗guinia pig抗体-AlexaFluor594を用いた。
A. CLEC7A免疫反応 (緑) はアストロサイトに現れた。
B. GFAP免疫反応 (赤) はアストロサイトに現れた。
C. マージ像。細胞核 (青) はDAPIで染色した。P = pyramidal layer.

フローサイトメトリー(間接法)

図５．フローサイトメトリーによる生きたマウスJ774マクロファージ細胞株の細胞表面CLEC7A/Dectin-1の検出(間接法)。
黒：細胞
赤：細胞＋ヤギ抗ウサギ抗体-FITC
緑：細胞＋抗CLEC7A/Dectin-1抗体 (品番#APR-110), 2.5µg＋ヤギ抗ウサギ抗体-FITC

参考文献

Goodridge, H.S., et al. (2011)?Nature. 472(7344): p.471-5.
Kalia, N., J. Singh, and M. Kaur, (2021) Immunobiology. 226(2), p.152071.
Brown, G.D.,et al. (2003) J Exp Med. 197(9), p.1119-24.
McDonald, J.U.,et al. (2012) PLoS One. 7(9), p.e45781.
Taylor, P.R. et al. (2002) J Immunol. 169(7), p.3876-82.
Kimura, Y., et al. (2014)?J Biol Chem. 289(45), p.31565-75.
Willment, J.A.,et al. (2003) J Immunol. 171(9), p.4569-73.
Chen, K.H.,et al. (2016) Int J Biochem Cell Biol,. 74(9), p.135-44.

抗CLEC7A/Dectin-1(細胞外領域)抗体

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Anti CLEC7A/Dectin-1 (Rabbit)	ALO	ALR-062	25 UL	￥117,000
Anti CLEC7A/Dectin-1 (Rabbit)	ALO	ALR-062	50 UL	￥136,000
Anti CLEC7A/Dectin-1 (Rabbit)	ALO	ALR-062	0.2 ML	￥156,000