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記事ID ： 14194
研究用

高感度！培養細胞中の幅広いマイコプラズマ（Mycoplasma）種を PCR で3時間以内に検出可能
 e-Myco™ VALiD マイコプラズマ PCR 検出キット

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メーカー名：iNtRON Biotechnology, Inc.

PCR法でマイコプラズマを検出します。各PCRチューブに全ての試薬があらかじめ分注されているオールインワンシステムを採用、PCR用にテンプレートと蒸留水を加えるだけで、3時間以内にマイコプラズマのコンタミを検出できます。

e-Myco™ シリーズ
選択ガイド

背景

最近の研究では、培養細胞の30 〜 85% がマイコプラズマに感染していると報告されています。マイコプラズマのコンタミは細胞増殖速度を遅らせてしまうため、時間と予算が無駄になってしまいます。
従来のマイコプラズマのコンタミ検出には、特別なテクニックが必要でしたが、e-Myco™ VALiD キットでは、PCRを用いた簡単な操作でわずか3時間で検出することができます。

特長

  • 簡単
    キットには PCR に必要なすべての試薬が含まれています。
  • 3時間以内で検出
    従来の28日間かかる培養試験の代わりに、3時間以内で検出できます。
  • 内部コントロールと 8-MOP
    内部コントロールが含まれており、結果の有効性を評価できます。また、8-MOP により、キャリーオーバー汚染を防ぐことができます。
  • 幅広い種を検出
    一般的に細胞培養で感染するマイコプラズマ種の他、様々なマイコプラズマ種の検出が可能です。
  • 高感度で高い信頼性
    10 CFU/mL 以上のマイコプラズマを検出する高感度なPCR試験で、E.P. 2.6.7 と同様の KFDA テストガイダンスに従って検証されています。

e-Myco™ VALiD は、「e-Myco™ （品番：25235）」および「e-Myco™ Plus（品番：25237）」と比較して、下記の特長があります。
（各製品の特長については、e-Myco™ シリーズ 選択ガイドをご参照ください。）

  • より高感度で信頼性の高い結果−主要なマイコプラズマ（70種）を検出可能
  • 検出限界は 10 CFU/mL
  • E.P. 2.6.7 と同様の KFDA テストガイダンスに従って検証済み

構成内容

e-Myco™ VALiD マイコプラズマ PCR 検出キット

  • e-Myco™ VALiD マイコプラズマ PCR プレミックス
    48tubes PCR チューブに下記試薬が凍結乾燥状態で真空包装されています。
    • Taq DNA ポリメラーゼ
    • dNTPs
    • マイコプラズマプライマー
    • インターナルコントロール
    • 8-MOP
  • コントロール DNA
  • DNase/RNase フリー水
 

プロトコール

プロトコール

使用例

■ 特異性試験

図1 本キットを用いた特異性試験

図1 本キットを用いた特異性試験
内部コントロール（約 180 bp）、および、ターゲットバンド（約 270 bp）の両方が検出された（レーン1）。しかし、ネガティブコントロール（レーン2〜7、マイコプラズマ以外の細菌ゲノムDNA）、および、テンプレートなしコントロール（レーンN）では、内部コントロールのバンドのみが検出された。

レーンM: SiZer™-100 DNA マーカー
レーン1: Mycoplasma hyorhinis
レーン2: Clostridium perfringens
レーン3: Streptococcus mutans
レーン4: Lactobacillus plantarum
レーン5: Mobiluncus mulieris
レーン6: Gardnerella vaginalis
レーン7: Haemophilus ducreyi
レーンN: テンプレートなしコントロール

■ 感度

図2 本キットの感度

図2 本キットの感度
6種類のマイコプラズマ由来のゲノム DNA を精製し、DNA のコピー数による感度を検討した。

レーンM: SiZer™-100 DNA マーカー
レーン1: 1×10ˆ6 cfu/mL ゲノム DNA
レーン2: 1×10ˆ5 cfu/mL ゲノム DNA
レーン3: 1×10ˆ4 cfu/mL ゲノム DNA
レーン4: 1×10ˆ3 cfu/mL ゲノム DNA
レーン5: 1×10ˆ2 cfu/mL ゲノム DNA
レーン6: 10 cfu/mL ゲノム DNA
レーン7: 1cfu/mL ゲノム DNA
レーンN: テンプレートなしコントロール

検出できるマイコプラズマ種

由来
種類 由来 種類 由来
A 細胞培養 J げっ歯類
B ヒト K イヌ
C 霊長類 L ピューマ
D ウシ M ライオン
E ブタ N アシカ
F トリ O ゾウ
GO ブドウ P ミンク
H ヤギ Q イグアナ
I ウマ R 昆虫
PCR 産物サイズ
種類 PCR 産物サイズ
I 264 〜 266 bp
II 268 bp
III 269 bp
IV 270 bp
V 271 bp
VI 272 bp
VII 276 bp
VIII 277 bp
 
