記事ID ： 36006

BaseScope™ Duplex（二重染色）発色アッセイ

メーカー名：Advanced Cell Diagnostics, a brand of Bio-Techne Corporation

BaseScope™は、RNAscope™ アッセイ技術を応用した、短鎖のRNAターゲットの検出に適用可能な試薬キットです。細胞の形態を保ったまま染色が可能であり、一細胞レベルでのRNAの染色、最大2ターゲットの可視化を行うことが可能です。

特長

最大2種類のターゲットの同時染色が可能

ハウスキーピング遺伝子PPIB（緑）Polr2A（赤）の二重染色

ハウスキーピング遺伝子PPIB（緑）Polr2A（赤）の二重染色

使用例

circRNAとlinear RNA の同時検出
2つのスプライシングバリアントもしくは2つの短鎖ターゲットの同時可視化
ゲノム編集後のターゲットRNAの検出

図. ゲノム編集前後のターゲットに対する検出プローブデザイン例

プロトコル

キット＼使用サンプル	FFPE^※2	固定凍結^※1,※3	新鮮凍結^※1	培養細胞(接着細胞)^※1,※3
BaseScope™Duplex Reagent Kit	PDF	PDF	PDF	PDF

※1 これらのマニュアルはサンプルの前処理方法のみが記載されております。
　　染色の手順に関しましては「FFPE」用のマニュアルに書かれている手順を併せてご参照ください。
※2 プロトコルにスチーマーを使う記述がございますが、代替法としてこちらのヒーターと耐熱容器を使用した方法を
　　推奨させて頂いております。(サーモメーター等で温度を確認しながら実施ください)
※3 プロトコル中のRNAscopeをBaseScopeに置き換えてご使用ください。
　　BaseScopeで固定凍結切片を使用する際は「Protease Plus」を「Protease Ⅲ」に変更してアッセイを実施してください。

必要な試薬と機器

ターゲットプローブ

試薬キット
：赤色（Fast Red）と緑色（HRP-Green）の検出になります。
ポジティブコントロールプローブ
：ターゲットの動物種（human，mouse）ごとに用意がございます。
ネガティブコントロールプローブ
：各動物種共通です。
コントロールスライド
：ターゲットと同一の動物種（humanまたはmouse）をご選択下さい。
疎水性撥水ペン
必要機器
その他関連試薬

1．ターゲットプローブ

* BaseScope™ で多重染色を行う場合、異なるチャネル（C1、C2）のプローブが必要となります。

既存プローブ（メーカーデザイン済みの場合）

：Advanced Cell Diagnostics社のプローブ検索ページはこちら

プローブの検索方法はこちら

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
ターゲットプローブ（C1）	ADC	XXXXXX^＊1	1 vial (20 slide分)	￥153,000
ターゲットプローブ（C2）	ADC	XXXXXX-C2^＊1	1 vial (20 slide分)	￥153,000

*1：XXXXXX にはターゲットにより異なる任意の数字が入ります。
：既存ブローブが無い場合、プローブのカスタム作製も承ります。カスタム作製時、または既存プローブのチャネル変更時には別途でセットアップ料金がかかります。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Setup fee for New RNAscope/BaseScope/miRNAscope Probe ADC	ADC	320269	1 serv.	￥85,000

C2プローブは50倍濃縮で提供されており、通常はアッセイ時に C1プローブで希釈いたします。C1プローブを使用せずにアッセイを行う場合（例：C2プローブのみ）は、希釈液として品番：700011 の BaseScope Probe Diluent を使用する必要があります。

見積依頼

2．試薬キット／赤色（Fast Red） and 緑色（HRP-Green）

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
BaseScope^TM Duplex Reagent Kit	ADC	323800	1 KIT [for 20 slides]	￥361,000

赤色（Fast Red）と緑色（HRP-Green）の検出になります。

プローブチャネル	酵素	色
C1	HRP	Green
C2	AP	Red

【ご注意：内在性アルカリホスファターゼによるバックグラウンドについて】

発色 Duplexキットは発色反応にアルカリホスファターゼ（以下AP）も使用しております。そのため、腎臓、肝臓、胎盤などの内在性APが多く存在する組織サンプルを用いる場合では、内在性APと反応してバックグラウンドが広範囲に出てしまうことがあります。ご購入する前に、ご自身で組織サンプル中のアルカリホスファターゼ量をご確認いただき、バックグラウンドが出る恐れがある場合には蛍光キットのご利用をご検討ください。

3．ポジティブコントロールプローブ（ヒト用、マウス用）

ターゲットの動物種ごとにご用意がございます。ペア数が1のターゲットプローブを利用される際は1ZZのコントロールプローブを、ペア数が3のターゲットプローブを利用される際は3ZZのコントロールプローブをご利用ください。Control Probe Packは1ZZペア,3ZZペアのポジティブコントロールプローブ・1ZZペア,3ZZペアのネガティブコントロールプローブのセット品となります。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
BaseScope^TM Duplex Control Probe - BA-Hs-1zz (PPIBC1, POLR2A-C2)	ADC	700101	1 VIAL [for 20 slides]	お問い合わせ
BaseScope^TM Duplex Control Probe - BA-Hs-3zz (PPIBC1, POLR2A-C2)	ADC	700111	1 VIAL [for 20 slides]	￥23,000
BaseScope^TM Duplex Control Probe- Mm-1zz (PPIB-C1, Polr2a-C2)	ADC	700121	1 VIAL [for 20 slides]	￥23,000
BaseScope^TM Duplex Control Probe- Mm-3zz (PPIB-C1, Polr2a-C2)	ADC	700131	1 VIAL [for 20 slides]	￥23,000
BaseScope^TM Duplex Control Probe Pack-Hs	ADC	322981	1 PACK [for 20 slides]	￥46,000
BaseScope^TM Duplex Control Probe Pack-Mm	ADC	322982	1 PACK [for 20 slides]	￥46,000

4．ネガティブコントロールプローブ（各種共通）

ネガティブコントロールプローブは各種共通です。ペア数が1のターゲットプローブを利用される際は1ZZのコントロールプローブを、ペア数が3のターゲットプローブを利用される際は3ZZのコントロールプローブをご利用ください。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
BaseScope^TM Duplex Negative Control Probe- DapB-1ZZ	ADC	700141	1 VIAL [for 20 slides]	￥23,000
BaseScope^TM Duplex Negative Control Probe- DapB-3ZZ	ADC	700151	1 VIAL [for 20 slides]	￥23,000

5．コントロールスライド

ターゲットと同一の動物種（humanまたはmouse）をご選択ください。

ポジティブコントロールの発現が確認されている細胞ペレットのFFPE 切片です。
サンプルがヒト、マウスの FFPE 切片の時に使用します。凍結切片等の他のサンプルの場合や、ヒト、マウス以外の動物種の場合はご自身でポジティブコントロールの発現が確認されているスライドをご用意ください。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
RNAscope^TM Control Slides - Human Hela Cell Pellet, Human	ADC	310045	1 UNIT [4 slides]	￥36,000
RNAscope^TM Control Slides - Mouse 3T3 Cell Pellet, Mouse	ADC	310023	1 UNIT [4 slides]	￥36,000

6．疎水性撥水ペン

スライド上に疎水性の境界線を描けるペンです。
プローブやバッファーの流出を防ぎます。

*他社のペンは、40℃のハイブリダイゼーション反応中にバリアが溶ける場合がございますので推奨しません。

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
Hydrophobic Barrier Pen	ADC	310018	1 PC	￥15,000

7．必要機器（ハイブリダイゼーションシステム）

HybEZ™ ハイブリダイゼーションシステムは、RNAscope™ アッセイ用に開発されています。

*ADC社では、HybEZ™ ハイブリダイゼーションシステムを用いた場合のみ、RNAscope™ in situ hybridization の性能を保証しております。同システム以外のオーブンでご使用頂いた場合、結果不良の際のサポート対象外となります。
*初回ご検討用のレンタル機をご用意しております。ご予約制となりますので、ご希望の期間等、ご相談ください。

名称	HybEZ™ II Hybridization System With EZ-Batch Slide System
品番	321710
本体写真
電力定格	155W
加熱率	20分以内に常温～40℃まで加熱可
寸法(WxDxH)	28（W）×40（D）×21（H）cm
重量(kg)	9.5

オーブンに冷却機能がないため、外気温より低い温度に設定した場合、設定温度通りにはなりません。

付属品
	321710
オーブン本体	●
電源コード	●
ユーザーマニュアル	●
HybEZ™ Humidity トレイ	●
EZ-Batch™ スライドホルダー	●
EZ-Batch™ 洗浄トレイ	●
浸潤ペーパー2枚（品番310015の一部）	●

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
HybEZ^TM II Hybridization System (110v)With ACD EZ-Batch Slide System	ADC	321710	1 SYSTEM	￥920,000
HybEZ^TM 湿潤紙 / HybEZ^TM Humidifying Paper	ADC	310015	1 SET [15pack]	￥17,000

8．その他関連試薬

品名	メーカー	品番	包装	希望販売価格
BaseScope^TM Duplex Detection Reagents	ADC	323810	1 KIT [for 20 slides]	￥321,000
BaseScope Probe Diluent	ADC	700011	1 VIAL [for 20 slides]	￥21,000
RNAscope^TM Target Retrieval Reagents	ADC	322000	4*70 ML	￥21,000
RNAscope^TM Protease III & Protease IV Reagents	ADC	322340	1 KIT [for 20 slides]	￥28,000
RNAscope^TM H2O2 and Protease Reagents	ADC	322381	1 KIT [for 20 slides]	￥43,000
Vector Labs Vectamount	ADC	321584	60 ML	￥27,000