マイコプラズマ 由来 PCR 産物サイズ マイコプラズマ 由来 PCR 産物サイズ
A. granularum E I M. hominis A III
A. laidlawii A/D II M. hyopharyngis E 270
A. oculi G I M. hyorhinis A/E 272
M, gallopavonis F III M. Hyosynoviae K III
M. adleri H 270 M. Iguanae Q 270
M. agalactiae G 270 M. Indiense C III
M. alkalescenns D 270 M. Iners F III
M. alvi D 276 M. Iowae F 277
M. anseris F III M. Leocaptivus M II
M. arginini A/B 270 M. Leopharyngis M III
M. arthritidis J 270 M. Lipofaciens F 270
M. auris G 270 M. Lipophilum B 270
M. bovigenitalium D 270 M. maculosum K III
M. bovirhinis D 271 M. Meleagridis F III
M. bovis D 270 M. Moatsii C 270
M. buccale B III M. mustelae P II
M. buteonis F II M. opalescens K 270
M. californicum D III M. orale A III
M. canadense D 270 M. oxoniensis J II
M. caviae J 270 M. penetrans B 277
M. citelli J II M. phocirhinis N 270
M. cloacale F III M. pirum B 276
M. columbinasale F III M. pneumoniae B 276
M. columbinum F 270 M. primatum C 270
M. cricetuli J II M. pulmonis J 271
M. elephantis O 270 M. salivarium A III
M. equigenitalium I 270 M. simbae M 270
M. equirhinis I III M. spermatophilum B III
M. falconis F 271 M. sphenisci F 272
M. faucium A II M. spumans K 270
M. felifaucium L III M. sualvi K 270
M. fermentans A 270 M. subdolum I 270
M. gallinarum F 270 M. synoviae F II
M. gateae K 270 M. verecundum D II
M. glycophilum F II M. zalophi N 270
M. gypis F 270 M. zalophidermidis N 270
参考文献
  1. Santer et al., C1q Deficiency Leads to the Defective Suppression of IFN-α in Response to Nucleoprotein Containing Immune Complexes, J Immunol., 2010, 185(8), 4738–4749.
  2. J.-L.Ku et al., Establishment and characterization of 13 human colorectal carcinoma cell lines : mutations of genes and expressions of drug-sensitivity genes and cancer stem cell markers, Carcinogenesis, 2010, 31(6), 1003–1009.
  3. Pettersson et al., Sequence Analysis of 16S rRNA from Mycoplasmas by Direct Solid-Phase DNA Sequencing, Appl. Environ. Microbiol., 1994, 60 (7), 2456-2461.
  4. European Pharmacopoeia. 6.1, section 2.6.7 Mycoplasma; Revised January 2008.
  5. Guidance on the Validation of Nucleic Acid Amplification Tests for the Detection of Mycoplasmas, KFDA, Revised April 2012.

e-Myco™ VALiD マイコプラズマ PCR 検出キット

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格
e-MycoTM VALiD Mycoplasma PCR Detection Kit詳細データ INB 25239 48 TUBE
 ￥60,000

【関連商品】

特集：マイコプラズマ対策

マイコプラズマ対策：検出・除去・感染予防試薬

e-Myco™ シリーズ 選択ガイド

■ PCR法
品名 e-Myco™ e-Myco™ Plus e-Myco™ VALiD
品番 25235 25237 25239
共通の特長
  • 全ての試薬がプレミックス
  • 真空包装
  • 迅速な検出と簡単な検証
  • 8-MOP により PCR 産物のクロスコンタミネーションを防止
製品ごとの特長 49種のマイコプラズマを検出 8属209種以上の幅広いマイコプラズマを検出 70種のマイコプラズマ
（M.peumoniae, M.arginini, M.fermentans, M.hyorhinis, M.orale, Acholeplasmalaidlawii を含む）を検出
内在性コントロール：
結果の有効性を評価		 トリプルチェックシステム：
内在性コントロール、サンプルコントロール、ターゲットバンド		 E.P. 2.6.7 と同様の KFDA テストガイダンスに従って検証
12個の感染細胞／3.25 pg ゲノム DNA を検出 15個の感染細胞／6.3pg ゲノム DNA を検出 10 CFU/mL 以上のマイコプラズマを検出
■ リアルタイムPCR法
品名 e-Myco™VALiD-Q
品番 25245
特長 70種のマイコプラズマ
（M.pneumoniae、M.arginini、M.fermentans、M.hyorhinis、M.orale、A. laidlawii を含む）をリアルタイムPCRで検出
内在性コントロール、ポジティブコントロールで結果の有効性を評価
10 CFU/mL 以上のマイコプラズマを検出

商品は「研究用試薬」です。人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないように、十分ご注意ください。

※  表示価格について

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